2019年新疆部分地区规模化猪场猪瘟病毒抗体检测与分析

张家瑞，阿丽亚·买买提依明，屈勇刚，谷思颖，魏 其，吴圆圆，李 静，常军帅，李 岩

（1.石河子大学动物科技学院，新疆 石河子 832003；2.新疆石河子市石河子镇农林牧办，石河子 832000；3.新疆生产建设兵团畜牧兽医工作总站，乌鲁木齐 830063）

猪瘟（CSF）是家猪和野猪最具破坏性的病毒性传染病之一，在世界范围内具有重大的经济和社会影响，猪瘟也在世界动物卫生组织（OIE）规定必须上报动物疫病之列[1]。CSF在我国也属于一类动物传染病，当前猪瘟疫情多呈现散发且缺乏一定的规律性。CSF隐蔽性强，导致饲养主和卫生防疫部门在日常生产中不能及时发现疫情，再加上对于预防猪瘟疫情的忽视，最终将会因暴发猪瘟疫情而持续影响经济效益[2]。自新疆开始将猪瘟纳入强制免疫计划中以来，暴发性猪瘟疫情已经基本得到控制，但依然会存在免疫效果不佳等因素，所导致潜伏感染型非典型猪瘟的长期存在，严重影响了新疆当地养猪业的发展[3]。疫苗免疫依然是预防猪瘟的重要手段，抗体检测可以为控制当地疫病流行提供参考。使猪群长期保持较高的群体免疫水平，是一种规模化猪场防控潜伏感染型CSF的有效措施[4]。为了解2019年全年新疆部分地区CSF的免疫抗体水平，本试验选择巴州、伊犁、塔城、阿克苏、奎屯、石河子6个地区的6个规模化猪场进行分析，以期为新疆地区猪瘟防疫工作提供参考。

1 材料与方法

1.1 样品来源

样品是从2019年1月至2020年1月分批次采自新疆巴州、伊犁、塔城、阿克苏、奎屯、石河子6个地区，共594份血清样品。其中，哺乳仔猪血清81份，保育猪血清49份，后备猪血清63份，肥育猪血清35份，经产母猪血清279份，种公猪血清87份，共594份血清样品。

1.2 诊断试剂盒和仪器

诊断用猪瘟病毒（CSFV）ELISA抗体检测试剂盒（北京爱德士元亨生物科技有限公司），自动酶标仪（美国BioTek公司）。

1.3 试验方法

1.3.1 采集样品 选择有代表性的规模化猪场，按照3～5 mL/头的标准，一次性从猪前腔静脉进行血液采集，经无菌保存至石河子大学实验室待处理，随后经过30 min左右的室温静置，待血清析出后，逐管吸取1 mL血清于灭菌的1.5 mL EP管中，分组编码标记，以4 000 r/min的转速离心10 min，直接进行ELISA检测，也可保存于-20℃条件下备用。

1.3.2 间接ELISA检测法 按照猪瘟病毒ELISA抗体检测试剂盒说明书进行操作。按要求取出CSFV抗原包被板，不做任何前期处理，直接在包被板中将样品血清、阳性对照、阴性对照与稀释液按照50 μL样品血清或对照试剂加50 μL稀释液进行1∶1比例稀释，混匀后置于恒温保湿条件下进行2 h孵育，经过3次洗涤后加入酶标抗体（抗CSFV辣根过氧化物酶标记物），置于恒温保湿条件下进行30 min孵育，再次洗涤3次后加入TMB底物溶液，置于恒温保湿的避光条件下放置10 min（第1孔开始反应即可计时），加入终止液终止反应并在10 min内用酶标仪以450 nm波长测定各反应孔中的OD450值，据OD450值对抗体水平进行判定。

1.3.3 结果判定 试验有效判定为NCx（阴性对照的 OD450值）＞0.500，PCx（阳性对照的 OD450值）阻断率%≥50%；样品阻断率（%）=100%×[NCxA（450）-样品 A（450）]/NCxA（450）。若被检样品的阻断率≤30%，该样品为阴性（无CSFV抗体）；若被检样品的阻断率≥40%，该样品为阳性（有CSFV抗体）；若被检样品的阻断率在30%～40%之间，该样品判为可疑，需要对其重新检测。计算变异系数（CV）=（标准差/平均数）×100%。若CV≤40%，则抗体水平整齐，免疫效果良好；若40%＜CV≤60%，则抗体水平一般；若CV＞60%，则抗体水平不整齐，免疫效果不好。

