血清趋化因子IP-10、Mig在慢性重型肝炎中的诊断价值

王 莉，刘正稳

1.西安市第八医院特管病区，陕西 西安 710061；2.西安交通大学第一附属医院感染科

慢性重型肝炎是一种严重的肝脏类疾病，其病理特点是出现大量的肝细胞病变、坏死，引起肝部衰竭[1]，严重者甚至危及生命，引起慢性重型肝炎的因素很多[2]，甲肝和乙肝病毒感染、其他病毒，如临床上最常见的巨细胞病毒(CMV)和EB病毒(EBV)感染等[3]，慢性重型肝炎关系到全球的健康问题，约占肝炎的0.5%[4]，具有极高的死亡率，因此及时发现、及早治疗对预后非常重要，但慢性重型肝炎一般发病症状较轻，发现时已为晚期，甚至发展到肝硬化或肝癌，或已侵袭到其他脏器[5]，引起一系列并发症[6]，如关节炎、结节性多动脉炎、脂肪肝、糖尿病等[7]。发病主要症状是食欲不振、疲倦乏力、上腹疼痛、黄疸、发热等[8]，调查统计在我国每年感染10万人口，病死率高达4%[9]，近几年来，对慢性重型肝炎的发病机制和感染病毒、宿主因素、预后影响等进行研究[10]，为临床在治疗慢性重型肝炎上提供了可靠依据，曾有研究证明血清趋化因子干扰素诱导蛋白10(IP-10)和迁移诱导蛋白(Mig)与肝癌的发展呈正相关[11]，但IP-10、Mig与慢性重型肝炎发展关系尚不明确，本实验主要研究血清趋化因子IP-10、Mig在慢性重型肝炎中的诊断和预测价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2017年3月至2019年1月于西安市第八医院特管病区住院治疗的52例慢性重型肝炎患者，男33例，女19例，患者年龄(36.12±7.66)岁(17～51岁)，纳入标准：(1)属于单纯乙型肝炎病毒感染患者；(2)HBsAg阳性；(3)肝功能检测ALT≤40 U/L，总胆红素≤17.1 μmol/L的患者。排除标准：(1)合并甲型肝炎、丙型肝炎、戊型肝炎病毒交叉感染的患者；(2)合并HIV感染的患者；(3)恶性肿瘤、甲状腺炎症的患者；(4)中毒、免疫、药物、酒精性肝炎引起的慢性乙型肝炎病毒感染患者；(5)精神障碍无法沟通的患者；(6)不能配合本次研究患者。另抽取我院体检中心体检健康、无偿献血者26名作为对照组，男15名，女11名，年龄(34.58±8.17)岁(18～49岁)。两组年龄、性别等一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究经患者及家属同意并签署知情同意书，且本研究通过医院伦理委员会的批准。

1.2 方法

1.2.1 标本采集：按照慢性重型肝炎坏死程度分级和纤维化程度分期进行分组，对慢性重型肝炎患者和对照组进行血液采集，清晨空腹分别用两个采血管采集静脉血6 ml，采血管取血放置1 h后进行离心处理，离心率为1 500 r/min，离心20 min，分离血清和血浆，置于-70 ℃的冰箱中贮存，后期实验使用，再经过穿刺肝脏右叶获取活体组织进行检测，通过甲醛固定，切片包埋等备PCR检测mRNA使用。

1.2.2 血清中IP-10、Mig水平检测：采用北京奥维亚生物技术有限公司生产的ELISA试剂盒,进行IP-10、Mig水平检测，严格按照说明书标准进行操作。

1.2.3 PCR检测：患者穿刺的组织细胞进行RNA提取，加入细胞裂解液100 μl，放置 5 min，进行吹打，PBS 洗涤2次，再放入EP管中，加入100 μl 氯仿，混匀，进行离心处理，离心条件：12 000×g，5 min，去上清，计算RNA浓度，并提取RNA进行逆转录聚合酶链反应，PCR反应条件：96 ℃ 20 s变性；92 ℃ 53 s变性，55 ℃退火延伸 22 s，共计 30个循环。引物序列如表1所示。

表1 引物序列表

1.2.4 慢性重型肝炎PS评分：按照ECOG-PS评分系统[12]进行评分，活动能力完全正常0分，能够从事轻体力劳动，来回自由走动1分，只丧失工作能力，但生活等方面可以自理2分，白天大部分时间卧床，自理仅在轮椅上进行3分，长期卧床4分，死亡5分。

