网果酸模质量标准研究

许 京 王瑞海 刘丽梅 苗 青 严光俊 张秋海 杨诗龙 郭昌洪*

1.中国中医科学院中医基础理论研究所，北京 100700；2. 湖北省荆州市中医医院，湖北 荆州 434000

网果酸模为蓼科酸模属植物网果酸模RumexchalepensisMill.的干燥根及根茎，始载于《中药志》，又名红丝酸模、金不换，主要分布在湖北、江西、河南、浙江及安徽等地[1-3]，味苦性寒，具有清热解毒、通便、杀虫之功效，民间用于止血和治疗痢疾[4]。

网果酸模根及根茎为地方草药，其含有很强的抗真菌(白色念珠菌、红色发癣菌)的成分酸模素[5-6]，泻下主要药效成分之一蒽醌苷，抗菌消炎、抗肿瘤等作用成分游离蒽醌[7]，临床主要用于治疗消化道出血、幽门螺杆菌感染的相关性胃炎、消化性溃疡、十二指肠球部溃疡等[8-10]，具有很高的研究和应用价值。目前，网果酸模已有化学成分鉴定、含量测定、指纹图谱等研究[11-12]，但基础质量研究未见报道，因此，本实验将从显微鉴别、薄层鉴别(Thin Layer Identification，TLC)、水分、总灰分、酸不溶性灰分、醇溶性浸出物进行研究，为快速、准确的鉴别网果酸模提供科学依据，为完善、建立质量标准和提高临床疗效奠定基础。

1 仪器与材料

1.1 仪器 CX41 型光学显微镜(奥林巴斯公司)； INTA 2020D薄层扫描成像系统(北京泽祥佳燕科技有限公司)；电热古风干燥箱(上海一恒科学仪器有限公司)；KQ3200DB 型数控超声波清洗器(宁波新芝生物科技股份有限公司)；CP2202S电子天平(瑞士梅特勒-托利多)；高速万能粉碎机(北京科伟永兴仪器有限公司)；薄层层析硅胶 G 板(德国Merck 公司)；薄层层析硅胶 G 板(中国青岛海洋化工)。

1.2 材料 酸模素对照品(批号：PS170608-03)、大黄素对照品(批号：PS000259)、大黄酚对照品(批号：PS010475)、大黄素甲醚对照品(批号：PS000263)、大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷对照品(批号：PS010712)均购自成都普思科技股份有限公司；试剂均为分析纯。

实验用10样品均采自湖北省荆州市公安县章庄铺镇，生药学图片见图1-1、1-2、1-3，经黑龙江中医药大学王振月教授鉴定为网果酸模RumexchalepensisMill.的干燥根及根茎，粉碎后过50目筛，置于干燥器中备用。

2 方法与结果

2.1 性状 网果酸模饮片为类圆形、椭圆形或不规则厚片，外表皮棕褐色至灰褐色，可见皱缩纹。切面黄白色、黄色至棕黄色或黄棕色，具有明显的形成层环纹，部分可见纤维，断面显黄白色。本品质脆硬，掰断可见粉性烟尘，气特异，味微苦。

2.2 显微鉴别 药材样品粉末为黄棕色。取粉末少许，置载玻片中央，经水合氯醛液透化，加稀甘油2滴，拌匀，盖片；淀粉粒观察用水装片，应用自带摄像功能的光学显微镜拍摄显微图像，同步存入计算机中。草酸钙簇晶类圆形，棱角尖锐，直径22～52 μm，见图2-1;石细胞极少，近无色或淡棕黄色，呈类方形、多角形或梭形，壁厚，直径19～35 μm，见图2-2；纤维多成群或离散，长梭形，稍弯曲，一端稍钝圆，一端尖锐，或两端渐尖，壁厚，孔沟明显，长300～530 μm，直径20-45 μm，见图2-3；具缘纹孔导管、梯纹导管常见，直径18-66 μm，见图2-4；木栓细胞近长方形，无色或棕色，垂周壁波状弯曲，见图2-5；淀粉粒众多，单粒类圆形、椭圆形或肾形，直径4～19 μm，脐点点状或裂缝状，复粒由2～3分粒组成，见图2-6。

