原因不明复发性流产患者Th1/Th2型细胞因子、M-CSF、封闭抗体检查价值分析

亓 敏 曲芸芸

山东中医药大学第二附属医院检验科，山东济南 250001

复 发 性 流 产（recurrent spontaneous abortion，RSA）指的是连续2 次及2 次以上自然流产，发病率约1%～2%[1-3]。RSA 病因复杂，考虑与异常染色体、内分泌异常、生殖器官异常、免疫功能异常、感染因素、全身疾病、环境因素等有关，但仍有约50%的发病原因未明确，临床称为原因不明复发性流产（URSA）[4-5]。为此，我院选取近期收治的URSA 患者设定研究对象，观察Th1/Th2 型细胞因子、M-CSF、BA 的检测水平，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

临床资料采集2017 年10 月～2018 年10 月妇产科诊治的80 例URSA 患者（设观察组），选入标准：所有患者早期自然流产次数≥2 次，最后1次流产在1 年内，无生殖道畸形或感染，检查夫妻双方染色体均无异常，检查配偶精液均无异常，患者、家属知晓研究，自愿参加，签订同意书。排除标准：近期激素或免疫药物服药史，药物过敏，夫妻染色体异常，外伤流产或感染，生殖道疾病，男方精液异常等患者。年龄21 ～39 岁，平均（30.3±5.3）岁，孕次2 ～4 次，平均（3.01±0.11）次，流产次数3 ～5 次，平均（4.21±0.31）次。另取我院80 例正常妊娠女性（设正常妊娠组），年龄20 ～37 岁，平均（30.2±4.6）岁，孕次1 ～3 次，平均（2.45±0.32）次，孕周5 ～18 周，平均（10.43±0.56）周。两组一般资料比较差异无统计意义（P ＞0.05），具有可比性。本院伦理会同意该项研究。

1.2 方法

1.2.1 仪器与试剂 流式细胞仪（BDFACS Calibur）、Th1/Th2 亚群检测试剂盒（杭州赛基生物科技有限公司）、ELISA 试剂盒及配套酶标仪（美国Pierce 公司）、流式细胞仪（贝克曼FC500 型号）及配套试剂盒。

1.2.2 采集与检测 两组分别采集空腹状态静脉血3mL，静置1h，3000r/min，离心10min，取血清液，保存-20℃冰箱内待检。两组均选用BDFACSCalibur流式细胞仪，行流式荧光法测定Th1/Th2 型细胞因子水平；选用ELISA 试剂盒及配套酶标仪测定M-CSF 水平。另外，在测定BA 时，取男方空腹状态静脉血2mL，置于EDTA 抗凝试管内，选用贝克曼FC500 型号流式细胞仪及配套试剂测定BA 封闭效率。所有操作均按说明书严格执行。

1.2.3 治疗方法 观察组施予淋巴细胞免疫疗法治疗，先提取患者配偶淋巴细胞，取2mL 静脉血，装至肝素无菌试管内，摇匀，加Hank 液2mL 稀释，摇匀。吸管吸取稀释血液加至淋巴细胞分离液2mL的试管内，稀释血液与分离液形成分界后，离心处理，2000r/min，20min 离心，平口吸管吸取淋巴细胞层，Hanks 液清洗2 次，1500r/min，10min 离心，取上清，加至1mL 的RPMI-1640 培养液中，摇匀，取少量测定活性、细胞计数。然后，给予0.9%氯化钠液稀释淋巴细胞层至（2 ～3）×107个/mL，经皮下为患者注入1.2mL，每15 天注射1 次，3 次为1 疗程。1 疗程后，若患者检查封闭抗体显阴，则再行第2 疗程治疗，待抗体显阳后，考虑6 个月内妊娠。

1.3 观察指标

观察两组Th1/Th2 型细胞因子[肿瘤坏死因子（TNF-α）、γ- 干 扰 素（INF-γ）、白 介 素-2（IL-2）、白介素-4（IL-4）、白介素-6（IL-6）、白介素-10（IL-10）]、M-CSF 水平变化及BA 阳性情况。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 两组患者Th1/Th2型细胞因子及M-CSF检测情况

观察组治疗后正常妊娠的TNF-α、INF-γ、IL-2 水平低于治疗前，IL-4、IL-6、IL-10 及M-CSF水平高于治疗前，差异有统计学意义（P ＜0.05），观察组治疗前、治疗后URSA 的TNF-α、INF-γ、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10 及M-CSF 水 平 差 异 有统计学意义（P ＜0.05），观察组治疗后URSA 的TNF-α、INF-γ、IL-2 均高于正常妊娠组、治疗后正常妊娠，IL-4、IL-6、IL-10 及M-CSF 水平均低于正常妊娠组、治疗后正常妊娠，差异有统计学意义（P ＜0.05），见表1。

2.2 两组患者BA阳性情况比较

观察组治疗前BA 阳性率11.25%比正常妊娠组85.00%低，差异有统计学意义（P ＜0.05），观察组治疗后URSA 的BA 阳性率52.50%低于正常妊娠组85.00%、治疗后正常妊娠87.50%，差异有统计学意义（P ＜0.05）。

