梅山猪伪狂犬病净化的研究

朱效俊，王 勃，丘沛炎，唐赛涌，卫金良，甘叶青，姜琴芳，赵羽丰

（1.上海市嘉定区动物疫病预防控制中心，上海 嘉定 201807；2.赣州傲新牧业开发有限公司，江西 赣州 341000）

猪伪狂犬病（PR）是由猪伪狂犬病病毒（PRV）引起的猪的一种急性、热性、高度传染性疫病，临床症状随感染猪年龄不同而有很大差异，断奶前后仔猪主要表现呼吸系统症状，也有部分出现神经症状，拉稀、呕吐，但以腹泻为症状的相关报道较少[1]。PR的传播途径较多，经消化道、呼吸道、损伤的皮肤以及生殖道均可感染。仔猪常因吃了感染母猪的奶而发病；怀孕母猪感染本病后，病毒可经胎盘而使胎儿感染，引起流产和死产；病猪和隐性感染的猪可以长期排毒，严重影响母猪的繁殖力。PRV主要通过公猪精液、母猪胎盘传播，亦可以水平传播[2]。

近年来大多数猪场伪狂犬病病毒感染随着胎龄的增加而呈上升趋势，PRV可感染各种年龄段的猪，易与猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征和猪传染性胸膜肺炎等疫病继发或混合感染，又可致猪隐性感染，而隐性感染的带毒猪是规模化猪场发生PR的主要传染源之一[3]。梅山猪猪场使用猪伪狂犬病基因缺失疫苗对初生仔猪滴鼻通过黏膜免疫。占位效应，让疫苗先占领野毒侵害的位置，再配合肌肉注射，可以大幅减少仔猪感染野毒的几率，从而减少猪场的发病率[4]。笔者研究的课题主要通过“加强免疫、扩群、检测、淘汰”等模式成功净化猪群伪狂犬病，为其它相关猪场净化防控PRV提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 主要试剂 猪伪狂犬病gB-ELISA抗体检测试剂盒，购自美国IDEXX公司，批号：GP547。猪伪狂犬病gE-ELISA抗体检测试剂盒，购自美国IDEXX公司，批号：JP793。荧光PCR试剂盒，购自湖南润美基因科技有限公司，批号：19081501。

1.1.2 试验时间、地点、试验猪与疫苗来源 2017年5月至2020年6月选择嘉定区梅山猪育种中心全群种猪，在嘉定区嘉唐公路1991号进行此试验。本试验针对梅山猪育种中心全群271头种猪进行净化。生产数据来源于嘉定区梅山猪育种中心2016年368头经产母猪所产699窝8 354头仔猪的分娩记录、2017年235头经产母猪417窝4 989头仔猪的分娩记录、2018年179头经产母猪352窝4 453头仔猪分娩记录、2019年172头经产母猪334窝4 258头仔猪的分娩记录。疫苗来源：生产公母猪及其后备公母猪接种疫苗来自梅里亚有限公司法国生产厂，猪伪狂犬病基因缺失疫苗（Bartha株），疫苗批号：L447800。初生仔猪滴鼻接种疫苗和中猪接种疫苗均来自勃林格殷格翰动物保健（美国）有限公司，猪伪狂犬病基因缺失疫苗（Bartha株）疫苗批号：1951137A。

1.1.3 试验设计与猪群免疫程序 对全场所有生产公母猪和后备公母猪全部进行猪伪狂犬病gE有感染抗体的检测，阳性淘汰，阴性留用。定期消毒，加强免疫，生产公母猪每季度使用梅里亚伪狂犬病疫苗（Bartha株）接种1次，每次颈部肌肉接种2头份。仔猪初生当日使用勃林格伪狂犬病疫苗滴鼻通过黏膜免疫接种1头份，45日龄、120日龄分别使用勃林格伪狂犬病疫苗免疫接种1头份。后备种猪在配种前使用梅里亚伪狂犬病疫苗普免2次，每次1.5头份，间隔3～4周。

1.1.4 猪场伪狂犬病监测数据追溯分析 图1是2013年起每年2次对梅山猪种群PR抗体检测的数据，感染率分别为68.75%、60.00%、80.00%、70.00%、56.67%、43.33%、37.14%、34.29%、42.18%。图1说明梅山猪母猪群体存在PRV野毒感染，说明猪场PR较为严重，PR感染比例较高，经过加强猪群系统性的防控，并扩大后备猪种群，逐步建立阴性猪群。2015—2017年感染状况有下降趋势，但需要淘汰指数较高。

