血清可溶性酪氨酸蛋白激酶对乳腺癌的诊断及预后评估价值

费 翔,李 立,崔建春

(辽宁省人民医院甲状腺乳腺外科,辽宁沈阳 110016)

乳腺癌是女性发病率最高的恶性肿瘤，WHO调查显示，全球每年约有160万乳腺癌新发病例，发病率和病死率居各类恶性肿瘤首位[1]。国外1项调查显示，Ⅰ～Ⅱ期乳腺癌5年存活率达90%以上，而Ⅲ～Ⅳ期仅为35%[2-3]。由于乳腺癌发病早期较为隐匿，近40%以上的患者就诊时已进入中晚期，错过了最佳治疗时机，患者预后较差。生物学指标在疾病早期筛查、预后评估方面有明显优势。有研究证实，酪氨酸蛋白激酶(Axl)在恶性肿瘤中呈高水平表达，通过多种机制在恶性肿瘤进展中发挥作用[4]。陈立婷等[5]研究发现，Axl在恶性肿瘤组织中表达与患者预后有关。目前，关于Axl在乳腺癌中表达的研究尚少见相关报道，本研究检测乳腺癌患者血清可溶性Axl(sAxl)水平，探讨其对乳腺癌早期诊断及预后评估的价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 回顾性分析2016年3月至2019年3月本院甲状腺乳腺外科收治的103例乳腺疾病患者的临床资料，均经穿刺活检或手术病理切片检查确诊，分为乳腺癌组58例，年龄34～71岁，平均(45.9±11.5)岁，体质量指数19～25 kg/m2，平均(22.3±2.4)kg/m2；乳腺纤维腺瘤组45例，年龄34～70岁，平均(46.1±11.2)岁，体质量指数20～25 kg/m2，平均(22.6±2.2)kg/m2。根据乳腺癌患者血清sAxl水平中位数(63.49 ng/mL)又可将乳腺癌患者分为sAxl高水平组(>63.49 ng/mL)27例和sAxl低水平组(≤63.49 ng/mL)31例。乳腺癌组纳入标准：(1)临床资料完整，有随访记录者；(2)未进行放疗、化疗或其他抗癌治疗者；(3)各项检查均知情同意者。乳腺癌组除围术期严重并发症或术中死亡病例，合并其他恶性肿瘤患者。乳腺癌患者肿瘤分期参照美国癌症联合委员会与国际抗癌联盟关于乳腺癌病理分期标准(第7版)[6]，Ⅰ期17例，Ⅱ期30例，Ⅲ期11例。乳腺纤维腺瘤组排除标准：近3个月行大型手术治疗，乳腺肿块手术切除复发者。两组患者年龄、体质量指数等一般资料比较，差异均无统计学意义(t=0.088、0.652，P=0.465、0.258)，具有可比性。本研究经本院伦理委员会批准。

1.2方法

1.2.1血清标本采集 两组患者入院后次日清晨空腹12 h采集肘静脉血3 mL，采用美国贝克曼库尔特AllegraX-30多功能台式离心机以2 500 r/min离心20 min，静置后抽取上层血清，将血清标本编号置于-70 ℃超低温冰箱内保存备用。血清sAxl水平检测采用酶联免疫吸附试验，检测仪器为美国Thermo公司APPLISKAN型酶标仪，试剂盒购自上海酶联生物科技有限公司；试验操作步骤简述如下：将标本从-70 ℃冰箱取出室温融解，分别设置标准品孔和标本孔，标准品孔加入不同水平的标准液，待测标本孔中加入稀释后的待测标本。向标准品孔和标本孔中加入辣根过氧化物酶标记亲和素工作液，封板，室温孵育45 min；再向每孔加入相应底物，室温暗处孵育15 min。加终止液终止反应，450 nm处测各孔吸光度值，通过绘制吸光度曲线计算标本sAxl水平。

1.2.2临床资料收集 收集乳腺癌患者临床资料，包括年龄、肿瘤分期、肿瘤大小、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、淋巴结转移、绝经状态、Ki-67标记指数(Ki-67)等。

1.3随访 随访时间从乳腺癌患者术后第2天开始计算，终末时间为末次随访日期或复发转移日期或死亡日期。本研究乳腺癌患者随访6～60个月，中位随访41个月。

2 结 果

2.1两组患者血清sAxl水平比较 乳腺纤维腺瘤组血清sAxl水平为(48.85±17.02)ng/mL，乳腺癌组为(60.19±23.05)ng/mL，乳腺癌组血清sAxl水平明显高于乳腺纤维腺瘤组，差异有统计学意义(t=10.270,P<0.001)。

2.2血清sAxl水平与乳腺癌患者临床资料的关系 血清sAxl水平与肿瘤大小、淋巴结转移有关；肿瘤直径>5 cm患者血清sAxl水平明显高于肿瘤直径≤5 cm患者；有淋巴结转移患者血清sAxl水平明显高于无淋巴结转移患者，差异有统计学意义(P<0.05)；血清sAxl水平与患者年龄、肿瘤分期、ER、PR、绝经状态、Ki-67均无关(P>0.05)，见表1。

