可溶性纤维水平和n-6、n-3多不饱和脂肪酸比例对生长兔消化和健康的影响

安芳芳，徐端红

（河南农业职业学院，河南郑州 451450）

关于降低家兔流行性肠病的营养策略是减少粗蛋白质在回肠流动或日粮蛋白水平及提供可溶性纤维水平（Chamorro 等，2007）。另一种对兔子健康有积极影响的策略是断奶后限制采食量。但在生产实际中将这些营养策略或饲养策略结合似乎都不能完全控制发病率，或在长时间将死亡率降到10% 以下。因此，为了降低断奶后死亡率，寻找其他可能与这些策略相互作用的营养因素仍然很重要。日粮脂肪来源直接影响免疫细胞的组成和功能，考虑到多不饱和脂肪酸n-6 和n-3对炎症过程的拮抗作用，脂质对免疫反应的影响在很大程度上是可变的（Anderson 和Fritsche，2002）。因此，日粮需要一个均衡的n-6/n-3 多不饱和脂肪酸比例，以确保对病原体的最佳免疫反应。Casado 等（2013）报道了日粮使用亚麻籽使n-6/n-3 从5.9 降低到0.8 对死亡率的积极影响。因此，本研究旨在评价降低n-6/n-3 多不饱和脂肪酸比值是否能改善家兔消化功能和健康，并研究其是否与日粮可溶性纤维水平具有协同作用。

1 材料与方法

1.1 试验日粮与动物试验设计 试验日粮采用2×2 共4 组设计，即在干物质基础上采用高水平可溶性纤维（130 g/kg）和低水平可溶性纤维（78 g/kg）和两种不同的n-6/n-3 脂肪酸比例（13.4 ：1 和3.5 ：1）（表1）。试验1 选择518 只26 d 断奶的肉兔，在185 个笼子中饲养，每个笼子关2 或3 只兔，从断奶当天（26 d）到39 d 饲喂试验日粮，在整个试验过程中记录死亡率。试验2 选择830 只肉兔在286 笼子中饲养，每个笼子关2 或3 只兔。断奶前母兔和仔兔均饲喂试验日粮，断奶后仔兔饲喂育肥日粮，记录死亡率。试验3 选择断奶体重为（450±52）g 的26 d 肉兔56 只，分为4 组，分别饲喂试验日粮，采用Gomez-Conde等（2011）的方法将家兔分别置于代谢笼中，记录39 ～42 d 干物质摄入量和粪便总排出量，样品用于测定常规养分含量及粘蛋白含量。试验4 选择224 只26 d 断奶肉兔，分为4 组，每组56 只，分别饲喂试验日粮。试验第39 日龄时取全部胃肠道称重，分离胃、盲肠（测定内容物pH）、肝，称重数据用于计算相对重量。空肠和盲肠样本切成2 cm 左右，生理盐水冲洗后-80℃保存用于RNA提取。

表1 试验日粮组成及营养水平 g/kg

1.2 免疫相关基因表达测定 参考Ipharraguerre（2013）的研究方法测定白细胞介素（2、4、8 和10）、一氧化氮合酶、干扰素-γ（IFN-γ）、过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR-γ）、Toll 样受体（TLR-2，TLR-4）以及粘蛋白（MUC-1 和MUC-13）基因的mRNA 相对表达水平。

1.3 统计分析

试验设计中的主因素是可溶性纤维水平以及n-6/n-3 多不饱和脂肪酸比值，各组数据采用SAS 软件多因素方差模型进行分析，组间平均数的差异性用Tukey 法进行判定，P ＜0.05 表示显著差异。

2 结果与分析

2.1 对生长性能的影响 由表2 可知，试验1中肉兔的死亡率平均为24.5%。生长第一阶段饲喂高可溶性纤维的肉兔死亡率下降26%（P＜0.05）。试验2 中流行性兔肠病引起的死亡率平均为34.7%，断奶前饲喂处理组日粮和在整个生长期间饲喂商品饲料组之间无显著差异（P ＞0.05）。最 后，试 验4 在26 ～39 d 时 流 行 性 兔肠病的平均死亡率为8.1%。高可溶性纤维饲料组死亡率较低可溶性纤维组显著降低87%（P＜0.05）。而n-6/n-3 对死亡率无显著影响（P ＞0.05）。

由表3 可知，各组日粮对生长期肉兔39 d 体重和日增重无显著影响（P ＞0.05）。但高水平可溶性纤维组肉兔采食量下降8%，显著提高了饲料效率（P ＜0.05），n-6/n-3 降低有增加采食量的趋势（P=0.059）。

2.2 对回肠和粪养分表观消化率的影响 由表 4 和表5 可知，各处理对回肠和粪干物质消化率无显著影响（P ＞0.05）。可溶性纤维水平的升高有提高回肠淀粉表观消化率和降低回肠淀粉流量的趋势（P=0.06），但显著降低粪便表观消化率（P ＜0.05）。随着可溶性纤维水平的增加，回肠纤维消化率提高1 倍，粪便消化率提高40%（P＜0.05）。日粮n-6/n-3 降低显著降低了低可溶性纤维组粪便纤维的消化率（P ＜0.05）。日粮可溶性纤维水平升高，回肠粘蛋白浓度和流量提高17%（P ＜0.05），但对粪便粘蛋白排泄量无显著影响（P ＞0.05）。n-6/n-3 降低显著降低了空肠粘蛋白含量（P ＜0.05）。

