磺胺氯吡嗪钠-甲氧苄啶可溶性粉对鸡的安全性试验研究

吕凤霞，韩露，郭盛洋，李灵娟，刘联盟，卜仕金

(1. 河南牧翔动物药业有限公司，河南 郑州 451162；2. 河南省畜牧总站，河南 郑州 451162；3. 宽甸满族自治县农业农村发展服务中心，辽宁 丹东 118200；4. 扬州大学，江苏 扬州 225009；5. 江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心，江苏 扬州 225009)

鸡球虫病是鸡常见的急性流行性寄生虫病，在田间广泛存在，严重危害家禽养殖业的发展[1-2]。磺胺氯吡嗪钠是一种抗球虫药，在动物体内吸收快、分布广、维持时间长，且不影响宿主对球虫的免疫力，被广泛应用于鸡球虫病的治疗。但随着耐药性的增加，其临床效果逐渐不佳[3-4]。为解决球虫病市场需求问题，开发了新的抗球虫药组方，在磺胺氯吡嗪钠基础之上增加增效剂，提升治疗效果，以适应当下养殖情况。增效剂和抗寄生虫药联合应用，可有效减少药物用量，降低用药成本，具有广泛的市场前景。本试验通过提供有关磺胺氯吡嗪钠-甲氧苄啶可溶性粉在鸡的临床血液学、血液生化和组织病理学方面的数据，以确定磺胺氯吡嗪钠-甲氧苄啶可溶性粉在靶动物鸡的安全性，为临床安全用药提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 主要试剂

磺胺氯吡嗪钠-甲氧苄啶可溶性粉：含量规格为20%(磺胺)+4%(TMP)；批号为20150909。河南牧翔动物药业有限公司提供。用于控制鸡球虫病，临床推荐用法与用量为：混饮，每1 L饮水300 mg(以磺胺氯吡嗪钠计)，连用7 d。

瑞士染液、结晶紫染液、中性红染液，均购自上海士锋生物科技有限公司；冰醋酸购自国药集团试剂有限公司；蒸馏水，生理盐水，磷酸盐缓冲液，自制。

1.2 试验动物及饲养管理

1日龄的黄羽肉鸡，购自江苏省家禽研究所。试验前于动物房内适应型环境15 d，采用翅号随机编号及分笼识别。饲料委托江苏省家禽研究所养殖基地代加工，不含抗菌药物。受试鸡采用网上饲养，自由采食和饮水，每天清理鸡粪，鸡舍自然通风、保温。

1.3 动物分组与给药

挑选饲养至15日龄的健康黄羽肉鸡40只，体重分布在(200±5)g，随机分成4组。每组10只，公母各半。采用多剂量水平饮水给药进行靶动物安全性研究，其中各剂量组分别按0(0 mg/L)、1(300 mg/L，以磺胺氯吡嗪钠计)、3(900 mg/L，以磺胺氯吡嗪钠计)和5(1 500 mg/L，以磺胺氯吡嗪钠计)倍的推荐剂量混饮给药。连续饮水给药7 d。

1.4 评价指标

1.4.1 一般临床观察

试验期间每日对试验动物进行密切监控，以描述靶动物对药物有毒剂量产生的反应。具体观察项目取决于药物的已知特性和受试家禽的种类。观察并记录各组动物的一般临床状况，如死亡率情况、排便、饮水和采食情况等，主要指标如下：

(1)每日饮水量、摄食量。

(2)试验期间与药物有关的发病率和死亡率。

(3)试验期间动物增重和饲料转化，试验前和试验结束后各测定一次。

(4)对羽毛生长的影响，弄湿垫料以及其他不良反应。

1.4.2 临床病理学检测

给药7d结束后对每只鸡进行心脏采血2 mL，其中全血作血液学指标检验，检测参数包括红细胞计数(RBC)、白细胞(WBC)计数、血红蛋白(HGB)、血小板计数(PLT)、红细胞压积(HCT)等[5]；血清用作生化指标检测，检测参数包括总胆红素(TBIL)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、碱性磷酸酶(ALP)、谷氨酰胺基转移酶(GGT)、肌酐(CRE)、尿素氮(BUN)、葡萄糖(GLU)、总胆固醇(CHO)、血清淀粉酶(AMY)、钾、钠、氯、钙等指标[6]。

1.4.3 组织病理学检查

组织病理学检查方法：采集新鲜的心脏、脾脏、肺脏、肾脏、胃、小肠迅速用10%的福尔马林固定。经脱水、浸蜡、包埋后进行切片和贴片，用HE染色法，经脱蜡、脱苯、复水、染色、脱水、透明、固定后在显微镜40×10倍镜头下进行病理组织学检查。

