东海县2019-2020年羊口蹄疫和小反刍兽疫抗体检测分析

闫颖颖 李艳阳 胡传利

（东海县畜牧兽医站，江苏东海 222300）

东海县是畜牧大县，养羊业在我县的畜牧业中占有重要地位，口蹄疫和小反刍兽疫是危害养羊业的主要疫病，2016年～2018年，农业部将口蹄疫、小反刍兽疫都列为国家强制免疫病种，东海县作为养殖大县，积极做好这两种疫病的疫苗免疫工作，调查研究表明，疫苗本身的质量、地区免疫程序、防疫注射人员的操作等多方面存在的问题导致疫苗免疫以后体内的抗体水平参差不齐，不能有效的保护动物群体[1]。免疫抗体检测是评价疫苗免疫效果的常用方法，通过免疫监测，可以准确了解疫情动态，根据监测情况进行综合免疫防控[2]。为了更好的预防和控制这两种传染病，本研究对我县2019～2020年免疫羊群共计936份样品进行抗体水平检测，并进一步了解我县的疫病防控情况以及存在的问题，提出相应的解决办法及建议，为我县的养羊业健康发展保驾护航。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 羊群疫苗免疫注射

由东海县畜牧兽医站提供的政府招标的强制免疫疫苗，于每年的春秋季安排动物防疫组织集中进行强制免疫接种。疫苗在储存、运输过程、使用全程冷链。具体接种方式为：口蹄疫疫苗每年春秋两季集中免疫，1mL/只，肌肉注射，间隔28天进行二免；小反刍兽疫疫苗每年春秋两季集中免疫，1头份/只，皮下注射。

1.1.2 免疫羊群血清样品采集

强制免疫结束以后，安排防疫人员采集血液样品，分离血清待检。所采集的样品均来源于政府统一招标免疫的羊群。

1.1.3 检测试剂

O型口蹄疫液相阻断ELISA抗体检测试剂盒（厂家：兰州兽医研究所）、小反刍兽疫阻断ELISA 抗体检测试剂盒（厂家：青岛立见）。

1.1.4 仪器设备与器材

酶标仪（BIO-RAD iMark）、离心机（卢湘仪 TD 4）、恒温培养箱（上海森信 HWS-250）、全自动高压灭菌器（重庆雅马拓SQ510C）、微型振荡器（国华 ZW-A）。

离心管、移液器、一次性采血器等。

1.2 方法

1.2.1 血清样品的采集方法

被检羊颈静脉采集全血3ml/只，室温静置2～3h以后，3000r/min离心5min，无菌分离血清，做好标记，置于-20℃冰箱待检。

1.2.2 口蹄疫抗体检测方法

根据国标GB T 18935-2018，采用液相阻断ELISA方法，按照口蹄疫O型液相阻断抗体检测试剂盒说明书的操作步骤进行检测。

1.2.3 小反刍兽疫抗体检测方法

根据《小反刍兽疫阻断ELISA抗体检测技术要点及注意事项》（任立强2016），采用阻断ELISA方法，按照青岛立见小反刍兽疫病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒的说明书对待检样品进行检测。

2 结果与分析

2.1 2019～2020东海县羊O型口蹄疫免疫抗体检测结果与分析（表1）

从表1可以看出，东海县2019年春季羊O 型口蹄疫的免疫抗体合格率为71.74%，2019年秋季羊O型口蹄疫的免疫抗体合格率为94.35%，对比春季O型口蹄疫免疫抗体合格率提高了22.61个百分点，差异显著（P＜0.05），2020年春季羊O型口蹄疫的免疫抗体合格率为90.11%，与2019年秋季相比，下降了4.24个百分比，但是同比增加了18.37个百分点，差异显著（P＜0.05）。

从图1中可以更直观的对各个乡镇的羊群O型口蹄疫免疫抗体情况进行比较分析，可以看出，除开发区、洪庄镇、温泉镇等少数几个乡镇，其他多数乡镇羊O型口蹄疫的免疫抗体合格率稳步提高。从图3可以直观的看出，东海县羊O型口蹄疫三次集中免疫抗体合格率上升趋势明显，显著提高。

图1 2019～2020年东海县羊O型口蹄疫免疫抗体情况

2.2 2019～2020东海县羊小反刍兽疫免疫抗体检测结果与分析（表1）

通过表1可以看到，东海县2019年春季到2020年春季羊群小反刍兽疫的免疫抗体合格率在逐步提高，2019年春季羊群小反刍兽疫的免疫抗体合格率为87.32%，2019年秋季羊群小反刍兽疫的免疫抗体合格率为88.91%，提高了1.59个百分点，2020年春季羊群小反刍兽疫的免疫抗体合格率为92.86%，同比和环比分别增加了5.54和3.95个百分点。

