山西省某养殖场蛋鸡H7N9 流感暴发调查

胡明明，白艳艳，王治维，图门巴雅尔，孙 杰，宁 艳，雷 冲，王 锦，赵 凯，左 晓，曾邦权，雷宇平，王仲兵

（1.山西省动物疫病预防控制中心，山西太原 030027；2.榆林市动物疫病预防控制中心，陕西榆林 719000；3.云南省动物疫病预防控制中心，云南昆明 650201）

H7N9 流感病毒是甲型流感病毒中的一种，属正黏病毒科甲型流感病毒属，为有囊膜的分节段单股负链RNA 病毒，除可感染禽外，还可感染人、猪、马、水貂和海洋哺乳动物等。H7N9 流感病毒在我国流行初期对禽类的致病性较弱，使感染禽类不表现明显临床症状[1-2]，但随着毒力变化，对禽类致病性增强，可引起禽类严重发病死亡[3]，对我国养禽业造成重大影响。

2018年3月30日，山西省临汾市洪洞县某养殖户报告其饲养的蛋鸡出现大量异常死亡。经国家禽流感参考实验室确诊，证实该起疫情为H7N9 流感暴发。为查明病因，了解疫情分布，通过现场剖检、实验室诊断、问卷调查、周边排查等方式，对该起疫情进行了流行病学调查，寻找可能的风险因素，进而提出防控建议，评估防控效果。

1 方法

1.1 病例定义

1.1.1 可疑病例 个体水平：2018年3月27—31日，疫情养殖场出现的病死蛋鸡；场群水平：3月27日—4月30日，洪洞县出现禽类死亡数量异常增多的养殖场户。

1.1.2 确诊病例 经国家禽流感参考实验室检测为H7N9 流感病毒核酸阳性的可疑病例。

1.2 调查方式

1.2.1 现场问卷调查 采用问卷调查方式，对场内基本情况、鸡群免疫情况、病死情况、饲养管理情况、调运情况等进行调查。通过现场入户调查和全县养禽场户逐户排查，了解疫情空间分布和周边易感动物分布。

1.2.2 现场剖检 剖检病死和发病蛋鸡，观察病理变化。

1.2.3 实验室诊断

1.2.3.1 血清学检测 采集鸡血清进行血凝抑制（HI）试验，检测H5、H7 亚型抗体。采用哈尔滨国生生物科技股份有限公司生产的H5 亚型抗原、H7 亚型抗原进行检测，批号分别为2017042、2017007。判定标准为：HI 效价≤3log2，判为阴性；等于4log2，为可疑，需重复试验；≥5log2，为阳性。

1.2.3.2 病原学检测 采集鸡咽/泄殖腔拭子、组织样品进行H5、H7 亚型流感病毒荧光定量PCR病原学检测。采用广州维伯鑫生物科技有限公司生产的H5、H7 亚型流感病毒实时荧光RT-PCR 检测试剂盒进行检测，批号分别为AIVH520180211P、AIVH720171220P。H5 亚型判定标准为：Ct ≤30并出现特异性扩增曲线，为阳性；30 ＜Ct ＜37并出现特异性扩增曲线，为可疑，需重复试验，如仍是可疑，判定为阳性；Ct ≥37 为阴性。H7 亚型判定标准为：Ct ≤30 并出现特异性扩增曲线为阳性；30 ＜Ct ＜35 并出现特异性扩增曲线为可疑，需重复试验，如仍是可疑，则判定为阳性；Ct ≥35 为阴性。

1.3 数据来源与分析

通过养殖场主口述，结合现场排查，获得蛋鸡死亡时间、死亡数量、扑杀时间等相关数据；用Excel 进行整理，并绘制流行病学曲线。

2 调查结果

2.1 基本情况

2.1.1 饲养情况 该养殖场位于临汾市洪洞县龙马乡，为自家庭院养殖；3 栋鸡舍位于住宅东侧，鸡舍间距为4 m；发病舍位于北侧，中间为空舍，南侧舍未发病（图1）。该养殖场养殖环境差，无粪污清理设施、通风设施。疫情发生前，全场共存栏蛋鸡1 794 只，其中发病鸡舍812 只（315日龄）、未发病鸡舍982 只（260日龄）。养殖场主个人负责饲喂。

