婚前保健中孕前女性叶酸代谢酶基因多态性分析

史卿菁 丁旭锋 吴丽萍

【摘 要】 目的：分析婚前保健对象中孕前女性叶酸代谢通路中相关酶的基因多态性，根据其基因多态性对个体叶酸代谢能力进行风险方面的评估，并依据得到的结果对育龄期女性服用叶酸进行个体化引导。方法：选取2018年5月至2019年4月来宜兴市妇幼保健院行孕前保健的女性169例，采集研究对象口腔黏膜上皮细胞，采用荧光定量PCR检测方法测定5，10-亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）C667T、A1298C位点和甲硫氨酸合酶还原酶（MTRR）A66G位点的基因型，根据基因多态性将其分为高度风险、中度风险、低度风险、未发现风险四个级别。结果：本地区孕前女性MTHFR C667T位点CC型、CT型、TT型的检出频率为30.17%、51.47%、18.34%;MTHFR A1298C位点AA型、AC型、CC型的检出频率为73.37%、25.44%、1.18%;MTRR A66G位点AA型、AG型、GG型的检出频率为62.13%、29.58%、8.28%。叶酸代谢能力高度风险占18.34%，中度风险占31.36%，低度风险占8.87%，未发现风险占41.42%。结论：婚前保健孕前女性中有将近50%存在叶酸代谢中、高度风险，应根据其叶酸代谢风险程度合理个体化服用叶酸。

【关键词】 孕前妇女;叶酸;5，10-亚甲基四氢叶酸还原酶;甲硫氨酸合酶还原酶;基因多态性;叶酸过量

[Abstract] Objective：To analyze the genetic polymorphisms of related enzymes in the folate metabolic pathway of pre-pregnancy women in pre-marital health care subjects， to evaluate the risk of individual folate metabolic ability according to their genetic polymorphisms， and to individually guide women of childbearing age to take folic acid according to the obtained results. Methods： 169 women who received pregnant care in Yixing Maternal and Child Health Hospital from May 2018 to April 2019 were selected. Oral mucosal epithelial cells of the study subjects were collected and the 5，10-methylenetetrahydrofolate reductase （MTHFR） C667T， A1298C sites and methionine synthase reductase （MTRR） A66G were determined by fluorescence quantitative PCR. Genotypes of loci were classified into four levels： high risk， moderate risk， low risk and no risk according to gene polymorphism. Results： The detection frequencies of CC， CT and TT at MTHFR C667T locus were 30.17%， 51.47% and 18.34% in pre-pregnancy women in this region; the detection frequencies of AA， AC and CC at MTHFR A1298C locus were 73.37%， 25.44% and 1.18%; the detection frequencies of AA， AG and GG at MTRR A66G locus were 62.13%， 29.58% and 8.28%.The high risk， moderate risk， low risk and undetected risk accounted for 18.34%， 31.36%， 8.87% and 41.42% respectively. Conclusion： Nearly 50% of pre-pregnancy women in pre-marital health care have moderate and high risk of folic acid metabolism， which should be rationally individualized according to the degree of risk of folic acid metabolism.

[Key words]Pre-pregnancy women; Folic acid; 5，10-methylenetetrahydrofolate reductase; Methionine synthase reductase; Gene polymorphism;Folate excess

葉酸（Folic acid），又名碟酰谷氨酸，属于水溶性维生素。人机体无法自主合成叶酸，需要依靠外源性摄取。摄取的叶酸会在近端空肠被机体所吸收，以N5-甲基四氢叶酸的形式储存红细胞内，5-甲基四氢叶酸、维生素B12、甲硫氨酸合成酶一同把机体中半胱氨酸甲基化而得到甲硫氨酸，而甲硫氨酸合成酶还原酶是一种甲硫氨酸合成酶维持活性的辅酶。叶酸代谢关键酶所出现的基因突变会对机体中同型半胱氨酸水平带来影响，可引起孕产妇复发性流产、妊娠期高血压等疾病，增加子代唐氏综合征、神经管畸形、先天性心脏病等出生缺陷的风险[1]。叶酸代谢障碍的妇女即使在孕前、孕期补充了叶酸，但由于其叶酸代谢能力低下仍会导致叶酸缺乏相关的生育风险。

1 资料与方法

1.1 研究资料

选取本院2018年5月至2019年4月门诊接待的备孕期女性169例，年龄22～42岁，平均年龄27岁，自愿接受叶酸代谢基因多态性检测。签署知情同意书后，采集口腔黏膜上皮细胞进行DNA检查。

1.2 方法

研究对象清水漱口后，由专业人员采集其口腔黏膜上皮细胞样本，并利用柱式抽提试剂盒提取样本DNA。采用荧光定量PCR法检测三个位点的基因分型。

2 结果

2.1 统计样本中MTHFR、MTRR基因多态性分析

统计样本中叶酸代谢基因3个位点（MTHFRC667T、MTHFR A1298C、MTRR A66G）的基因型数据，均符合Hardy-Weinberg遗传平衡检验。

统计所有样本检测的MTHFR C667T位点中，野生型（CC）、杂合突变型（CT）及纯合突变型（TT）为51例（30.17%）、87例（51.47%）和31例（18.34%），突变基因T的基因频率为44.08%;MTHFR A1298C位点为124例（73.37%）、43例（25.44%）和2例（1.18%），突变基因C的基因频率为13.9%;MTRR A66G位点为野生型（AA）、杂合突变型（AG）及纯合突变型（GG）的分别为105例（62.13%）、50例（29.58%）和14例（8.28%），突变基因G的基因频率为23.07%。