表2 日粮可溶性纤维水平和脂肪酸类型对生长期肉兔死亡率的影响 %

表3 日粮可溶性纤维水平和脂肪酸类型对生长期肉兔生长性能的影响（试验4）

表4 日粮可溶性纤维水平和脂肪酸类型对生长期肉兔回肠表观消化率的影响（试验4）

表5 日粮可溶性纤维水平和脂肪酸类型对生长期肉兔粪表观消化率的影响（试验3）

2.3 对器官相对重量和盲肠pH 的影响 由表6可以看出，与低可溶性纤维高n-6/n-3 日粮组相比，肉兔饲喂低可溶性纤维低n-6/n-3 日粮使整个消化道的相对重量降低10%，主要是由于胃和盲肠相对重量显著降低（P ＜0.05）。高可溶性纤维日粮组较低可溶性纤维日粮组肝脏相对重量降低6%（P ＜0.05）。与低可溶性纤维高n-6/n-3 日粮组相比，其他3 组盲肠pH 降低10%（P＜0.05）。

2.4 对免疫相关基因表达的影响 由表7 可知，日粮可溶性纤维水平和n-6/n-3 对盲肠IL-8 基因mRNA 相对表达水平的影响具有显著交互作用（P ＜0.05），其中低可溶性纤维低n-6/n-3 组表达量显著降低（P ＜0.05）。日粮可溶性纤维水平和n-6/n-3 对IL-6 基因mRNA 相对表达水平的影响具有显著交互效应趋势（P=0.09）。低可溶性纤维日粮较高可溶性纤维日粮组显著提高回肠MUC-13 和一氧化氮合酶基因mRNA 相对表达水平（P ＜0.05）。日粮n-6/n-3 降低显著提高了增回肠IL-2、IL-10、IFN-γ 和TLR-2 基因mRNA 相对表达水平（P ＜0.05）。

表6 日粮可溶性纤维水平和脂肪酸类型对生长期肉兔器官相对重量的影响（试验4）

表7 日粮可溶性纤维水平和脂肪酸类型对生长期肉兔免疫相关基因表达的影响（试验4）

3 讨论

营养策略已被证明可以降低由流行性肠病引起的幼兔断奶后的死亡率，其中使用足够的纤维来源和水平，以及在兔日粮中添加n-3 多不饱和脂肪酸已被证明可以降低死亡率（Trocino 等，2013）。在本研究中，随着日粮可溶性纤维水平的升高，断奶后肉兔死亡率降低，这与Trocino 等（2013）的研究结果一致。当可溶性纤维仅在断奶后阶段提供时，也得到类似结果，在育肥阶段仍保持积极作用。相比之下，断奶前日粮仅添加同等水平的可溶性纤维在断奶后并不足以产生预期效果。因此，本研究强调断奶后日粮对肉兔健康的重要影响，可能与断奶后盲肠菌群的变化有关。通过增加日粮C18 ：3n-3 水平降低n-6/n-3对死亡率无显著影响，这一结果与Maertens 等（2005）的观察结果相似。日粮可溶性纤维对育肥期死亡率的积极影响可能与肠道功能或微生物菌群改变有关（Carabano 等，2008）。

饲喂高水平可溶性日粮的家兔回肠淀粉消化率提高，回肠淀粉流量减少，饲料效率提高，回肠淀粉消化率的增加表明小肠功能增强。粘蛋白在肠道保护中发挥重要作用，作为微生物的物理和化学屏障，并与免疫系统相互作用（Sheng 等，2013）。在胃肠道中跨膜粘液蛋白由上皮细胞表达，尽管其功能仍有待阐明，但与凝胶形成的粘液蛋白相比，它们似乎参与了肠细胞传感和信号传递（Johansson 等，2013）。本研究未观察到两种粘液蛋白在健康家兔阑尾中的表达差异。但在高可溶性纤维日粮组中，肉兔回肠MUC-13 基因表达下调，与此同时，促炎症一氧化氮合酶基因的表达较低，且对MUC-1 和促炎、抗炎的白细胞介素无显著影响。如果在流行性肠病条件下，可溶性纤维的有益作用可能是因为其通过MUC-13 在肠细胞中促进更好的免疫稳态的作用，但其在疾病受控条件下还有待测试，值得进一步研究。

尽管n-6/n-3 对断奶后死亡率、生长性能和回肠消化率无显著影响，但其可以与可溶性纤维产生交互作用，如含有n-3 脂肪酸，且可溶性纤维水平较低，降低IL-8 和IL-6 的表达，这与关于n-3 脂肪酸对降低疾病中促炎因子IL-8 和IL-6有益作用的信息一致（Calder，2003）。另一方面，无论日粮可溶性纤维水平如何，高水平n-3 脂肪酸提高回肠IL-2、IL-10、INF-γ、TLR-2 基因表达。考虑到n-3 脂肪酸的抗炎作用，这种结果似乎是矛盾的。但由于缺乏对促炎因子IL-6、IL-8和一氧化氮合酶的影响，且缺乏对死亡率的影响，因此不能排除严重疾病损害或炎症的影响。相比之下，低水平n-6/n-3 日粮中多不饱和脂肪酸总浓度越高抗氧化能力越弱。

4 结论

日粮可溶性纤维水平的提高改善了生长肉兔肠道健康，但在可接受阈值下并没有降低死亡率，而加入n-3 多不饱和脂肪酸对肠道健康无显著改善作用，同时它与日粮可溶性纤维对肉兔健康的影响没有协同作用。