图1 养殖场禽舍分布

2.1.2 引种情况 2017年5月15日，该场从洪洞县某养殖场引进商品蛋鸡海兰褐1 000 只至北侧鸡舍（发病舍）；2017年7月10日，从山西省某养殖场引进商品蛋鸡海兰褐1 000 只至南侧鸡舍。

2.1.3 免疫情况 2017年9月23日，该场对两栋鸡舍免疫了H5 亚型二价灭活疫苗（Re-6 株+Re-8株）；2018年3月5日，对南侧鸡舍免疫了H5+H7 亚型二价灭活苗（H5N1Re-8 株+H7N9Re-1株），而未对北侧鸡舍免疫。

2.1.4 饲料和饮水情况 该场蛋鸡饲料一直由当地某饲料部供应，最近于3月20日购进1.5 t；所用水源来自自打井。

2.1.5 人员和车辆进出情况 2018年3月20日，运料车到过该场；3月25日，鸡蛋销售商到过该场。同村另一养殖场（Y 场，排查时发现H7 亚型流感病原学阳性）场主与该养殖场场主来往密切，3月6—26日共进场8次，且未进行任何消毒便进入鸡舍。

2.1.6 活鸡调出、调入和鸡蛋销售情况 该场近期无活鸡调出、调入，3月25日销售鸡蛋112.5 kg。

2.2 发病死亡情况

2018年3月27日，北侧鸡舍部分成年蛋鸡出现精神萎靡、食欲减退、体温升高、腹泻等症状，并零星死亡。至3月31日，共死亡蛋鸡699 只，袭击率为86.08%。

2.2.1 时间分布 自2018年3月27日养殖场内出现死亡病例，到3月31日介入调查并进行扑杀期间，单日死亡数量呈现持续增长态势（图2）。

图2 养殖场蛋鸡疫情流行曲线

2.2.2 群间和空间分布 从养殖场内部看，疫情具有明显的空间和群间分布特征。发病死亡蛋鸡全部为位于北侧鸡舍，为315日龄蛋鸡；南侧鸡舍未发病，为260日龄蛋鸡。养殖场只有简单的手动喷雾消毒器，无规范的消毒灭源制度，外来人员、车辆进入场内及鸡舍无消毒措施，每月不定期对鸡舍消毒1～2 次。从发病情况看，具有明显的聚集性，发病场（X 场）和排查阳性场（Y 场）为相邻场（图3），其余5 个蛋鸡场均为阴性场。

图3 疫情养殖场及周边养殖场分布

2.3 疫情诊断

2.3.1 临床症状 发病鸡精神萎靡、食欲减退、呼吸困难、体温升高；部分病鸡肉髯水肿，呼吸伴有啰音，排绿色、黄绿色稀便；病程短，死亡快，个别病例无症状突然死亡。

2.3.2 剖检变化 病死鸡气管不同程度出血；肝脏有灰白色坏死灶，质脆易碎；胰腺肿大、出血；腺胃和肌胃交界处呈点状出血；十二指肠出血或坏死；盲肠扁桃体肿大、出血；泄殖腔出血。

2.3.3 实验室诊断 采集23 份血清学样品（发病舍11 份、未发病舍12 份），53 份病原学样品（发病舍20 份咽/泄殖腔拭子、11 份脏器，未发病舍20 份咽/泄殖腔拭子、2 份脏器），分别进行H5、H7 亚型抗体检测和病原学检测。所有血清样品H5 亚型抗体全部为阳性；发病舍H7 亚型血清样品抗体全部为阴性，未发病舍全部为阳性。所有病原学样品均为H5 亚型阴性；发病舍病原学样品H7 亚型阳性率为93.55%（29/31），未发病舍病原学样品全部为阴性（表1）。4月3日，国家禽流感参考实验室确诊病原为H7N9 流感病毒，其HA与NA 基因与2018年3月引发陕西省H7N9 感疫情的病原同源率较高，分别为99.8%和99.9%。

