子宫内膜癌中β-内酰胺丝氨酸样蛋白的表达及临床意义

杭晨，印永祥，赵华，张金秋，蒋新颜

(南京医科大学附属无锡妇幼保健院1. 妇科，2. 病理科，3. 放射科，江苏 无锡 214002)

根据病因和临床病理特征，子宫内膜癌可主要分为Ⅰ型和Ⅱ型[1]。Ⅰ型通常是依赖于雌激素的子宫内膜样腺癌，占所有子宫内膜癌的80%；Ⅱ型占20%，代表分化和预后较差的肿瘤类型[2-3]。β-内酰胺丝氨酸样蛋白(Beta-lactamase-like protein，LACTB)是来自线粒体核糖体大亚基的39 S蛋白质，抑制乳腺癌细胞增殖，其作用机制涉及改变线粒体脂质代谢和乳腺癌细胞的分化[4]。但LACTB在子宫内膜癌发生发展过程中的作用尚不清楚，本文旨在初步探讨LACTB在子宫内膜癌中的表达及其与患者临床病理参数之间的联系。

1 对象与方法

1.1 病例

收集2014年1月至2016年12月于南京医科大学附属无锡妇幼保健院因子宫内膜病变行子宫切除术的89例子宫内膜癌患者子宫组织的存档蜡块。患者术前均未接受辅助放疗、化疗或激素治疗，且术前肝肾功能正常，术后常规病理确诊。其中，≥50岁58例，<50岁31例。年龄36～75岁，中位年龄55.6岁。选择同期因非子宫内膜因素切除子宫且术后病理证实为正常子宫内膜的21例存档蜡块作为对照组，年龄38～65岁，中位年龄54.5岁。本研究经过医院伦理委员会批准和患者知情同意。

根据国际妇产科联合会子宫内膜癌的分类，将子宫内膜样腺癌Ⅰ级和Ⅱ级归类为Ⅰ型子宫内膜癌，透明细胞、浆液性、黏液性癌和子宫内膜样子宫内膜癌Ⅲ级归类为Ⅱ型子宫内膜癌；其中Ⅰ型64例和Ⅱ型25例。临床分期Ⅰ～Ⅱ期71例，Ⅲ～Ⅳ期18例。

1.2 免疫组织化学法检测子宫内膜组织中LACTB的表达

兔抗人多克隆抗体浓缩型LACTB(1 ∶1 600)为美国Proteintech公司产品；兔抗人单克隆抗体雌激素受体(etrogen receptor，ER)、兔抗人单克隆抗体孕激素受体(progesterone receptor，PR)即用型抗体购于福州迈新生物技术开发有限公司。基于聚合物的免疫组织化学二抗检测系统(EnVision)采用丹麦DAKO公司的HRP标记的抗兔/鼠IgG产品。

将存档石蜡组织行5 μm切片，二甲苯脱蜡，无水乙醇、95%乙醇、80%乙醇梯度水化；采用柠檬酸盐缓冲液(pH=6.0)行热抗原修复，高压锅加热喷气2.5 min；室温冷却30 min；流水冲洗至室温；0.3%过氧化氢室温孵育10 min；PBS冲洗；滴加一抗室温孵育60 min；PBS冲洗3次；滴加二抗室温孵育20 min；PBS冲洗3次；抗原抗体复合物用DAB显色10 min，苏木精复染1 min；以PBS代替一抗作为阴性对照。

1.3 免疫组织化学结果判断

采用双盲法对免疫组化结果行半定量评分。LACTB蛋白表达阳性为细胞质中呈棕黄色。着色强度评分：无着色0分，淡黄色1分，棕黄色2分，棕褐色3分；着色范围以阳性细胞所占百分比评分：无阳性细胞计0分，阳性细胞≤25%计1分，26%～50%计2分，>50%计3分；着色强度评分与着色范围评分之积取其平均数，>2分为阳性，≤2分为阴性。

ER、PR蛋白阳性为细胞核中呈棕黄色，阳性细胞数>10%即为阳性。

1.4 利用Kaplan-Meier Plotter数据库及其自带软件对子宫内膜癌患者行生存分析

设定条件： ① 肿瘤，子宫内膜癌； ② 基因：LACTB，患者分割方法(“split patients by”)，自动选择最佳截止值； ③ 生存，总生存期或无进展生存期。根据设定的条件，默认选择基因表达值和生存信息完整的数据纳入分析。