图2 2019～2020东海县羊小反刍兽疫免疫抗体情况

根据图2显而易见，只有石榴街道、平明镇、曲阳乡等几个乡镇（街道）羊小反刍兽疫的免疫抗体合格情况不是特别稳定，忽高忽低，三次检测情况，平明镇的免疫抗体合格率连续下降，其余乡镇的抗体合格率逐次上升。

图3 东海县2019～2020羊O型口蹄疫和小反刍兽疫免疫抗体情况

图3表明，2019～2020年东海县羊O型口蹄疫和小反刍兽疫的免疫抗体合格率均达到农业部的强制免疫要求（70.00%以上），呈上升趋势，东海县羊小反刍兽疫三次集中免疫抗体合格率稳步提高，上升趋势缓慢。羊O型口蹄疫免疫抗体合格率上升明显，大幅提高。

表1 东海县2019～2020年羊口蹄疫和小反刍兽疫免疫抗体情况

3 讨论与分析

东海县是畜牧养殖大县，从2018年实行政府购买服务，本地区中小规模以及散养家畜家禽的集中免疫工作由动物防疫组织来承担，通过对免疫抗体的检测，一方面监测辖区内的动物疫病的免疫情况，指导疫病防控工作，另外一方面作为评价动物防疫组织工作的绩效指标之一。

3.1 羊O型口蹄疫与小反刍兽疫疫苗免疫抗体检测结果分析

3.1.1 羊O型口蹄疫疫苗免疫抗体检测结果分析

东海县2019～2020年春三次集中免疫羊O型口蹄疫的平均抗体合格率分别是74.18±15.92%、93.85±11.94%、90.88±19.63%，表明东海县整体羊O型口蹄疫的免疫抗体水平整体在上升，2019年秋季免疫抗体水平较高，2020年春季的整体抗体水平略有降低，原因在于个别乡镇免疫抗体水平参差不齐而导致，这可能是由于每个乡镇（街道）的养殖场的防疫意识和免疫人员的操作技术有关。对比2019年春季全县羊O型口蹄疫的免疫抗体水平，2019年秋和2020年春全县羊O型口蹄疫的免疫抗体水平有大幅提升（P＜0.05）。

3.1.2 羊小反刍兽疫疫苗免疫抗体检测结果分析

东海县2019～2020年春三次集中免疫羊小反刍兽疫的平均抗体合格率分别是87.18±12.52%、89.95±11.17%、95.94±7.96%，小反刍兽疫免疫抗体水平逐次稳步提升，这反映了我县小反刍兽疫的免疫程序合理，免疫操作技术规范，使得我县羊小反刍兽疫的免疫取得了较好的效果。

3.2 影响羊O型口蹄疫和小反刍兽医免疫抗体合格率的因素分析

3.2.1 疫苗因素

一方面，疫苗下发以后，个别的防疫人员保存不当，在高温季节导致疫苗失去活性，从而导致动物免疫注射以后没有抗体产生[3]。另一方面，免疫操作人员未按照疫苗使用注意事项操作，造成注射的疫苗没有免疫效果[4]。

3.2.2 动物个体因素

第一、羊群的健康水平的影响。防疫人员在疫苗免疫接种之前，应先提前筛选老龄羊、身体较为瘦弱的羊和患病羊，对这些羊应禁止疫苗免疫接种[3]；第二、动物体内本身的母源抗体情况，在幼畜年龄过低，体内母源抗体水平较高时，注射疫苗，会产生中和反应，使幼畜不能产生自身抗体，同时体内母源抗体的水平也降低[1，5、6]；第三、其他的免疫抑制情况，免疫前，羊已经感染其他细菌或病毒，或使用抗生素等药物，这个时候接种疫苗就会出现免疫抑制问题导致免疫效果不足[1]。

3.2.3 免疫操作过程中存在的问题

首先，免疫程序制定不合理，调查发现口蹄疫预防一次并不能达到很好的免疫保护作用，通常在免疫接种1个月后，需要进行第二次疫苗加强免疫接种，免疫人员缩短接种间隔期或者图省事没有进行强化免疫，导致机体抗体与后来的疫苗产生中和反应，从而影响到免疫效果[1，7]。其次，免疫操作不规范。疫苗免疫接种对技术操作人员提出了很高要求，防疫工作者在疫苗免疫时注射方法的不正确也会导致免疫失败，例如注射部位、注射剂量掌握不准确，应该皮下注射的为了方便采用肌肉注射，随意加减疫苗注射量等[1]。

3.3 结论

农业部对羊O型口蹄疫和小反刍兽疫的强制免疫要求是免疫后免疫抗体合格率大于70.00%，东海县2019～2020年羊O型口蹄疫和小反刍兽疫的整体免疫合格率均高于农业部的标准，表明我县在羊的疫病防控工作中取得了较好的成效，提高了易感动物的机体免疫能力，能够有效的保护羊群抵抗O型口蹄疫和小反刍兽疫的发生与流行，降低我县羊群发生O型口蹄疫和小反刍兽疫的风险。