1.4.4 脏器系数

根据每只鸡的体重及其主要脏器(包括心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏)的重量，计算各脏器的相对重量(脏器重与体重的比值)，即脏器系数。

1.4.5 数据处理

用SPSS22.0应用软件系统进行数据的显著性检验[7]。采用t检验比较各组间动物增重、血液学和血液生化学等各项指标的显著性差异，当P>0.05，表示差异不显著，当P<0.05，为差异显著。

2 结果

2.1 临床表现

整个试验期间，空白对照组和各剂量组中所有受试动物健康状况良好，未出现死亡；各组动物饮水和采食正常。在受试动物的饮水量上统计分析表明，空白组与1倍推荐剂量组、1倍推荐剂量组与3倍推荐剂量组、3倍推荐剂量组与5倍推荐剂量组间饮水量存在显著差异。1倍推荐剂量组与5倍推荐剂量组受试动物的饮水量明显高于空白组(1倍推荐剂量组与5倍推荐剂量组笼架靠油汀较近，可能影响饮水量的测量)，但都处于正常范围。试验各组的采食量及饮水量见表1。

检测指标空白组1倍剂量组3倍剂量组5倍剂量组采食量(g/羽/天)58.41±3.4854.80±10.8650.13±3.8958.42±2.98饮水量(mL/羽/天)76.86±9.4889.29±11.75*71.71±5.7780.43±7.46

注：*表示与空白组比较，差异显著(P<0.05)。下同

2.2 增重与饲料利用率

试验结束时各组平均增重及饲料利用率见表2。由表2可见1倍剂量组及3倍剂量组动物增重较对照组明显，5倍剂量组动物增重低于空白组，但统计学分析差异不显著(P>0.05)，料重比均在合理范围内。5倍剂量组受试动物的料重比大于1倍及3倍剂量组，提示磺胺氯吡嗪钠甲氧苄啶可溶性粉使用剂量过高时会影响动物的生长性能。

检测指标空白组1倍剂量组3倍剂量组5倍剂量组给药前每羽均重/g204.31±9.19200.43±5.59201.62±8.58200.91±5.87第7天给药后羽均重/g389.06±26.20376.32±30.09360.37±33.95357.56±31.67*均增重(g/羽)184.75±23.47175.89±21.53158.75±27.26156.65±30.12*均耗料(g/羽)417.5383.4350.8408.9料重比2.262.182.212.61

注：料重比=均耗料/均增重

2.3 脏器系数

受试动物连续饮用磺胺氯吡嗪钠-甲氧苄啶可溶性粉溶液至试验结束时后，各组脏器系数指标的测定结果见表3。统计学分析显示，磺胺氯吡嗪钠-甲氧苄啶可溶性粉各剂量组的脏器系数与空白组相比差异不显著(P>0.05)。

检测指标空白组1倍推荐剂量组3倍推荐剂量组5倍推荐剂量组心脏0.9±0.50.7±0.20.7±0.10.6±0.2肝脏3.1±1.52.8±0.32.7±0.82.9±0.7脾脏0.3±0.10.2±0.10.3±0.10.2±0.1肺脏1.0±0.40.9±0.20.9±0.20.9±0.2肾脏1.1±0.50.9±0.21.1±0.11.1±0.1

2.4 血液生理指标及血清生化指标

各组于试验结束后(第8天)的血液生理指标和血清生化指标测定结果分别见表4-5。血液学及血液生化参数检测结果显示：尽管1倍及5倍推荐剂量组受试动物的白细胞总数在平均水平上略低于空白组，但不具有统计学意义(P>0.05)；3倍推荐剂量组受试动物的白细胞总数在平均水平上高于空白组，差异显著(P<0.05)。各用药组的谷丙氨酸酶及天冬氨酸酶含量较空白组升高，但仅1倍推荐剂量组与空白对照组差异显著(P<0.05)。5倍剂量组与空白组动物鸡在尿素氮上差异显著(P<0.05)，提示高剂量时药物对肾脏功能可能有影响。在5倍最大推荐剂量时平均碱性磷酸酶与空白对照组相比差异显著(P<0.05)。

检测指标空白组1倍推荐剂量组3倍推荐剂量组5倍推荐剂量组红细胞数总数/(1012·L-1)2.32±0.152.42±0.122.33±0.332.41±0.30白细胞数总数/(109·L-1)56.87±11.3438.58±18.8562.54±28.67*39.84±29.87血红蛋白/(g·L-1)82.35±3.4082.79±2.7779.55±10.5179.56±8.92红细胞压积/(L·L-1)28.04±2.1528.68±1.1627.57±3.3328.02±3.21血小板总数/(109·L-1)4.20±2.095.90±2.42*5.00±3.335.20±3.26异嗜性粒细胞含量/%6.5±2.13.4±2.34.0±2.23.2±1.3*嗜酸性粒细胞含量/%3.5±0.72.0±1.42.3±1.21.4±0.5嗜碱性粒细胞含量/%0000淋巴细胞含量/%87.5±13.288.6±7.987.0±4.790.6±0.9单核细胞含量/%14.3±10.86.4±4.47.0±2.24.8±0.8