1.5 统计学分析

采用SPSS 17.0统计软件对数据进行统计分析。计数资料组间比较采用Pearsonχ2检验，组间生存时间的比较采用Log-Rank法。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 LACTB、ER和PR蛋白在子宫内膜癌组织中的表达

免疫组织化学染色结果显示，子宫内膜癌组织中LACTB蛋白阳性表达率(50.30%，51/89)明显低于正常子宫内膜组织(90.47%，19/21，χ2=5.866，P<0.05)。子宫内膜癌组织中ER阴性17例，ER阳性72例；PR阴性20例，PR阳性69例。见图1和图2。

图1 LACTB在子宫内膜组织中的表达(×200)

图2 ER和PR在子宫内膜癌组织中的表达(×200)

2.2 子宫内膜癌组织中LACTB表达与患者临床病理参数间的关系

子宫内膜癌组织临床分期Ⅰ～Ⅱ期LACTB蛋白表达率明显高于Ⅲ～Ⅳ期(P<0.05)；其表达与年龄分组无关(P>0.05)；Ⅰ型子宫内膜癌LACTB蛋白表达率低于Ⅱ型子宫内膜癌，但差异无统计学意义(P>0.05)。与ER阳性相比，ER阴性组LACTB蛋白阳性表达率明显增加(P<0.05)；与PR阳性相比，PR阴性组LACTB蛋白阳性表达率也明显增加(P<0.05)。见表1。

表1 子宫内膜癌组织中LACTB表达与患者临床病理参数间的关系 例(%)

2.3 子宫内膜癌组织中LACTB蛋白表达与患者预后的关系

在线数据进行生存分析结果显示，子宫内膜癌患者LACTB阳性组总生存期和无进展生存期高于LACTB阴性患者，但差异无统计学意义(P=0.29，0.32)。见图2。

图2 子宫内膜癌患者总生存期和无进展生存期生存曲线分析

3 讨论

研究显示，LACTB在不同肿瘤中呈低表达，包括乳腺癌、胶质瘤等，其通过抑制肿瘤细胞的增殖和侵袭转移发挥抑癌基因的作用[4-5]。本研究结果显示，LACTB阳性表达率在子宫内膜癌组织中显著降低，且随临床分期增加而降低。LACTB低表达可能促进子宫内膜癌增殖和侵袭转移。肝细胞癌和胶质瘤中LACTB低表达与不良预后相关[5-6]。我们通过用Kaplan-Meier Plotter 对在线子宫内膜癌数据库进行生存分析，发现LACTB阳性表达者预后优于阴性表达患者，但差异无统计学意义，LACTB表达可能与子宫内膜癌患者预后无关。

目前关于子宫内膜癌的形态学分型存在争论。根据Bokhman分类，将子宫内膜腺癌归为Ⅰ型，浆液性、透明细胞子宫内膜癌归为Ⅱ型[7]。也有定义Ⅱ型子宫内膜癌以浆液性或透明细胞组织学为特征，包括低分化癌肉瘤或未分化癌[8-9]。子宫内膜腺癌组织学Ⅲ级与子宫乳头状浆液性癌和透明细胞癌有相似的临床表现、免疫组织化学特征和预后不良，故认为子宫内膜腺癌组织学Ⅲ级最好归为Ⅱ型子宫内膜癌[10]。根据国际妇产科联合会的分类，我们将子宫内膜样腺癌组织学Ⅰ级和Ⅱ级归为Ⅰ型，透明细胞、浆液性、黏液性癌和子宫内膜腺癌组织学Ⅲ级归为Ⅱ型子宫内膜癌。结果显示，Ⅰ型子宫内膜癌LACTB蛋白阳性率低于Ⅱ型，但无统计学差异，有可能与标本量少、病例差异有关。有意思的是，我们发现与ER阳性组相比，ER阴性组LACTB蛋白阳性表达率明显增加；与PR阳性组相比，PR阴性组LACTB蛋白表达率也明显增加。有文献报道，雌激素在线粒体平衡中起重要作用，其以细胞特异性的差异表达和定位介导的直接和间接机制协调和整合细胞代谢和线粒体活性[11]。最新研究表明，雌激素可以对线粒体产生直接和间接作用，促进或保持病理环境下的线粒体功能[12]。由此说明，LACTB作为一种线粒体蛋白，其表达可能受雌激素调控。

综上所述，LACTB在子宫内膜癌中呈低表达，其低表达可能与临床分期、ER以及PR相关，提示LACTB低表达可能促进子宫内膜癌的临床进展。