1.2 方法

1.2.1 样品采集 定期采集梅山生产公母猪、后备公母猪、商品猪血液、公猪精液、猪扁桃体和初生仔猪脐带血。

1.2.2 测定方法 PRV gE抗体检测和PRV gB抗体检测，采用阻断酶联免疫吸附试验（ELISA）方法和荧光PCR方法进行：检测到gE抗体阳性的样品可初步判断该猪为PRV野毒感染，gE抗体阴性的样品为健康猪；检测到gB抗体为阳性说明该猪有免疫抗体，gB抗体为阴性说明该猪免疫失败。公猪精液和初生仔猪脐带血采用荧光PCR方法进行检测。

1.2.3 饲养管理 自繁自养、全进全出、多点式饲养。加强猪场门口来往人员、车辆的控制与消毒；限控饲养员、技术员等一线人员外出或串棚，场外人员不得进去生产区。防止流浪犬猫等动物串入场内，采取严格的灭鼠措施，并定期开展灭虫、灭蚊、灭苍蝇等工作。每天保持栏舍干净，每周全场彻底消毒1次，对猪舍、栏圈、内外环境、用具、运输工具以及其它一切可能被污染的场所和设施、设备进行严格消毒，并将消毒工作规范化、制度化。隔离病猪，淘汰感染无价值的病猪。对死亡猪只、死胎、流产物等进行病原检测和无害化处理。建立合理的免疫程序，严格执行免疫接种的操作规程，选用高效优质疫苗，确保易感猪群始终得到疫苗抗体的保护。根据各阶段猪的营养需要，提供营养均衡、适宜的饲料。

1.2.4 数据分析方法 采用Excel软件对数据进行初步分析，用SPSS软件计算各指标的平均值和标准差，并对各指标进行显著性分析，当P<0.05时表示差异显著，P>0.05时表示差异不显著。

2 结果与分析

2.1 2017—2020年种猪PRVgE抗体和PRVgB抗体水平

表1是2017—2020年对种猪监测情况，2017年5月份开展梅山猪PR的净化，5月份共采集梅山猪生产公母猪及其后备公母猪血样271份，检测结果77份PRV gE阳性，其中公猪8头阳性（杜洛克公猪2头），阳性率28.4%，按照净化要求进行全部淘汰处理。表1看出除2017年12月抽检和2018年5月全群检测各排查出1例，其它批次检测PRV野毒阳性率都为0，2018年10月之后全群抽检PRV野毒阳性头数为0。2018—2019年抽检PR gB抗体阳性率分别为：100.00%、96.77%、90.00%、100.00%，说明近年来PR净化工作见其效，免疫水平较高，还需继续加强疫病防控工作，2018年10月至2020年已逐步转阴，猪群较稳定。

表1 2017—2020年种猪PRV-gE抗体和PRV-gB抗体水平

2.2 梅山种公猪精液及母猪扁桃体的荧光PCR检测

由表2可知，PRV gE抗体阳性数为0，初步判断抽检猪群未感染PR野毒，猪群健康相对稳定。

表2 梅山公猪精液及母猪扁桃体的荧光PCR检测

2.3 初生仔猪脐带血PRV野毒感染抗体PCR检测

表3是从2017年5月份开始对刚初生仔猪脐带血PRV野毒感染抗体进行抽检，每窝随机采集2头仔猪的脐带血，共计148头份。实验室检测结果：PRV野毒感染抗体阴性，判断为健康仔猪，母猪PRV野毒初步判断为阴性。

表3 初生仔猪脐带PRV野毒感染抗体PCR检测

2.4 探索猪各阶段抗体变化及其PRV感染状况，制订合理免疫程序

图2是2018年12月对猪各阶段主要免疫疫病抗体水平摸底，每阶段采集20份血样，合计180份。监测表明猪瘟抗体水平全程整体较好，发生猪瘟的风险降低，伪狂犬病母源抗体维持到72日龄一直在较高水平，伪狂犬病疫苗免疫程序由原来42日龄改为80日龄。猪口蹄疫抗体水平在35日龄时是65%，之后抗体水平更较差，免疫失败，感染疫病风险增加，应及时调整免疫方案和追踪监测，将原有口蹄疫疫苗首免日龄由55日龄提到45日龄，二免日龄改为66日龄，三免100日龄。猪蓝耳病抗体15日龄时是90%，应该属于母源抗体保护，之后抗体水平较差，到90日龄后抗体升高属于疫苗抗体，120日龄补免后高抗体持续到肥猪，说明免疫失败，疫病风险增加，应该考虑疫苗接种时间和疫苗效价，及时追踪免疫效果，将蓝耳病疫苗免疫接种时间由原来28日龄改为17日龄。