3 病因假设与分析

3.1 未免疫H7 亚型禽流感疫苗

两栋鸡舍除免疫情况不同外，其他饲养条件基本相同。发病鸡舍未免疫H7N9 流感疫苗可能是导致疫情发生的直接原因。

3.2 人员物理性带入病毒

疫情发生后进行监测排查发现，同村Y 养殖场为H7 亚型流感病原学阳性场。这两个养殖场场主来往密切，疫情暴发前20 d 内，有频繁互相串门行为，且进入养殖场前未采取消毒等生物安全措施。Y 养殖场虽监测发现病原学阳性，但因其进行了H7N9 流感免疫，所以未发生蛋鸡大量死亡。综合考虑这些因素，推测人员物理性带入病毒，引发疫情的可能性较大。

3.3 车辆引入病毒

疫情养殖场所在村的7 个蛋鸡养殖场由同一个饲料商、同一辆运输车供应饲料。蛋鸡发病死亡前7 d，饲料运输车曾进入该场，时间与高致病性禽流感的潜伏期相吻合。疫情养殖场对饲料运输车辆无任何消毒措施，且与另一H7N9 病原学阳性场（Y 场）有流行病学关联。综合考虑，通过饲料运输车辆交叉感染引入病毒的风险较高。

3.4 野生鸟类

该场周边是大片杨树林（图3），适宜鸟类繁衍栖息。鸡舍没有防鸟网等设施，野鸟可以随便飞入。在现场排查及疫情处置中，能看到鸡舍及庭院树上有成群野鸟栖息、飞行和采食鸡饲料现象。现场虽未发现有野鸟死亡，但不排除野鸟传入病毒的可能。

3.5 饲料和饮水

疫点所在村共有7 个蛋鸡养殖场，均由当地同一饲料部供应饲料。除发病场（X 场）与Y 养殖场外，其他5 个场的H7 亚型流感病原学检测均为阴性。对发病场的饲料样品和水样品进行H7 亚型流感病原学检测，均为阴性。因此，通过饲料和饮水传入疫情的可能性较低。

4 疫情处置

4.1 限制移动

划定该养殖场和Y 养殖场为疫点；以疫点为中心，周围3 km 内的12 个行政村为疫区。对疫点进行隔离，对疫区实行封锁；在疫区设置12 个临时动物防疫消毒站卡，限制家禽及其产品移动。

4.2 扑杀、无害化处理

对疫点内家禽全部扑杀，共扑杀蛋鸡5 675 羽，全部进行焚烧后深埋处理。

4.3 紧急消毒

对疫点、疫区环境实施严格消毒，对污染物进行无害化处理，累计消毒95.9 万m2。

表1 实验室检测结果 单位：份

4.4 紧急排查

对全县辖区内2 511 个家禽养殖场户开展疫情排查，共排查367.65 万余只家禽。受威胁区内，采取到场问询和采样检测相结合的方式进行排查；受威胁区外，采取现场问询方式进行排查。未发现其他H7N9 亚型流感疫情。

4.5 紧急免疫

对全县家禽免疫情况进行摸排，对已过保护期和未免疫的35.47 万只家禽全部采用H5+H7 二价灭活苗（H5N1Re-8 株+H7N9Re-1 株）进行紧急免疫。

5 讨论

5.1 局限性

该起疫情由于发病急、死亡率高，发病数不易统计，因此调查中用死亡数代替发病数，用于计算袭击率和绘制流行曲线。因疫情发生紧急，为将疫情释放风险降到最低，现场以处置疫情为首要任务，未对排查出的阳性场（Y 场）进行进一步溯源调查。养殖场无完善的养殖档案，部分情况只是从场主口述中获取，存在一定的信息偏倚。

5.2 启示

兽医主管部门应加强对全县养禽场的强制免疫监管，督促养殖场户使用与当地流行毒株匹配疫苗进行免疫；同时要做好抗体监测，对不合格的群体及时补免，以建立起有效免疫屏障[4-5]。

6 结论

通过现场调查、临床诊断、病理解剖和实验室检测，确定此次暴发为H7N9 流感。病原通过人员、车辆、野鸟带毒传入的可能性较大；养殖场因未进行H7N9 亚型流感疫苗免疫，从而导致疫情暴发。建议使用与当地流行毒株匹配疫苗进行免疫，同时加强人员、车辆和野鸟的生物安全控制。