2.3 网果酸模薄层的薄层鉴别

2.3.1 对照品的制备 精密称取酸模素对照品、大黄素对照品、大黄酚对照品、大黄素甲醚对照品、大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷对照品适量，加甲醇分别制成每1 mL含酸模素、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷对照品分别为482.4 μg、116.8 μg、302.8 μg、99.2 μg、99.6 μg的溶液。

2.3.2 供试品溶液的制备[13]取本品粉末1.0 g，加甲醇10 mL，超声30 min，滤过，取滤液5 mL，蒸干，残渣加甲醇l mL使溶解，作为供试品溶液。

2.3.3 酸模素及蒽醌薄层条件 按照薄层色谱法(《中国药典》2015版第四部通则0502)实验，吸取大黄素、酸模素、大黄酚、大黄素甲醚对照品和供试品溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板(德国Merck公司)上，以石油醚(60～90 ℃)-乙酸乙酯-丙酮-甲酸(6∶1∶1∶0.15)为展开剂，展开，取出，晾干，105 ℃加热至斑点清晰，置紫外光灯365 nm下检识，大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品呈亮黄色斑点、酸模素对照品呈淡蓝色斑点，Rf大黄素=0.26，Rf酸模素=0.46，Rf大黄酚=0.54，Rf大黄素甲醚=0.62，供试品色谱中，在与对照品色谱相同的位置上，显相同颜色荧光斑点，表明网果酸模中含有大黄素、酸模素、大黄酚和大黄素甲醚。薄层色谱图见图3-1。

2.3.4 大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷的薄层条件 按照薄层色谱法(《中国药典》2015版第四部通则0502)实验，吸取大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷对照品溶液和供试品溶液各1 μL，分别点于同一硅胶G薄层板(中国青岛海洋化工)上，以乙酸乙酯-氯仿-丙酮-甲醇-水(1∶5∶2.5∶1.5∶0.4)上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，105 ℃加热至斑点清晰，置紫外光灯365 nm下检识，大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷对照品荧光斑点呈橘黄色斑点，Rf大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷=0.59，供试品色谱中，在与大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷对照品色谱相应的位置上，显相同的橙黄色荧光斑点，表明网果酸模中含有大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷。薄层色谱图见图3-2。

2.4 水分测定 根据《中国药典》2015 版四部通则 0832 水分测定法第二法[14]，烘干法测定：取供试品2～5 g，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过5 mm，疏松供试品不超过10 mm, 精密称定，开启瓶盖在100～105 ℃干燥5 h，将瓶盖盖好，移置干燥器中，放冷30 min，精密称定，再在上述温度干燥1小时，放冷，称重，至连续两次称重的差异不超过5 mg为止。根据减失的重量，计算供试品中含水量，结果见表2。10批样品水分约5.60%～6.58%。

2.5 总灰分测定 根据《中国药典》2015版四部通则2302灰分测定法项下总灰分测定法测定[14]：取供试品粉末3～5 g，置于炽灼至恒重的坩埚中，称定重量(准确至0.01 g)，缓缓炽灼，注意避免燃烧(先逐渐升温至200～300 ℃)。至完全炭化时，逐渐升高温度至500～600 ℃，使其完全灰化至恒重。称重记录，计算总灰分含量，结果见表2。10批样品总灰分在4.00%～7.26%之间。

2.6 酸不溶灰分测定 根据《中国药典》2015 版四部通则 2302 灰分测定法项下酸不溶性灰分测定法测定[14]：取上述所得灰分，在坩埚中小心加入稀盐酸约10 mL，用表面皿覆盖坩埚，置水浴上加热10 min，表面皿用热水5 mL冲洗，冲洗液并入坩埚中，用无灰滤纸滤过，坩埚内的残渣用水洗于滤纸上，至洗涤液不显氯化物反应为止。滤渣连同滤纸移至同一坩埚中，干燥，炽灼至恒重。根据残渣重量，计算酸不溶灰分含量，结果见表2。10批样品酸不溶灰分在0.96%～3.93%之间。