2.5 商品猪PRV gE和gB抗体检测

表4是2018年之后对商品猪血样伪狂犬病抗体和感染抗体的监测，商品猪共采集821份，其中2018年12月批次2头商品猪感染，并且2批次抗体水平分别是28.5%、60.5%，说明猪群仍然存在猪伪狂犬病野毒，抗水平较差，应加强免疫防控。2019年12月以后5批次399份样品猪伪狂犬病感染抗体为0，其中抽检2批次抗体水平分别95%、94.3%，说明防疫较好，2019年12月以来未检测出伪狂犬病野毒感染，猪群转阴。

表4 商品猪PRV gE和gB抗体检测

2.6 净化前后生产成绩评估

表5是2016—2019年经产母猪繁殖情况，由表5可见，2017年与2016年窝均产仔数和窝均产活仔数差异均不显著（P>0.05），2018年、2019年窝均产仔数和窝均产活仔数与2017年和2016年相比差异显著（P<0.05）。2016—2019年窝均产活仔数分别是10.88头、10.91头、11.97头、11.99头，净化后2019年窝均产活仔数比2016年高1.11头，提高了10.20%，净化后生产指标明显高于实施疫病净化前。

表5 2016—2019年梅山猪产仔情况

3 小结

试验研究依靠高效的伪狂犬病疫苗、合理免疫接种、提高生物安全等措施预防伪狂犬病野毒感染，提高全群抗体水平，抗体水平达到90%以上，阻断PRV的传播，经检测群体PRV转阴，达到免疫净化目的，窝产活仔数比净化前2016年提高1.11头。

4 讨论

本课题于2017年5月份正式启动和实施，课题实施前做了大量准备工作，梅山猪育种中心通过采用“加强免疫、扩群、检测、淘汰”的疫病净化模式，于2019年猪伪狂犬病经检测群体转阴，迄今猪群猪伪狂犬病感染抗体维持阴性，该病在本场得到有效净化，以下几点总结可为其它猪场净化猪伪狂犬病工作提供借鉴。

自繁自养型生产模式是保证猪场生物安全性的重要措施之一[5]。坚持自繁自养、全进全出等管理模式，严格引种制度，引种来源应属于阴性猪场，并经检测合格后再引种，引种后要隔离饲养30 d后，确定伪狂犬病、猪瘟、非洲猪瘟、蓝耳病等传染性疫病为阴性方可入场，从种源上杜绝病原传入。隔离病猪，淘汰感染无价值的病猪。对死亡猪只、死胎、流产物等进行病原检测和无害化处理。

加强猪场门口来往人员、车辆的管控与消毒措施；限制生产区人员流动，需要外出人员做好消毒隔离，方可入场，场外人员不得进去生产区。每天做好猪舍环境卫生，保持圈舍干燥，做好夏季防暑降温和冬季保暖工作，加强通风，防止氨气过重诱发呼吸道疾病，影响疫病防控效果。每周定期对猪舍、栏圈、内外环境、用具、运输工具以及其它一切可能被污染的场所和设施、设备进行严格的消毒，并制定消毒制度。定期驱除猪体内外及其环境中的寄生虫，禁止犬猫等动物进入场内。由于猪伪狂犬病的传染链有鼠类参与，给该病的净化带来相当大的难度，因此做好防鼠灭鼠工作是规模化猪场控制净化PR的关键[6]。采取定期的灭鼠措施，并开展灭虫、灭蚊、灭苍蝇等工作。

疫苗是防控PR感染与传播的重要手段[7]。虽然现使用疫苗对PRV变异毒株的保护力减弱，但有研究表明增加现使用PRV疫苗的免疫次数对变异毒株仍具有一定的保护效果[8]。对阳性猪场，加强母猪免疫的同时还需要仔猪滴鼻通过黏膜免疫和肌肉注射相结合，滴鼻能建立黏膜免疫，并且起到占位效应，阻断伪狂犬病病毒对呼吸道的攻击，又能有效避免母源抗体的干扰，但是肌肉注射的免疫方式受母源抗体影响较大，甚至导致免疫失败[9]。有文献显示，伪狂犬病母源抗体最高能维持8～12周[10]，因此要根据猪场实际情况，摸索抗体变化规律，并建立合理的免疫程序，选择优质疫苗，严格免疫接种的操作规程，确保易感猪群始终得到疫苗抗体的保护，依靠疫苗毒压制野毒，控制野毒排放，阻断垂直传播，使猪场相对稳定，然后加强监测力度，通过实验室监测、隔离淘汰阳性猪。

预防饲料霉菌毒素的危害，做好免疫抑制性疫病的防控，定期检测蓝耳病与圆环病毒病的感染动态。尽量减少试验以外因素的干扰，从而保证试验结果的准确性。还要根据各阶段猪的营养需要，提供营养均衡、适宜的饲料。