NRG1促进Wharton’sjelly间充质干细胞表达VEGF

赵永成，于 薇，任可馨，付 微，梁 军

（牡丹江医学院干细胞研究所，黑龙江 牡丹江 157011）

脐带Wharton’s jelly间充质干细胞（Wharton’s jelly mesenchymal stem cells，WJMSCs）被认为是理想的干细胞源[1]。但移植的细胞存在存活率低的问题。神经调节蛋白1（neuregulin-1，NRG-1）属于生长和分化因子家族，可参与血管新生[2]。在体外，BMP4可否通过上调WJMSCs表达血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF），进而促进血管新生改善细胞生存环境，未查见相关报道。

1 材料与方法

1.1 材料

人脐带（牡丹江红旗医院）；FBS、DMEM培养基（Hyclone）；NRG-1质粒（牡丹江医学院干细胞研究所）；ELISA试剂盒（Takara）；VEGF抗体（Sigma）。

1.2 方法

1.2.1 细胞提取

取剖腹产脐带，剪成直径约0.3 cm的组织块，用10%FBS-DMEM培养液培养组织块；每2 d换液一次；细胞融合至90%时传代。

1.2.2 实验分组

实验分为转染组和未转染组。

1.2.3 细胞转染

取第三代细胞，按Lipofectamine TM 2000说明书把VEGF质粒转染细胞。细胞转染3天后，进行VEGF检测。

1.2.4 ELISA检测

按ELISA试剂盒说明书检测上清液中VEGF的含量。用酶标仪在450 nm波长下检测样本OD值。

1.2.5 免疫荧光检测

4%多聚甲醛固定15 min后1%牛血清白蛋白封闭25 min；VEGF抗体孵育100 min；二抗孵育50 min；DAPI复染15 min。阳性率=红色荧光数／蓝色荧光数×100%。

1.3 统计学方法

统计分析采用SPSS 13.0软件，计量数据以±s表示，组间比较采用单因素方差，差异显著的判断标准为P＜0.05。

2 结 果

2.1 ELISA检测结果

如表1所示，转染组上清液VEGF的含量与对照组的比较，具有统计学意义。

表1 ELISA检测细胞培养上清液中VEGF的含量（ng/mL，n＝6）

2.2 免疫荧光检测结果

阳性细胞的胞质和突起呈红色荧光；经非特异性染色的细胞核呈蓝色荧光（图1）。转染组的阳性细胞表达率与对照组的比较，具有统计学意义（表2）。

图1 免疫荧光红色染色VEGF阳性细胞

表2 VEGF阳性细胞表达率（±s，n=6，%）

表2 VEGF阳性细胞表达率（±s，n=6，%）

注：★与未转染组比较， P＜0.05。

组别 VEGF未转染组 24.86±3.27转染组 93.47±4.23★

3 讨 论

NRG1可促进多种细胞表达VEGF。NRG1可使发育的心肌增强VEGF的表达[3]；还能增加VEGF在人冠状动脉平滑肌细胞中的表达[4]。在病理情况下，结肠癌患者的活检标本中，NRG1与VEGF表达呈正相关[5]。本研究发现，NRG1可促进WJMSCs表达VEGF。这些研究结果表明，NRG1可调控VEGF的表达，进而参与增生、抗凋亡和血管新生等多种生物学过程。

NRG1的配体是酪氨酸激酶（Erythroblastic leukemia viral oncogene homologs，ErbB）受体。NRG1∕ErbB信号不仅通过促VEGF表达途径[5]，还可通过直接作用血管内皮[2]和血管平滑肌[6]途径促进血管新生。