2.7 醇溶性浸出物测定 根据《中国药典》2015 版四部通则 2201 浸出物测定法项下醇溶性浸出物测定法第二法，热浸法测定[14]：取供试品约2～4 g，精密称定，置100～250 mL 的锥形瓶中，精密加人50%乙醇100 mL，密塞，称定重量，静置1 h后，连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸1 h。放冷后，取下锥形瓶，密塞，再称定重量，用50%乙醇补足减失的重量，摇匀，用干燥滤器滤过，精密量取滤液25 mL，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105 ℃干燥3 h，置干燥器中冷却30 min，迅速精密称定重量。除另有规定外，以干燥品计算供试品中醇溶性浸出物的含量，结果见表2。10批样品醇溶性浸出物在18.94%～25.94%之间。

表2 水分、总灰分、酸不溶性灰分、水溶性浸出物、醇溶性浸出物测定结果 (n=3)

3 讨论

由于酸模素、游离蒽醌与结合蒽醌极性相差较大，难以在一张薄层板、同一展开系统下使要鉴别的斑点得到很好地分离，所以本研究分为两个展开系统，分别对酸模素和游离蒽醌以及结合蒽醌进行鉴别。

TLC实验过程中进行了不同检测波长、不同溶剂和不同薄层板的考察，薄层板在日光及紫外225 nm、254 nm、365 nm不同波长下检识，在紫外365 nm波长下，对照品及供试品斑点明亮、清晰。石油醚为主的展开系统，沸程30～60 ℃、90～120 ℃石油醚为展开剂，色谱斑点有拖尾，沸程60～90 ℃石油醚为展开剂，色谱斑点清晰、无拖尾；在确定展开剂基础上，发现德国Merck公司生产的硅胶G板对大黄素、酸模素、大黄酚和大黄素甲醚分离效果更佳；中国青岛海洋化工生产的硅胶G板对大黄酚-8-O-β-D-葡萄苷分离效果更佳。因此，确定网果酸模的检测波长为365 nm；石油醚沸程选择90～120 ℃沸程石油醚，不同成分的鉴别采用了两种不同的薄层板。采用中国青岛海洋化工生产的硅胶G板对大黄酚-8-O-β-D-葡萄苷进行分离，硅胶板前沿会出现亮蓝色弧线，反复试验未能消除，可能是展开剂中乙酸乙酯和丙酮最大吸收波长较大有关。

浸出物实验过程中发现，网果酸模水溶性浸出物难过率，可能与网果酸模中淀粉含量高有关，故本实验只测定网果酸模醇溶性浸出物。经过对冷浸法、热浸法以及不同乙醇浓度的考察，采用热浸法，50%乙醇为溶剂网果酸模醇溶性浸出物易过滤，浸出物含量较稳定，因此，采用50%乙醇为溶剂测定网果酸模醇溶性浸出物较合理。

网果酸模TLC鉴别，游离蒽醌及酸模素、大黄酚8-O-β-D-葡萄糖苷鉴别的展开剂分别为石油醚(60～90 ℃)-甲酸乙酯-甲酸(20∶5∶1)上层溶液和乙酸乙酯-氯仿-丙酮-甲醇-水(1∶5∶2.5∶1.5∶0.4)上层溶液。根据表2并结合《中国药典》2015年版对药材水分、浸出物的规定，建议将网果酸模的水分拟定不得过7.0%，总灰分不得超过8.0%，酸不溶性灰分不得超过4.0%，醇溶性浸出物不得少于18.0%。

综上，本研究所建立的网果酸模定性、定量方法具有简便、可行、重复性好的特点，可为快速、准确的鉴别网果酸模提供科学依据，为完善、建立质量标准和提高临床疗效奠定基础。