八楞麻饮片质量标准研究

蒋健　曹玉　王贞媛　蒋小文

【摘 要】 目的：制定八楞麻饮片的质量标准。方法：参照《中国药典》2015年版相关方法，对八楞麻的性状、显微特征、薄层色谱、水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物进行研究;采用高效液相色谱法测定槲皮素含量。结果：薄层色谱斑点清晰，分离好，专属性强;八楞麻水分不得过14.0%，总灰分不得过10.0%，酸不溶性灰分不得过1.5%，浸出物不得少于6.0%，槲皮素平均含量为0.01805%。结论：根据实验结果建立了八楞麻饮片的质量标准，可用于八楞麻的质量控制。

【关键词】 八楞麻;质量标准;高效液相色谱法;槲皮素

【中图分类号】R282 【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2020）23-0040-04

Establishing Quality Standard of Saussureae Japonicae Herba

JIANG Jian CAO Yu WANG Zhenyuan JIANG Xiaowen

Nanjing Institute for Food and Drug Control， Nanjing 211122， China

Abstract：Objective To establish the quality standard of Saussureae Japonicae Herba.Methods Identification through microscope and TLC（thin-layer chromatography）， and determination of moisture， total ash， acid-insoluble ash， extract and content of quercetin were conducted to investigate the quality.Results TLC spots were clear， well-separated without interference and had a strong specificity. The moisture of Saussureae Japonicae Herba should be less than 14.0%， the total ash should be less than 10.0%， the acid-insoluble ash should be less than 1.5%， the alcoholic extract should be more than 6.0%. The average content of quercetin determined by HPLC（high performance liquid chromatography） was 0.01805%.Conclusion The quality standard of Saussureae Japonicae Herba was conformed to the state requirements of traditional Chinese medicinal examination， it can be used for quality control of Saussureae Japonicae Herba.

Keywords：Saussureae Japonicae Herba; Quality Standard; HPLC; Quercetin

八楞木又名八楞麻，青竹標，八面风，三棱草，为菊科植物风毛菊Saussurea japonica （Thunb.） DC. 的干燥地上部分，生于海拔1000～1800m的山坡草地、山谷草地或山脚路旁。分布于全国各地[1]。八楞麻饮片收载于《江苏省中药饮片炮制规范》2002年版，性辛、苦，平，具有祛风活血功效，用于风湿痹痛、跌扑损伤、麻风[2]。原质量标准仅有性状鉴别，无法有效控制饮片质量。本实验建立八楞麻饮片的性状、显微鉴别、薄层色谱鉴别、水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物方法，研究了含量测定方法，为进一步提高饮片质量标准提供依据。

1 仪器和试药

1.1 仪器 Olympus DP-12 显微数码摄影系统;CAMAG REPROSTAR 3 薄层成像系统（瑞士CAMAG公司）;KQ-250B 型超声清洗机（昆山超声仪器有限公司）;SHIMADZU LC-20AB 高效液相色谱仪;DiKMA Silversil C18（150mm×4.6mm，5μm）色谱柱;HH-4 数显恒温水浴锅（国华电器有限公司）;XS205 型天平（Mettler ToleDo公司）

1.2 试药 默克产硅胶G预制薄层板、青岛海洋化工厂产硅胶G预制薄层板;八楞麻对照药材（自制）;槲皮素对照品（批号：100081-201610，含量99.1%，105℃干燥2 h后使用。）购自中国食品药品检定研究院;甲醇为色谱纯，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。

八楞麻饮片均购自亳州药材市场，来源于广西、湖北，经江苏省中药饮片炮制规范修订专家组鉴定为风毛菊Saussurea japonica （Thunb.） DC. 干燥地上部分。见表1。

2 方法与结果

2.1 药材性状 本品为不规则的短段。茎、叶混合。茎圆柱形，具纵棱，有疏生腺点及细毛，切面类白色，有髓;叶多卷缩破碎，暗绿色，两面有腺点及细毛。气微，味苦。

2.2 显微特征 本品粉末棕色。非腺毛多见，常断裂，单细胞或多细胞，表面光滑或微波状，长约50～300μm。导管多为螺纹、网纹、梯纹及具缘纹孔导管。气孔不定式。分泌细胞含油滴。叶薄壁细胞含草酸钙簇晶，直径10～20 μm。纤维壁厚，多断裂，有点状纹孔。显微如图1所示。

