网果酸模质量标准研究

2021-02-28 02:49王瑞海刘丽梅严光俊张秋海杨诗龙郭昌洪
中国民族民间医药 2021年1期
关键词:甲醚浸出物果酸

许 京 王瑞海 刘丽梅 苗 青 严光俊 张秋海 杨诗龙 郭昌洪*

1.中国中医科学院中医基础理论研究所,北京 100700;2. 湖北省荆州市中医医院,湖北 荆州 434000

网果酸模为蓼科酸模属植物网果酸模RumexchalepensisMill.的干燥根及根茎,始载于《中药志》,又名红丝酸模、金不换,主要分布在湖北、江西、河南、浙江及安徽等地[1-3],味苦性寒,具有清热解毒、通便、杀虫之功效,民间用于止血和治疗痢疾[4]。

网果酸模根及根茎为地方草药,其含有很强的抗真菌(白色念珠菌、红色发癣菌)的成分酸模素[5-6],泻下主要药效成分之一蒽醌苷,抗菌消炎、抗肿瘤等作用成分游离蒽醌[7],临床主要用于治疗消化道出血、幽门螺杆菌感染的相关性胃炎、消化性溃疡、十二指肠球部溃疡等[8-10],具有很高的研究和应用价值。目前,网果酸模已有化学成分鉴定、含量测定、指纹图谱等研究[11-12],但基础质量研究未见报道,因此,本实验将从显微鉴别、薄层鉴别(Thin Layer Identification,TLC)、水分、总灰分、酸不溶性灰分、醇溶性浸出物进行研究,为快速、准确的鉴别网果酸模提供科学依据,为完善、建立质量标准和提高临床疗效奠定基础。

1 仪器与材料

1.1 仪器 CX41 型光学显微镜(奥林巴斯公司); INTA 2020D薄层扫描成像系统(北京泽祥佳燕科技有限公司);电热古风干燥箱(上海一恒科学仪器有限公司);KQ3200DB 型数控超声波清洗器(宁波新芝生物科技股份有限公司);CP2202S电子天平(瑞士梅特勒-托利多);高速万能粉碎机(北京科伟永兴仪器有限公司);薄层层析硅胶 G 板(德国Merck 公司);薄层层析硅胶 G 板(中国青岛海洋化工)。

1.2 材料 酸模素对照品(批号:PS170608-03)、大黄素对照品(批号:PS000259)、大黄酚对照品(批号:PS010475)、大黄素甲醚对照品(批号:PS000263)、大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷对照品(批号:PS010712)均购自成都普思科技股份有限公司;试剂均为分析纯。

实验用10样品均采自湖北省荆州市公安县章庄铺镇,生药学图片见图1-1、1-2、1-3,经黑龙江中医药大学王振月教授鉴定为网果酸模RumexchalepensisMill.的干燥根及根茎,粉碎后过50目筛,置于干燥器中备用。

2 方法与结果

2.1 性状 网果酸模饮片为类圆形、椭圆形或不规则厚片,外表皮棕褐色至灰褐色,可见皱缩纹。切面黄白色、黄色至棕黄色或黄棕色,具有明显的形成层环纹,部分可见纤维,断面显黄白色。本品质脆硬,掰断可见粉性烟尘,气特异,味微苦。

2.2 显微鉴别 药材样品粉末为黄棕色。取粉末少许,置载玻片中央,经水合氯醛液透化,加稀甘油2滴,拌匀,盖片;淀粉粒观察用水装片,应用自带摄像功能的光学显微镜拍摄显微图像,同步存入计算机中。草酸钙簇晶类圆形,棱角尖锐,直径22~52 μm,见图2-1;石细胞极少,近无色或淡棕黄色,呈类方形、多角形或梭形,壁厚,直径19~35 μm,见图2-2;纤维多成群或离散,长梭形,稍弯曲,一端稍钝圆,一端尖锐,或两端渐尖,壁厚,孔沟明显,长300~530 μm,直径20-45 μm,见图2-3;具缘纹孔导管、梯纹导管常见,直径18-66 μm,见图2-4;木栓细胞近长方形,无色或棕色,垂周壁波状弯曲,见图2-5;淀粉粒众多,单粒类圆形、椭圆形或肾形,直径4~19 μm,脐点点状或裂缝状,复粒由2~3分粒组成,见图2-6。