1.3 指标观察观察血清趋化因子和肝穿刺细胞中IP-10、Mig与慢性重型肝炎的相关性。

2 结果

2.1 慢性重型肝炎患者坏死程度分级和纤维化程度分期坏死程度上，G1～G2为轻度坏死，G3～G4为重度坏死，纤维化程度分期S1到S4病变纤维化由轻到重，S1病变较轻，一般在纤维化病变在胆小叶区域，S4病变较重，已发展为肝硬化。纤维化程度上判断，处于轻度坏死的患者中，S2占比较高，为38.46%，其次是S1，占比为36.54%；从坏死程度上发现，G1轻度坏死程度占比最高，为34.62%(见表2、图1)。

表2 慢性重型肝炎患者坏死程度分级和纤维化程度分期情况[例数(%)]

2.2 血清中IP-10、Mig在慢性重型肝炎患者中不同程度的表达通过血清检测分析，对照组的IP-10表达水平为(29.22±17.48)pg/ml，Mig表达水平为(421.21±27.78)pg/ml，随着慢性重型肝炎坏死程度和纤维化程度的不断加重，IP-10和Mig的表达不断上升，恶化最为明显的是S3G3和S4G4，较对照组均有显著上升(P均<0.05)(见表3)。

表3 IP-10、Mig与慢性重型肝炎不同程度的相关性对比分析

2.3 IP-10、Mig与慢性重型肝炎的相关性穿刺检测证明慢性重型肝炎细胞趋化因子IP-10、Mig与慢性重型肝炎的严重程度(PS评分)呈正相关，慢性重型肝炎病变越严重，IP-10、Mig会越高(P均<0.05)(见图2)。

图2 血清中IP-10、Mig水平与慢性重型肝炎的相关性

2.4 血清中IP-10、Mig与慢性重型肝炎PS评分Logistic回归性分析通过Logistic回归单因素分析显示，IP-10(OR=1.681，95%CI：0.782～2.843,P=0.004)，Mig(OR=0.782，95%CI：0.743～1.212,P=0.019)，说明IP-10和Mig在慢性重型肝炎的发展中均有很大的作用(见表4)。

表4 IP-10、Mig与慢性重型肝炎Logistic回归分析

3 讨论

肝炎在医疗的救治上一直是一大难题，肝纤维化是慢性乙型肝炎过渡到肝硬化的一个过程[13]，慢性乙型肝炎病毒感染会导致肝部细胞局部逐渐纤维化和坏死，对肝脏损伤较严重，预后也较差[14]，但对于肝纤维化的早期治疗，可以逆转肝部纤维化到肝硬化的过程。肝穿刺活检是诊断肝纤维化的金标准，属于一种有创伤检测，风险较大，临床上受到限制[15]，因此，亟待寻找一种应用标志物发现易感因素，针对不同阶段纤维化的分级敏感性、相关性来诊断患者病情的方式。IP-10、Mig属于炎症趋势化因子，具有调节活化蛋白的功能[16]，参与淋巴细胞循环和炎症组织浸润，在临床上一直备受重视，本文主要探讨血清趋化因子IP-10、Mig在慢性重型肝炎患者中的诊断价值研究，为临床提供有利帮助。

目前越来越多的趋化因子参与肿瘤或炎症的转移，本研究结果显示，52例患者中纤维化程度上，处于轻度坏死的患者占比较高，S1和S2分别为36.54%和38.46%，坏死程度上发现，G1轻度坏死程度占比较高为34.62%，说明慢性重型肝炎患者初期病变患者较多，一经确诊应及时治疗，避免死亡发生。通过血清检测分析，对照组的IP-10和Mig表达水平随着慢性重型肝炎坏死程度和纤维化程度的加重不断上升，恶化最为明显的是S3G3和S4G4，IP-10和Mig表达较对照组均有显著上升；穿刺检测证明慢性重型肝炎细胞趋化因子IP-10、Mig与慢性重型肝炎的严重程度呈正相关，慢性重型肝炎病变越严重，IP-10、Mig会越高；通过Logistic回归单因素分析显示，说明IP-10和Mig对慢性重型肝炎的诊断具有一定的参考价值，有研究证明IP-10和Mig水平的升高可判断肾部功能出现异常，但不能对病因进行确切的诊断[17]，也有研究证明IP-10和Mig水平的升高，可以判定肝细胞受损程度[18]。也有研究证明在大鼠的肝脏复制高水平的HBV，IP-10和Mig水平逐渐升高[19]。所以证明血清中趋化因子IP-10、Mig不仅对于慢性重型肝炎，也对肾病和其他肿瘤类疾病的诊断有一定帮助。

综上所述，血清中趋化因子IP-10、Mig水平越高，肝部坏死程度和纤维化程度越高，慢性重型肝炎就会越严重，趋化因子IP-10、Mig是慢性重型肝炎的易感因素，为临床上慢性重型肝炎的诊断提供可靠的依据。