3 讨论

近几年，临床关于URSA 与免疫学因素之间的关系展开大量研究。临床研究表示，在细胞免疫中，Th1 细胞是CD4 阳性细胞，主要分泌TNF-α、IFN-γ 及IL-2 等，负责参与细胞免疫调节，帮助细胞毒性T 细胞分化，引导细胞免疫应答，强化吞噬细胞引发的抗感染免疫，尤其是抗胞内病原体感染；而Th2 细胞主要释放IL-4、IL-6 及IL-10 等因子，抵抗细胞外因多细胞寄生虫所致免疫反应，生成抗体，避免组织损伤过度；Th1 型细胞与Th2 型细胞之间的免疫应答互相抑制，相互制约，以促进免疫平衡[6-7]。在正常妊娠过程中，Th2 型细胞在母体中占主导地位，Th1 型细胞的表达性较低，免疫应答偏离Th1 型细胞，而Th1 型细胞分泌因子以TNF-α、IFN-γ 及IL-2 等为主，与组织损伤、炎症反应密切相关，起着免疫杀伤作用，能阻止胚胎着床，促进细胞增长，Th2 型细胞则多产生IL-4、IL-6 及IL-10 等因子，对免疫、炎症产生抑制，生成抗体，能发挥免疫耐受、免疫营养的作用[8-10]。因此，Th1/Th2 型细胞因子在正常妊娠中转化为Th2 型细胞因子，能保护胚胎介导的母体免疫应答，故有助于妊娠保持正常。在本次研究中，观察组治疗前的TNF-α、INF-γ、IL-2 均比正常妊娠组水平高，IL-4、IL-6、IL-10 均比正常妊娠组水平低，观察组治疗后正常妊娠的TNF-α、INF-γ、IL-2 低于治疗前水平，IL-4、IL-6、IL-10 高于治疗前水平；这与黄俊生等[11]研究结果相似。由此可知，Th1/Th2型细胞因子平衡失调时，并偏移Th1 型细胞因子，则易出现流产，经免疫治疗后，偏向Th2 型细胞因子，则能避免流产。另外，本研究显示：观察组治疗前M-CSF 比正常妊娠组水平低，观察组治疗后正常妊娠的M-CSF 高于治疗前水平；提示M-CSF 水平低，亦是造成流产原因之一。M-CSF 水平过低，能增殖滋养层，并抑制其分化，故而引起流产；反之，水平升高，则有利于胚泡黏附，促使妊娠维持正常，降低流产几率[12-13]。BA 属于IgG 类抗体，是母体免疫系统遭受滋养层、白细胞抗原及淋巴细胞交叉反应抗原等刺激所产生，能结合母体淋巴细胞、胎儿滋养叶抗原，阻止母体免疫系统识别、杀伤胚胎父系抗原，用于保护胎盘，保持正常妊娠[14-16]。本研究显示：观察组治疗前BA 阳性率11.25%比正常妊娠组85.00%低，观察组治疗后正常妊娠的BA阳性率87.50%高于治疗前11.25%；表明URSA 与封闭抗体缺少相关。

表1 两组患者Th1/Th2型细胞因子及M-CSF水平比较（pg/mL）

表1 两组患者Th1/Th2型细胞因子及M-CSF水平比较（pg/mL）

注：与正常妊娠组比较，aP ＜0.05；与同组治疗前比较，bP ＜0.05；与治疗后正常妊娠比较，cP ＜0.05

组别 Th1/Th2类型细胞因子 M-CSF TNF-α INF-γ IL-2 IL-4 IL-6 IL-10正常妊娠组（n=80） 1.13±0.02 3.02±1.08 2.53±1.25 26.49±8.90 21.35±7.45 10.32±3.87 143.56±6.34观察组 治疗前（n=80） 26.20±10.25a 26.86±7.43a 24.36±8.13a 2.09±0.98a 4.12±1.03a 1.23±0.35a 87.78±9.31a t 21.876 28.400 23.737 24.374 20.491 20.923 44.293 aP ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05治疗后妊娠正常（n=64）2.36±1.04b 2.99±0.95b 2.87±1.16b 29.79±7.44b 28.79±6.54b 12.98±4.23b 140.98±4.23b t 20.696 28.502 23.405 33.015 33.328 24.760 46.532 bP ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05治疗后URSA（n=16）27.69±8.96ac 28.16±5.25ac 25.76±8.56ac 2.19±0.86ac 4.09±1.14ac 1.35±0.33ac 89.77±8.68ac t 26.513 41.951 24.018 24.307 20.483 20.656 44.759 aP ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 t 25.116 42.196 23.700 32.960 33.278 24.517 47.436 cP ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

总结上文，URSA 与Th1/Th2 型细胞因子、M-CSF、封闭抗体存在密切联系，Th1/Th2 型细胞因子失调、M-CSF 水平降低、封闭抗体缺少均能引起流产。