2.2 依据样本基因多态性对叶酸代谢能力进行风险评级

统计样本中叶酸代谢能力未发现风险70例，占41.12%;低度风险15例，占8.87%;中度风险53例，占31.36%;高度风险31例，占18.34%。见表1。

3 讨论

叶酸缺乏会导致孕妇不良妊娠发生率增高。不良妊娠主要表现为流产和出生缺陷，我国出生缺陷发病率相对较高[2]，出生缺陷中最为普遍的就是唐氏综合征、先天性心脏病等，这些疾病不仅严重危害儿童健康，也会带来巨大的社会经济负担。叶酸在DNA和RNA合成中起到重要作用，人体不能合成叶酸，只能外源性摄入。天然叶酸极不稳定，食物中的叶酸经烹饪等处理后只有极少部分能被人体吸收，且天然叶酸人体利用度较低。叶酸代谢关键酶的基因突变会导致其酶活性的显著降低以及红细胞内叶酸水平降低[3]，叶酸代谢关键酶的基因突变会显著放大本来就存在的叶酸缺乏。本研究孕前女性MTHFR C667T位点有17.8%的人发生纯合突变，MTRR A66G位点有8.28%的人发生纯合突变。这部分人群不仅生育神经管缺陷、21-三体综合症、唇腭裂胎儿的风险增加，孕期发生妊娠期高血压的风险也将显著升高[4]。

各国孕期叶酸的推荐剂量存在差异，我国围孕期增补叶酸预防神经管缺陷指南建议孕妇每天应摄取0.4～0.8mg的叶酸，避免引发神经管缺陷。对不相同遗传学特征的个性化增补只提到了MTHFRC677T位点TT基因型，对于MTHFR A1298C、MTRR A66G则没有提及[5]。相关研究显示，MTHFR A1298C基因突变会改变机体凝血状态，导致凝血机制改变及胎盘部位血栓形成，从而引起复发性流产。MTRR是影响Hcy代谢的另一关键酶，最常见的突变位点为A66G，MTRR A66G位点的基因突变会降低该酶的活性，影响Hcy的活性及DNA甲基化[6]。因此对于MTHFR A1298C及MTRR A66G位点突变的也需引起重视，指导其个体化补充叶酸。

依据叶酸基因多态性对叶酸代谢能力进行风险评级，近50%的孕前妇女存在中、高度风险，常规孕前、孕早期补充0.4mg叶酸不能满足这部分人群叶酸代谢需求，仍会导致叶酸缺乏相关生育风险的发生，因此叶酸补充需个体化，才能进一步降低相关生育风险。

当前围受孕期补充叶酸已逐渐被国民接受，但过量摄入叶酸带来的母婴危害尚未被全面认识。目前对于叶酸摄入阈值尚无统一标准。国外相关研究报道，孕期女性叶酸摄入剂量>1000mg/d时，可能会导致子代呼吸功能异常，引起呼吸道相关疾病发病率升高。相关研究表明，胎儿体内叶酸浓度与胎儿出生体质量相关。由此可见，母体在孕期长期摄入过量叶酸可能会增加生育巨大儿的风险。一项动物实验发现，孕期母体叶酸水平会影响胎儿大脑的发育以及在肿瘤的发生、发展中起到关键作用。也有研究显示，母体叶酸水平异常可能导致子代多动症、孤独症等行为学改变。目前叶酸过量带来的母婴危害正逐渐被学术界重视，其中利弊还需长期研究论证。

叶酸是人体生长、繁殖必须的物质，对于围孕期妇女尤为重要。目前国民对叶酸的补充也有了一定的认识，但叶酸的个体化补充仍需全体医护人员的努力宣教。特别是当前叶酸过量所产生的危害还存在争议，学术界也没有统一的标准，当前研究对于叶酸过量的认识还不足。因此对于叶酸的补充仍需适当慎重，不可盲目。当前医护工作者应当更加全面辨证地指导围孕期妇女更加科学、个体化地服用叶酸。

参考文献

[1] Rosenquist T H，Ratashak S A，Selhub J.Homocysteine induces congenital defects of the heart and neural tube：effect of folic acid[J].Proc Natl Acad Sei USA，1996，93（26）：15227-15232.

[2] 赵豆豆，戴亚欣，郭乐倩，等.围孕期患病及心理状态与婴儿出生缺陷的关系[J].中华流行病学杂志，2017，38（11）：1460-1465.

[3] Fitzgerald B，Boyle C，Honein M A，et al.Birthdefectspotentially related to Zika virus infection during pregnancy in the United States[J].JAMA，2018，319（12）：1195-1196.

[4] Fisher S C，Van Zutphen A R，Werler M M，et al.Maternal antihypertensive medication use and congenital heart defects：updated results from the National Birth Defects Prevention Study[J].Hypertension，2017，69（05）：798-805.

[5] 任愛国，张雪娟，刘慧姝，等.围受孕期增补叶酸预防神经管缺陷指南（2017）[J].中国生育健康杂志，2017，28（05）：401-410.

[6] Jenkins M M，Reefhuis J，Herring A H，et al.Impact of sample collection participation on the validity of estimated measures of association in the National Birth Defects Prevention Study when assessing gene-environment interactions[J].Genetic Epidemiology，2017，41（08）：834-843.