2.3 薄层色谱鉴别 取本品粉末1g，加甲醇10mL，超声处理30min，滤过，取滤液作为供试品溶液。另取八楞麻对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2015年版四部 通则0502）试验，吸取上述两种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-丁酮（4∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。喷以10%硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，置日光及紫外光灯（365nm）下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点和荧光斑点。薄层色谱如图2所示。

2.4 水分测定照《中國药典》2015年版四部（通则0832水分测定法 第二法），测定五批样品，平均测定值为10.09%。根据《中国药典》2015年版四部（通则0212 药材和饮片检定通则），除另有规定外，饮片水分通常不得过13%，故规定水分不得过13.0%。结果见表2。

2.5 灰分测定 照《中国药典》2015年版四部（通则2302 灰分测定法），依法测定五批样品，平均测定值为7.26%。以平均测定值的120%设限，为8.7%，故规定总灰分不得过9.0%。结果见表2。

酸不溶性灰分  照《中国药典》2015年版四部（通则2302 灰分测定），法依法测定五批样品，平均测定值为0.71%，由于数据离散度大，故规定酸不溶性灰分不得过1.5%。结果见表2。

2.6 浸出物测定 照《中国药典》2015年版四部（通则2201浸出物测定法），采用热浸法，以75%乙醇为溶剂，测定浸出物。测定五批样品，平均测定值为9.53%，由于数据离散度大，以平均测定值的70%设限，故规定浸出物不得少于6.0%。结果见表2。

2.7 槲皮素含量测定

2.7.1 色谱条件 色谱柱：DiKMA Silversil C18（150mm×4.6mm，5μm）;流动相：甲醇-0.4%磷酸（40∶60）;流速：1.0mL;柱温：35℃;检测波长：370nm;进样量：10μL。

2.7.2 对照品溶液的制备 精密称取槲皮素对照品10.20mg，置100mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。

2.7.3 供试品溶液的制备 精密称取本品粉末（过二号筛）2g，置锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，加热回流30min，放冷，滤过，取续滤液10mL，置锥形瓶中，加盐酸溶液（15→37）5mL，摇匀，置90℃水浴中加热水解30min，立即冷却，转移至25mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.7.4 线性关系考察 精密吸取2.7.2项下对照品贮备液适量，制成槲皮素浓度分别为1.011、2.022、5.054、10.11、20.22、50.54、101.1μg·mL-1的对照品溶液，分别进样10μL，记录峰面积，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得到回归方程为：Y=4.289×104X-1.200×104，r=1.000。结果表明，槲皮素对照品浓度在1.011～101.1μg·mL-1范围内呈现良好的线性关系。

2.7.5 精密度试验 精密吸取2.7.4项下浓度为10.11μg·mL-1的对照品溶液10μL，连续进样6次，对照品溶液峰面积的RSD为0.59%，表明精密度良好。

2.7.6 稳定性试验 取同一批供试品（编号05）溶液，分别于0、3、6、12、24h进样10μL，按2.7.1项下色谱条件测定，峰面积的RSD为0.67%。表明供试品溶液在24h内稳定。

2.7.7 重复性试验 取同一批供试品（编号05），按2.7.3供试品溶液制备方法平行制备6份，按2.7.1项下色谱条件测定，计算槲皮素的含量，RSD为0.55%，表明重复性良好。

2.7.8 加样回收率试验 精密称取已知含量的八楞麻样品（编号05）9份，每份1.0g，置锥形瓶中，按低、中、高浓度分别精密加入对照品贮备液1.7mL、3.4mL、5.1mL，精密补足甲醇至25mL，照2.7.3项下方法制备供试品溶液，按2.7.1项下色谱条件测定 计算加样回收率，结果平均回收率为98.14%，RSD为1.61%。结果见表3。

2.7.9 样品测定 按2.7.3项下方法制备供试品溶液，按2.7.1项下色谱条件，对五批样品进行测定，结果按干燥品计算，槲皮素含量分别为0.02337%、0.003590%、0.01436%、0.01446%、0.03448%，平均值为0.01805%。由于样品批次少，含量测定结果离散性较大，故暂未收入标准，本试验为含量测定进一步研究提供参考。图谱如图3所示，结果见表4。

