蒲滑散对实验大鼠慢性肾衰的作用研究*

徐为公 徐 鹏 周立冬

(1.原中国人民武装警察部队医学院，现天津市阳权医疗器械有限公司，天津 300050)(2.天津市疾病预防控制中心，天津 300011)(3.天津市阳权医疗器械有限公司，天津 300050)

慢性肾功能衰竭(CRF)是指各种肾脏病导致肾脏功能渐进性不可逆性减退，直至功能丧失所出现的一系列症状和代谢紊乱所组成的临床综合征，简称慢性肾衰。CRF的终末期即为人们常说的尿毒症。它是国内外目前常见的一种难治的自身中毒性疾病。病人患病后若不积极治疗，存活期很少超过两年以上。尤其当发生在青壮年中，其进展速度更快，更易恶化致死，故又称为第二癌症。治疗CRF,可采用肾移植、血液透析(人工肾)、腹膜透析等。做肾移植手术，由于目前我国肾源严重不足，而且要求技术亦高、移植肾成活时间短、耗资高；采用透析(血液、腹膜)疗法，技术设备复杂，有一定的禁忌症、并发症。治疗CRF由于设备限制，耗资大，必须到医院进行治疗，给患者带来痛苦和不便。

蒲滑散是一组：由蒲灰、滑石等经生物工程方法制成的中药制剂。该组制剂来源于张仲景《伤寒论》中的蒲灰散和滑石白鱼散，在此基础上经过创新实践而形成的科学组方制剂。从《伤寒论》和《金匮要略》来看，通过肠道吸附，将有毒物质和水分排出体外，是我国古代医学的常用治法。

本实验采用Platt法诱发慢性肾衰大鼠模型，观察蒲滑散对血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、血钙(Ca)、血磷(P)、甲状旁腺素(PTH)、中分子物质(MMS)的作用，结果提示蒲滑散可明显改善肾功能，纠正高磷低钙血症，抑制PTH和MMS，说明蒲滑散是治疗尿毒症的有效方药之一，其改善患者的临床症状与降低慢性肾功能衰竭(CRF)毒素潴留有关。

1 材料与方法

1.1 实验动物

选用健康SD雄性大白鼠，体质量200 g左右,购自天津裕达实验动物养殖有限公司。实验动物生产合格证：SCXK(津)2016-0001。饲喂市售固体饲料，饮用水为自来水，自由饮水及摄食。

1.2 动物模型

动物模型制作：采用Platt法切除SD系雄性大白鼠5/6肾组织以制作肾衰模型，造模1周后抽血，根据血肌酐和尿素氮值分为模型组、蒲滑散组，每组大鼠8只。二组治疗前比较差异无显著性(P>0.05),以避免影响疗效的观察。

1.3 治疗方法

治疗方法：正常组、模型组以等体积自来水灌胃每天1次，蒲滑散组给药按5 g/kg体质量给药,约为人体的kg体质量20倍，溶于4 mL自来水制成混悬液灌胃，每日1次，共灌胃2个月。

1.4 观察及检测指标

造模后的大鼠于治疗前1 d，治疗后30 d各采血1次，测Scr、BUN，到第60天全部处死，取血清或血浆作Hb、RBC、Scr、BUN、Ca、P、PTH和MMS的测定，取肾脏进行苏木精-伊红(HE)染色及碘酸雪夫(PAS)染色,在200倍光镜下观察病理学变化。

1.5 统计方法

2 结果

2.1 蒲滑散对大鼠血Scr、BUN的影响

治疗前模型组与正常组相比，血Scr、BUN明显升高，差异有统计学意义(P<0.01)，说明CRF模型制作成功，第30天时蒲滑散显著降低血Scr，但对BUN疗效不明显，第60天时蒲滑散组与模型组相比血Scr、BUN显著降低,统计学上有显著性差异，见表1。

表1 蒲滑散治疗前后血Scr、BUN的变化CRF的疗效结果Table 1 The changes of Scr and BUN after treatment

注：与同组模型组相比aP>0.05,bP<0.05,cP<0.01
Note:Compared with the same model group of each indicatoraP>0.05,bP<0.05,cP<0.01

2.2 蒲滑散对大鼠PTH、Ca、P、MMS的影响

正常组正常值：PTH:(0.154±0.013)ng/L,Ca:(2.78±0.086)mmol/L，P:(2.288±0.27)mmol/L,MMS:(132.5±5.56)μg/L。蒲滑散组与模型组相比，各项指标均有明显好转，两组比较差异有显著性，见表2。

表2 蒲滑散治疗前后对大鼠PTH、Ca、P、MMS的作用变化Table 2 The changes of PTH、Ca、P and MMS after treatment of

注：与模型组相比aP<0.05,bP<0.01
Note:Compared with the same model group of every indicatoraP<0.05,bP<0.01