1.3.4 试验数据分析 使用SPSS 20软件对数据进行统计学分析。

2 结果与分析

2.1 不同地区规模化猪场猪瘟抗体水平

6家规模化猪场共594份猪血清，猪瘟病毒抗体平均阳性率为85.02%，平均阻断率为（67.77±24.00）%，离散度为 37.05%。6家规模化猪场（A、B、C、D、E、F） 的抗体阳性率分别为 92.28%、92.00%、93.75%、85.96%、90.36%和 66.89%。A、B、C、D、E 5个规模化猪场的猪瘟病毒抗体阳性率均高于国家规定水平（＞70%），且上述猪场的离散度较小。F场的猪瘟病毒抗体阳性率（66.89%）较低于国家规定水平且抗体水平差异性较大。使用SPSS软件进行单因素方差分析显示各猪场猪瘟病毒抗体水平差异显著（P＜0.05），结果见表 1。

表1 新疆部分地区6个规模化猪场猪瘟病毒抗体检测结果

2.2 不同类别猪群的猪瘟抗体水平

哺乳仔猪、保育猪、后备猪、肥育猪、经产母猪、种公猪的猪瘟抗体阳性率分别为75.00%、65.31%、90.48%、85.71%、92.11%和91.95%。不同类别猪群的猪瘟抗体水平存在较大差异。其中，后备猪、经产母猪和种公猪的抗体阳性率高达90%以上，保育猪的抗体阳性率最低为65.31%。哺乳仔猪、保育猪、后备猪、肥育猪、经产母猪、种公猪的猪瘟抗体阻断率分别为（58.89±28.37）%、（46.91±28.10）%、（76.28±19.03）%、（59.51±20.50）%、（73.37±20.95）%和（69.45±20.29）%。结果见表2。

表2 不同类别猪群猪瘟免疫抗体检测结果

3 讨论

试验结果表明，2019年新疆巴州、伊犁、塔城、阿克苏、奎屯、石河子6个地区的6个规模化猪场中有5个猪场的猪瘟抗体阳性率在国家规定水平（70%）以上，只有1个猪场的猪瘟抗体阳性率低于70%，造成该猪场抗体水平较低的原因有很多，如猪场饲养环境、免疫方法等相关导致免疫失败的因素都会影响猪瘟免疫的效果，应结合猪场的实际生产情况来调整免疫程序。根据刘鸽等[5]研究报道，规模化猪场猪瘟抗体合格率达到89.89%，北疆地区所检测的规模化猪场中有87.5%（14/16）的猪场猪瘟抗体阳性率达国家规定水平（70%）以上，其结果在一定程度上说明新疆北疆地区的猪场猪瘟抗体水平较高。根据覃绍敏等[6]研究报道，离散度的理论数值偏小时（≤40%），也能说明猪场散发猪瘟的危险度小。A、B、C、D、E 猪场的离散度均≤40%，抗体整齐度好，表明其免疫效果良好。仅F猪场的离散度介于40%～60%间，抗体水平整齐度一般，且抗体平均阳性率未达到国家标准，表明其免疫效果较差，建议加强猪瘟免疫防控。

不同类别猪群猪瘟免疫抗体检测结果表明，哺乳仔猪阳性率为75.00%，但保育猪的抗体水平较低（65.31%），表明该类别的猪群免疫效果不好，需要调整为更合理的免疫程序。后备猪、肥育猪、种公猪、经产母猪的阳性率分别为90.48%、85.71%、91.95%和92.11%，表明其免疫效果较好。结合刘功成等[7]研究报道，建议仔猪断奶后进行免疫，并适时加强免疫1次，以确保仔猪进入保育阶段后可保持较高的猪瘟抗体水平。

对于规模化猪场在猪瘟的防控中，疫苗免疫接种仍是一种有效手段，疫苗免疫水平的监测始终起到调整完善各猪场免疫程序的关键作用。根据抗体水平波动情况对免疫接种方案及时做出正确判断，并采取有效的措施来提高疫苗免疫效果，及时做好疫苗补免与淘汰工作，做到防微杜渐，以确保新疆生猪养殖事业能够长久稳定的发展。