检测指标空白组1倍推荐剂量组3倍推荐剂量组5倍推荐剂量总胆红素/(μmol·L-1)1.0±0.11.1±0.11.0±0.11.1±0.1谷丙转氨酶/(U·L-1)2.7±1.94.5±2.83.9±2.33.8±2.6天冬氨酸转移酶/(U·L-1)179.4±20.8247.8±60.3*235.2±74.2252.5±108.6总蛋白/(g·L-1)34.2±7.232.3±3.431.7±3.731.9±2.6白蛋白/(g·L-1)11.2±0.911.8±1.111.2±1.311.1±1.6球蛋白/(g·L-1)23.2±6.620.5±2.620.6±3.120.8±1.6碱性磷酸酶/(U·L-1)1530.9±457.41658.5±814.61435.5±441.01139.3±293.3*谷氨酰胺基转移酶/(U·L-1)26.0±3.224.8±2.524.4±3.623.6±3.8肌酐/(μmol·L-1)11.9±4.89.1±1.110.3±1.210.2±2.0尿素氮/(μmol·L-1)0.8±0.10.9±0.20.9±0.21.0±0.2*葡萄糖/(μmol·L-1)15.2±1.114.9±1.615.7±1.515.8±1.5总胆固醇/(μmol·L-1)2.9±0.43.0±0.52.9±0.32.9±0.3钾/(μmol·L-1)5.9±0.85.8±0.45.9±0.35.7±0.4钠/(μmol·L-1)141.3±1.8142.2±1.9141.1±1.4142.6±1.7氯/(μmol·L-1)111.3±2.1111.0±2.2110.0±2.4111.2±2.4钙/(μmol·L-1)2.8±0.12.8±0.12.8±0.12.8±0.1血清淀粉酶(μmol/L)342.1±157.3343.5±72.7377.2±89.9446.1±223.2

2.5 病理学变化

对经过饲喂磺胺氯吡嗪钠-甲氧苄啶可溶性粉7 d后的鸡剖检后，经肉眼观察各剂量组均未发现与药物有关的异常或可疑病变(图略)。对各组受试动物采集样品做组织学检查，所有受试动物的各脏器均未发现明显的病理组织学变化(图略)。

3 讨论

磺胺氯吡嗪钠是临床常用的抗球虫药，主要是通过干扰敏感虫株的叶酸代谢而抑制其生长繁殖。甲氧苄啶(TMP)抗球虫作用机理为抑制二氢叶酸合成酶，使二氢叶酸不能还原成四氢叶酸，影响辅酶形成，妨碍球虫核酸合成，进而抑制球虫生长繁殖。TMP与磺胺氯吡嗪钠合用时，可以从两个不同环节同时阻断球虫叶酸代谢而起协同作用，本复方制剂抗球虫效果较各自单方均显著增强[8]。

有文献报道[9-11]，磺胺类药物的急性中毒多见于注射磺胺类钠盐时，速度过快或剂量过大。表现为神经症状，如共济失调、痉挛性麻痹、呕吐、昏迷、食欲降低和腹泻等。严重者迅速死亡。TMP毒性较低，副作用小，偶尔引起白细胞、血小板减少等，但孕畜和出生仔畜应用易引起叶酸摄取障碍，宜慎用。

本研究主要通过临床表现、血液生理生化指标及病理学变化评价磺胺氯吡嗪钠-甲氧苄啶可溶性粉对鸡的安全性。本试验从临床表现、增重及饲料利用率、血液常规检测、血清生化指标检测、组织病理学检查等多方面对以磺胺氯吡嗪钠-甲氧苄啶可溶性粉1倍、3倍、5倍剂量饮水给药的受试动物进行了安全性研究和评估。结果显示磺胺氯吡嗪钠-甲氧苄啶可溶性粉通过饮水给药，连续混饮7 d，试验期间所有受试动物均未死亡且健康状况良好，表明磺胺氯吡嗪钠甲氧苄啶可溶性粉对靶动物鸡在推荐剂量下使用具有较高的安全性。

综上，磺胺氯吡嗪钠-甲氧苄啶可溶性粉，按推荐剂量300 mg/L(以磺胺氯吡嗪钠计)饮水给药，连用5天，对靶动物鸡具有较大的安全性。