2.3 蒲滑散对大鼠Hb、RBC的影响

蒲滑散组与模型组相比，两组比较差异有显著性，蒲滑散对大鼠的Hb、RBC有明显的改善作用(P<0.05)，见表3。

表3 蒲滑散治疗前后蒲滑散对大鼠升高大鼠Hb、RBC的实验结果变化Table 3 The changes of Hb and RBC after

注：与模型组相比aP<0.05
Note:Compared with the same model group of each indicatoraP<0.05

2.4 蒲滑散对大鼠肾组织病理学的影响

在光镜下，应用HE染色[苏木精—伊红染色法(hematoxylin-eosin staining)，简称HE染色法]和PAS染色法[PAS染色法(Periodic Acid-Schiff stain)在组织学上，主要用来检测组织中的糖类。过碘酸把糖类相邻两个碳上的羟基氧化成醛基，再用Schiff试剂和醛基反应使呈现紫红色]。

观察：模型组残肾肉眼体积明显增大、肿胀，镜检肾小球21个，呈代偿性肥大10个(50%)，病变16个(80%)，其中局灶阶段性硬化8个(40%)，硬化区超过1/2界限4个(20%)，新月体形成6个(30%)；肾小球基底膜明显增厚，肾小球囊腔明显扩张，囊壁增厚，曲管管径明显增大，管壁变性，有大量蛋白管型形成，间质增宽，纤维增生，有大量炎症细胞浸润。而蒲滑散组残肾病变较模型组明显减轻，镜检肾小球20个，呈代偿性肥大8个(40%)，病变11个(50%)，其中局灶节段性硬化5个(25%)，硬化区超过1/2界限2个(20%)，新月体形成2个(10%)；肾小球基底膜增厚明显减轻，肾小球囊腔扩张不明显，囊壁变薄，曲管管径稍增大，管壁变性不明显，无管型可见，间质稍增宽，纤维轻度增生，可见有少量炎症细胞浸润。

图1 正常大鼠肾脏Fig.1 Normal rat kidney

图2 模型组大鼠肾脏Fig.2 Kidney of model groups

图3 蒲滑散组大鼠肾脏Fig.3 Kidney of Puhuasan group

3 讨论

从中西医结合的角度分析，慢性肾功能衰竭一般被认为是机体免疫功能紊乱、血色素、血红细胞明显下降，这些均属于血气“虚衰”的表现，而机体代谢产物(尿毒症毒素)蓄积等均隶属中医“实”的范畴。本实验结果表明，表3中蒲滑散能显著提高大白鼠血Hb、RBC，可以推测其补益脾肾，调补气血，确实可促进慢性肾功能衰竭动物血色素，红细胞的提高。与此同时，蒲滑散还能显著降低Scr、BUN的含量。

慢性肾功能衰竭进行性发展的原因是多方面的，如有效肾单位学说、肾小球高滤过率学说以及肾小管高代谢学说等[1-3]。但是无论何种原因引起的终末期肾脏疾病的，其肾组织改变常具有某些共性，其基本形态学特点主要有两大类：其一，肾小球毛细血管由于系膜区增宽而受压闭塞。系膜区增宽包括系膜细胞增生、细胞外基质堆积和单核细胞积聚。其二，肾小管间质病变也同样包括间质纤维化、细胞外基质堆积和单核、淋巴细胞浸润三个环节。本动物实验显示模型组肾小球数量明显减少，有效肾单位减少，肾小囊壁层基底膜增厚，以致肾小球滤过率降低。用蒲滑散治疗的动物的肾小球数量较造型组明显增多，接近正常，肾小囊壁层基底膜增厚减轻，由于有效肾单位数量增多，提高了肾小球滤过率从而使血中各种代谢产物、毒性物质得以排出。肾近曲小管刷状缘能重吸收全部葡萄糖、氨基酸、蛋白质、维生素等。吸收绝大部分钾离子、钙离子和无机磷。模型组肾小管细胞对PAS反应降低，说明肾小管的刷状缘受到严重破坏，从而影响肾小管的重吸收功能。蒲滑散组的肾小管细胞对PAS反应明显增强，说明肾小管的刷状缘功能良好，使各种营养成分不致丢失，而起到“扶正”的作用。

PTH是尿毒症最重要的大分子毒素物质之一。据报道，PTH过高可引起骨性营养不良、皮肤瘙痒、贫血、蛋白消耗及肾小管损害等一系列症状。目前国内外以控制蛋白摄入及低磷饮食疗法研究报道甚多。肾小球滤过率下降，使血磷上升，Ca、P沉积于肾组织，进一步使得肾小球滤过率下降，形成了新的循环，为了阻止这一恶性循环，限制磷的摄入是十分关键的，目的是降低血磷。笔者应用蒲滑散治疗后，能明显降低血清PTH及血磷，并明显升高血钙，清除MMS，对延缓肾功能恶化有重要作用，其作用机理可能是通过减轻MMS、PTH毒性作用，它是否进一步减轻各组织中钙含量、调整细胞内外钙比例、恢复细胞膜通透性和细胞功能，尚待进一步研究。