不同提取方法对金银花灵芝多糖清除DPPH的效果评价

杜文倩 刘小杰 党凯云 张慧珍 赵志龙

【摘要】目的：探究不同方法提取的金银花灵芝多糖对DPPH自由基清除的效果。方法：采用溶剂回流法、摇床振荡法、超声萃取法等提取金银花灵芝中的多糖成分，以L-抗坏血酸为对照品，采用DPPH法研究不同浓度多糖溶液对自由基的清除作用。结果：最适合用于提取金银花灵芝多糖的方法是超声萃取法，采用水做溶剂提取时所得多糖的抗氧化能力最强。结论：金银花灵芝多糖具有清除DPPH自由基的作用，在一定的浓度范围内，金银花灵芝多糖的浓度越大，其清除DPPH自由基的能力越强。

【关键词】金银花灵芝多糖;提取;清除自由基

【中图分类号】 R248

【文献标识码】B

【文章编号】2095-6851（2020）08-032-02

[中图分类号]Q539

【文献标识码】A

自由基会伤害生物膜、酶、维生素、蛋白质及活细胞功能，可造成细胞的结构和功能破坏，如何清除自由基的问题已得到普遍关注[1]。金银花灵芝为多孔菌科褐孔菌属真菌子实体，又称“银花莪子”或“忍冬藤菇”。富含多糖、三萜、生物碱、麦角甾醇等多种活性成分，具有抗氧化、抗病毒、抑菌等功效。因此，本文通过不同方法提取金银花灵芝多糖，并探究其清除DPPH的效果[2]。

1 材料和方法

1.1 材料和仪器

金银花灵芝子实体（山东临沂市平邑县），无水乙醇，2，2-二（4-叔辛基苯基）-1-苦肼基自由基（DPPH·）（Solarbio，丙酮，氯仿（分析纯），紫外可见分光光度计，真空旋转蒸发仪。

1.2 方法

1.2.1 溶剂回流法

称取金银花灵芝粉末5.00 g，按照固液比1：20加入溶剂回流提取3 h，待提取液冷却后进行抽滤，真空浓缩后，37℃真空干燥，称重，用溶剂溶解并定容。

1.2.2 摇床振荡法

称取金银花灵芝粉末5.00 g，按照固液比1：20加入溶剂，放置一定温度下的摇床上浸提6 h，将提取液进行抽滤，真空浓缩后，37℃真空干燥，称重，用溶剂溶解并定容。

1.2.3 超声萃取法

称取金银花灵芝粉末5.00 g，按照固液比1：20加入溶剂，超声萃取30 min，将提取液进行抽滤，真空浓缩后，37℃真空干燥，称重，用溶剂溶解并定容。

1.2.4 金银花灵芝多糖對DPPH自由基的清除作用[3]

准确称取20 mg DPPH，95%乙醇溶解并定容于250 ml容量瓶中，DPPH浓度为2×10-4 mol/L，取等体积待测液及2×10-4 mol/L DPPH 溶液加入同一具塞试管中，摇匀。30 min后用95% 乙醇做参比在525 nm下测定其吸光度Ai，同时测定2×10-4mol/L DPPH溶液与等体积95%乙醇混合液的吸光度Ac，以及待测液与等体积95%乙醇混合液的吸光度Aj。根据下列公式计算清除率：清除率=[1-（Ai-Aj）/Ac]×100%

2 结果

2.1 不同提取方法的浸出率比较

对金银花灵芝多糖采用不同方法进行提取[4]，计算浸出率，结果见表1。采用三种不同方法对金银花灵芝多糖进行提取，其浸出率由高到低依次为：溶剂回流法>摇床振荡法>超声萃取法。

2.2 不同溶剂提取结果的比较

采用两种不同提取方法和四种不同溶剂对金银花灵芝多糖进行提取，结果见表2。通过对比其提浸出率，按照提浸出率由高到低的顺序依次为：水>95%乙醇>丙酮>氯仿。可见，其浸出率与溶剂的极性有关，溶剂极

性越大，浸出率越高。

2.3 不同溶剂提取物清除 DPPH 自由基的能力[5]

对不同溶剂的金银花灵芝多糖进行清除自由基活性能力的测定，结果如图1所示。95%乙醇、水、丙酮对金银花灵芝多糖都具有一定的清除自由基活性的能力。随着金银花灵芝多糖浓度的增加，清除率逐渐增高，但当清除率增加到一定值后，清除率趋于平缓甚至降低。在一定的浓度范围内，采用水作为溶剂所提取得到的金银花灵芝多糖抗氧化能力最强，其次是采用丙酮得到的提取物，95%乙醇提取得到的多糖抗氧化能力最弱。对自由基的清除能力以及清除率表示，清除率越高，说明多糖提取物的抗氧化作用越强。

3 讨论

通过比较以上几种提取方法，超声萃取法是最适合提取金银花灵芝多糖的提取方法，它具有操作过程简单、提取速度快、节能、多糖提取率高等优势。金银花灵芝多糖具有清除DPPH自由基的作用，采用水做溶剂提取时所得多糖的抗氧化能力最强，其次为丙酮，用95%乙醇做溶剂时抗氧化能力最弱。不同溶剂提取多糖时各提取物清除DPPH自由基的结果均表明，在一定的浓度范围内，金银花灵芝多糖的浓度越大，其清除DPPH自由基的能力越强[6]。

我国对金银花的种植及使用已经十分普遍，金银花的药用价值也已经被大量开发利用。但由于金银花灵芝产量减少、价格昂贵，目前对其研究和开发应用还相对较少，而对于金银花灵芝多糖的研究则少之又少。本研究对金银花灵芝多糖的提取工艺进行优化，得到了较为合适的提取方法;同时通过金银花灵芝多糖对DPPH自由基清除能力的研究，证明了金银花灵芝多糖具有较强的抗氧化活性，这一研究对金银花灵芝多糖的应用和开发具有重要意义。

参考文献：

[1] 谢明勇，弓晓峰.黑灵芝提取物清除DPPH自由基的作用[J].天然产物研究与开发，2006，18：917-921.

[2] 周凌云，胡颖，唐博安.不同提取方法对大花红景天多糖的DPPH自由基清除能力的影响[J].通化师范学院学报. 2017（1）：18-21.

[3] 谭萍，方玉梅，王毅红，张春生.苦荞麦多糖清除DPPH自由基的作用[J].六盘水师范学院学报.2013，25（4）：37-39.

[4] 范三红，任嘉兴，张锦华，金晓弟，白宝清.响应面优化羊肚菌多糖提取工艺及抗氧化性[J].食品工业科技.2019，40（06）：179-185.

[5] 范巧宁，赵珮，高晓梅，段玉峰.不同提取方法对槐米多糖抗氧化活性的影响[J].食品工业科技.2014，35（21）：273-277.

[6] 祝元婷，吴文林，张利，刘琪.超声提取鼠尾草叶多糖工艺优化及其DPPH自由基清除能力评价[J].食品科学.2011，32（16）：76-79.