腺苷酸环化酶相关蛋白2、纤维连接蛋白1表达与胃癌病理类型及预后关系探讨

马 蓉,张新爱,杨 洋,吴红梅

(宝鸡市人民医院病理科,陕西 宝鸡721000)

胃癌是常见恶性肿瘤，具有较高的发病率，在我国致死率仅次于肺、肝癌[1]。尽管手术及放、化疗对其生存情况有所改善，但其5年生存率仍较低，严重影响人类健康[2]。有研究表明分子生物标志物的发现和应用将改善患者的预后，腺苷酸环化酶相关蛋白2(Adenylate cyclase-associated protein 2,CAP2)存在于人体的脑、心脏、骨骼、肌肤中，有研究表示其在肝癌、乳腺癌、膀胱癌等肿瘤组织中呈现高表达，近来研究表明其与胃癌的发展及预后也存在一定关系[3]。纤维连接蛋白1(Fibronectin,FN1)是细胞外基质糖蛋白，参与基质重塑，在细胞黏附、生长中发挥作用，与肿瘤、关节炎等疾病相关[4]。本研究探讨胃癌及癌旁组织中CAP2、FN1的表达及其表达量与患者病理类型及预后的关系，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2016年2月至2017年12月来我院行胃癌根治术手术切除术患者118例，男63例，女55例，年龄为26～73岁，平均(48.59±7.34)岁。所有患者术后切除标本于30 min内采集，并取离肿瘤边缘5 cm以上的癌旁组织作为对照。病例纳入标准：①接受手术前未经过放、化疗，术后经病理确诊为胃癌；②患者均同意进行手术；③患者病历资料完整。排除标准：①合并恶性肿瘤患者；②伴有心、肝、肾等重大疾病患者；③不能完成随访患者；④术中死亡患者。本研究经医学伦理委员会同意。

1.2 检测方法 采用免疫组化法检测胃癌组织及癌旁组织中CAP2、FN1的表达情况。步骤：切片、烤片，常规脱蜡后，用梯度酒精脱水处理，再进行微波抗原组织修复15 min，冷却后用PBS冲洗，再用3% H2O2孵育10 min，PBS冲洗2次后，加入正常山羊血清进行封闭20 min，加入兔单抗CAP2(或兔单抗FN1)，37 ℃下孵育1 h，TBST冲洗2次。加入鼠兔通用二抗，37 ℃下孵育1 h，PBS冲洗2次，再行DAB显色、苏木素复染、脱水、透明等，最后用中性树胶封片，显微镜下观察。参考Sung等[5]标准，出现棕黄色颗粒为CAP2及FN1表达阳性细胞，以0～4分来判定阳性细胞的百分比(阳性细胞数/总细胞数×100)：阳性细胞百分比<5%(0分)；阳性细胞百分比为6%～25%(1分)；阳性细胞百分比为26%～50%(2分)；阳性细胞百分比为51%～75%(3分)；阳性细胞百分比>75%(4分)。染色强度按无染色，弱、中、强染色分别评为0、1、2、3分。以两个指标的乘积(IS)作为总评分：<4分为低表达，≥4分为高表达。

1.3 观察指标 以电话及门诊形式对所有患者进行随访，随访内容包括：患者病情进展、影像学检查，记录患者生存情况，在第1年每3个月随访1次，第2～3年，每6个月随访1次，随访截止时间2020年2月。

2 结 果

2.1 CAP2、FN1在胃癌组织及癌旁组织中的表达 CAP2、FN1在胃癌组织中呈高表达(P<0.05)，在癌旁组织呈低表达(P<0.05)，见表1。

表1 CAP2、FN1在胃癌组织及癌旁组织中的表达(例)

2.2 胃癌病理类型与CAP2、FN1表达的关系 CAP2、FN1表达与组织分化、淋巴结转移、浸润深度有关(均P<0.05)，与性别、年龄、癌细胞类型、肿瘤部位、肿瘤大小无关(均P>0.05)，见表2。

表2 胃癌病理类型与CAP2、FN1表达的关系(例)

2.3 CAP2、FN1表达与预后关系 随访3年，存活71例，总生存率为60.17%。CAP2低表达组的3年生存率为76.47%，高于CAP2高表达组的47.76%(P<0.01)；FN1低表达组的3年生存率为77.55%，高于FN1高表达组的47.83%(P<0.01)，见表3(图1)。

表3 CAP2、FN1表达与预后关系

图1 CAP2、FN1表达与生存分析

3 讨 论

多数胃癌患者确诊时已处于晚期，患者预后较差，若能从分子水平探究胃癌的发病机制，寻找新的预后指标，并进行靶向治疗，将有利于延长患者的生存时间[6]。CAP2最初在酵母中发现，能够调控信号转导及细胞骨架，在调节肌动蛋白细胞骨架中起着重要作用，与细胞迁移相关，是肿瘤发生、转移的基础，能为分子靶向治疗提供依据[7]。在肝细胞癌、乳腺癌中CAP2均呈高表达，并与患者生存情况有关[8]。还有研究[9]表明CAP2在恶性黑色素瘤中过表达，参与了恶性黑色素瘤的侵袭行为，是其预后的一种新标志物。本研究中，CAP2在胃癌组织中呈高表达，其表达量与组织分化、浸润深度、淋巴结转移有关，说明CAP2参与胃癌的发生与发展。CAP2定位于ras基因的下游，参与了细胞的极化，能够通过调节细胞增殖活性，从而促进肿瘤的发生[10]。还有研究[11]表明CAP2通过促进LRP5/6磷酸化，参与Wnt信号调节，从而影响胃癌发展。CAP2低表达组的3年生存率为76.47%，高于CAP2高表达组的47.76%，说明CAP2的表达量与胃癌患者预后相关，能作为预后的标志物。葛思堂等[12]研究表明CAP2在胃癌组织中的表达量均高于癌旁组织，且CAP2高表达组患者术后5年生存率低于低表达组，与本研究结果一致。Li等[13]研究表明CAP2在增强细胞运动中起着重要作用，在胃癌中表达水平上调，是胃癌的重要分子标志物。

FN1是一种多功能异二聚体糖蛋白，与宿主防御和转移相关，能够维持基底膜的稳定性，参与乳腺癌、鼻咽癌等多种疾病的发生与发展[14-15]。有研究[16]表明FN1被用于检测EMT标记物，还是头部颈鳞状细胞放射抗性的潜在生物标志物；也有研究[17]表明FN1通过激活MMP2/MMP9(EMT通路)促进胃癌细胞的增殖；同时在脑胶质母细胞瘤、肺癌、食管癌中均呈高表达，与预后显著相关。本研究中，FN1在胃癌组织中呈高表达，其表达量与组织分化、浸润深度、淋巴结转移有关，说明FN1参与胃癌的发生与发展。FN1低表达组的3年生存率为77.55%，高于FN1高表达组的47.83%，说明FN1表达量与胃癌患者预后相关。FN1与细胞黏附、细胞骨架蛋白调节有关，能通过调节A431-Ⅲ细胞中VEGF通路、PI-3K/Akt2通路，进而参与肿瘤的信号通路的调控[18]。孙阳等[19]研究表明FN1高表达是胃癌预后不良的因素，FN1使得肿瘤细胞具有运动性，使其具有侵袭及转移能力。

综上，CAP2与FN1在胃癌组织中表达水平均较高，其表达量与组织分化、浸润深度、淋巴结转移相关，参与肿瘤的进展，较高水平的CAP2与FN1表达会影响患者的生存情况，CAP2、FN1可作为肿瘤治疗的药物靶点。