3 讨论

3.1 薄层色谱鉴别 在本实验研究中，对不同溶剂[甲醇、石油醚（60～90℃）、环己烷、乙酸乙酯]提取进行考察，结果显示甲醇提取简单方便，效果佳。经考察，供试品溶液在24h内点样，色谱图斑点清晰，重现性好。对不同薄层板（默克产硅胶G预制薄层板、青岛海洋化工厂产硅胶G预制薄层板）、不同展开系统[参考其他菊科来源饮片：环己烷-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）上层液、三氯甲烷-环己烷（5∶1）（木香）[3]62;环己烷-丁酮（4∶1）（漏芦）[3]370;石油醚（60～90℃）-丙酮（9∶2）（苍术）[3]161]进行实验，结果表明，本方法展开剂配制简单方便，薄层色谱斑点清晰丰富、分离效果好。本实验还针对不同温、湿度（t：4℃，RH：45%;t：30℃，RH：45%;t：18℃，RH：18%;t：18℃，RH：72%）等薄层条件进行了考察，结果表明，本薄层色谱实验耐用性好。

3.2 浸出物测定 分别采用不同浸出方法（冷浸法、热浸法）进行比较，不同浸出溶剂（水、稀乙醇、75%乙醇、乙醇）进行比较，结果采用热浸法，以75%乙醇为溶剂，测定浸出物。测定5批样品，平均测定值为9.53%，由于数据离散度大，以平均测定值的70%设限，故规定浸出物不得少于6.0%。

3.3 含量测定 八楞麻地上部分含挥发油、内酯、黄酮类、三萜类、木脂素等，具有抗炎、抗变作用[4]。八楞麻饮片用法为水煎（内服：煎汤，9～15 g;外用适量，煎水洗患处）[2]，因此考虑活性成分为水煎后较稳定的成分，故拟定黄酮类为含量测定指标。八楞麻含槲皮素-3-O-（6″-巴豆油酰基）-β-D-葡萄糖苷，山柰酚-3-O-（6″-巴豆油酰基）-β-D-葡萄糖苷，山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷，槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷等黄酮类[4]，甲醇提取物经酸水解后可得槲皮素和山柰素，经试验发现槲皮素含量较高，可用于含量测定。槲皮素对照品紫外光谱显示最大吸收为370nm，因此确定吸收波长为370nm。参考《中国药典》2015年版一部红花[3]151、金钱草[3]219含量测定项下槲皮素、山柰素提取方法，结果加盐酸溶液（15→37）5mL水解效果更优，因此确定本试验提取方法。同时考察了甲醇-水（40∶60）和甲醇-0.4%磷酸（40∶60）两个系统，二者差别不大，但甲醇-0.4%磷酸（40∶60）系统下槲皮素峰响应值更高，故以此为流动相。

4 结论

八楞麻为江苏地区使用药材，收载于《江苏省中药饮片炮制规范》2002年版，原质量标准仅有性状鉴别。本实验参照《中国药典》2015年版相关方法，对五批八楞麻饮片开展了性状、显微鉴别、薄层色谱鉴别、水分检查、灰分检查、浸出物测定等研究，结果表明该试验简便高效，重复性好，可操作性强，提高后的标准可用于八楞麻饮片的质量控制。本实验建立了高效液相色谱法测定八楞麻中槲皮素含量的方法，为八楞麻质量标准的进一步提高提供一定的科学依据。

参考文献

[1]国家中医药管理局中华本草编委会.中华本草（第7册）[M].上海：上海科学技术出版社，1999：930.

[2]江苏省药品监督管理局.江苏省中药饮片炮制规范[S].南京：江苏科学技術出版社，2002：223.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2015：62，370，161，151，219.

[4]南京中医药大学.中药大辞典（下册）[M].2版.上海：上海科学技术出版社，2006：31.

（收稿日期：2020-06-07 编辑：刘斌）

作者简介：蒋健（1982- ），女，汉族，本科，主管中药师，研究方向为中药分析。E-mail：jiangjane1982@sina.com