表1 血清sAxl水平与乳腺癌患者临床资料的关系(n)

2.3ROC曲线分析血清sAxl水平对乳腺癌的诊断效能 ROC曲线分析显示，血清sAxl水平鉴别乳腺癌和乳腺纤维瘤的曲线下面积(AUC)为0.874，根据最大约登指数(0.642 1)确定截断值为46.09 ng/mL，灵敏度为80.5%，特异度为86.0%(95%CI:0.807～0.940,P=0.001)，见图1。

图1 血清sAxl水平对乳腺癌的诊断效能

2.4不同血清sAxl水平乳腺癌患者的生存曲线 生存曲线分析显示，血清sAxl高水平组和低水平组5年生存率分别为44.4%和87.1%。血清sAxl高水平组5年生存率明显低于低水平组，差异有统计学意义(χ2=8.139,P<0.01)，见图2。

注：a为低水平组；b为高水平组。

2.5Cox回归分析影响乳腺癌生存的危险因素 Cox多因素回归分析显示，血清sAxl是影响乳腺癌生存预后的危险因素(P<0.05)，见表2。

表2 Cox回归分析影响乳腺癌生存预后的危险因素

3 讨 论

Axl是Tyro3受体酪氨酸激酶亚家族中的重要成员之一，是由胞外区、胞内区及跨膜区组成的单次跨膜蛋白。Axl在正常机体组织均有不同程度表达，在心肌、甲状腺、骨骼肌、造血系统、结肠黏膜中呈高水平表达，而在外周血淋巴系统中表达较低。有研究显示，Axl信号途径在抑制肿瘤细胞凋亡、促进肿瘤细胞转移、新生血管形成中参与恶性肿瘤发生、发展[7]。DAVIES等[8]研究证实，超过56%的前列腺癌患者、70%的肺癌患者、65%的直肠癌患者肿瘤组织中Axl表达增强。有学者发现，Axl高水平表达是Ⅱ期胰腺癌远端转移和死亡的独立危险因素，这可能与Axl促进胰腺癌细胞增殖和侵袭性增强有关[9]。Axl不仅与恶性肿瘤不良预后相关，还参与了肿瘤细胞耐药性的形成。刘志等[10]从拉帕替尼BT474细胞分离耐药的ER阳性、人表皮生长因子受体-2阳性乳腺癌细胞中发现，Axl过度表达是乳腺癌的耐药机制。因此，对Axl的靶向治疗是恶性肿瘤治疗的方向。

马兴聪等[11]研究证实，乳腺癌组织中Axl阳性率明显高于相配对的癌旁组织，进一步研究发现Axl表达与乳腺癌浸润程度、肿瘤分期有关。Axl不仅可存在于细胞表面蛋白组织中，亦可以sAxl形式存在于血清中。在血清中sAxl可减缓Gas6释放，延长半衰期，以提高生物利用度，可增强Gas6局部及系统性作用。有研究表明，sAxl可促进细胞膜受体Axl的活化，促进细胞转移及下游信号激活[12]。

目前，关于血清sAxl与恶性肿瘤关系的报道较少，在部分肿瘤中发现血清sAxl水平异常。刘艳艳等[13]报道显示，上皮卵巢癌组血清中sAxl水平高于卵巢良性上皮肿瘤组和正常卵巢组，提示sAxl可作为上皮卵巢癌早期诊断和预后评估的肿瘤标志物。本研究观察了血清sAxl与乳腺癌临床资料的关系，结果发现，血清sAxl水平与肿瘤大小、淋巴结转移有关，提示血清sAxl与乳腺癌肿瘤进展和转移有关，可作为乳腺癌患者诊断和预后的评估指标。本研究进一步探讨sAxl对乳腺癌诊断的意义，结果显示，血清sAxl鉴别乳腺癌和乳腺纤维瘤的AUC为0.874，说明血清sAxl有望作为乳腺癌早期筛查和病情监测的指标。

在对宫颈癌和结直肠癌患者的研究中发现，通过上调sAxl与Gas6表达，可促进肿瘤细胞侵袭和转移，进一步证实sAxl可能参与乳腺癌细胞的转移并引起不良预后[14]。成琳等[14]报道，乳腺癌患者血清sAxl水平明显升高，sAxl高水平是乳腺癌生存期较短和复发的独立预测因子。本研究随访结果显示，sAxl高水平组5年生存率明显低于低水平组，sAxl水平升高是乳腺癌生存预后的独立危险因素，提示血清sAxl可作为乳腺癌预后的评估指标，sAxl水平升高表明生存率较低。

综上所述，乳腺癌患者血清sAxl水平明显升高，高水平sAxl与患者肿瘤大小、淋巴结转移相关，血清sAxl可作为乳腺癌早期诊断、临床预后的评估指标。