2.3 网果酸模薄层的薄层鉴别

2.3.1 对照品的制备 精密称取酸模素对照品、大黄素对照品、大黄酚对照品、大黄素甲醚对照品、大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷对照品适量,加甲醇分别制成每1 mL含酸模素、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷对照品分别为482.4 μg、116.8 μg、302.8 μg、99.2 μg、99.6 μg的溶液。

2.3.2 供试品溶液的制备[13]取本品粉末1.0 g,加甲醇10 mL,超声30 min,滤过,取滤液5 mL,蒸干,残渣加甲醇l mL使溶解,作为供试品溶液。

2.3.3 酸模素及蒽醌薄层条件 按照薄层色谱法(《中国药典》2015版第四部通则0502)实验,吸取大黄素、酸模素、大黄酚、大黄素甲醚对照品和供试品溶液各5 μL,分别点于同一硅胶G薄层板(德国Merck公司)上,以石油醚(60~90 ℃)-乙酸乙酯-丙酮-甲酸(6∶1∶1∶0.15)为展开剂,展开,取出,晾干,105 ℃加热至斑点清晰,置紫外光灯365 nm下检识,大黄素、大黄酚、大黄素甲醚对照品呈亮黄色斑点、酸模素对照品呈淡蓝色斑点,Rf大黄素=0.26,Rf酸模素=0.46,Rf大黄酚=0.54,Rf大黄素甲醚=0.62,供试品色谱中,在与对照品色谱相同的位置上,显相同颜色荧光斑点,表明网果酸模中含有大黄素、酸模素、大黄酚和大黄素甲醚。薄层色谱图见图3-1。

2.3.4 大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷的薄层条件 按照薄层色谱法(《中国药典》2015版第四部通则0502)实验,吸取大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷对照品溶液和供试品溶液各1 μL,分别点于同一硅胶G薄层板(中国青岛海洋化工)上,以乙酸乙酯-氯仿-丙酮-甲醇-水(1∶5∶2.5∶1.5∶0.4)上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,105 ℃加热至斑点清晰,置紫外光灯365 nm下检识,大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷对照品荧光斑点呈橘黄色斑点,Rf大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷=0.59,供试品色谱中,在与大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷对照品色谱相应的位置上,显相同的橙黄色荧光斑点,表明网果酸模中含有大黄酚-8-O-β-D-葡萄糖苷。薄层色谱图见图3-2。

2.4 水分测定 根据《中国药典》2015 版四部通则 0832 水分测定法第二法[14],烘干法测定:取供试品2~5 g,平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中,厚度不超过5 mm,疏松供试品不超过10 mm, 精密称定,开启瓶盖在100~105 ℃干燥5 h,将瓶盖盖好,移置干燥器中,放冷30 min,精密称定,再在上述温度干燥1小时,放冷,称重,至连续两次称重的差异不超过5 mg为止。根据减失的重量,计算供试品中含水量,结果见表2。10批样品水分约5.60%~6.58%。

2.5 总灰分测定 根据《中国药典》2015版四部通则2302灰分测定法项下总灰分测定法测定[14]:取供试品粉末3~5 g,置于炽灼至恒重的坩埚中,称定重量(准确至0.01 g),缓缓炽灼,注意避免燃烧(先逐渐升温至200~300 ℃)。至完全炭化时,逐渐升高温度至500~600 ℃,使其完全灰化至恒重。称重记录,计算总灰分含量,结果见表2。10批样品总灰分在4.00%~7.26%之间。

2.6 酸不溶灰分测定 根据《中国药典》2015 版四部通则 2302 灰分测定法项下酸不溶性灰分测定法测定[14]:取上述所得灰分,在坩埚中小心加入稀盐酸约10 mL,用表面皿覆盖坩埚,置水浴上加热10 min,表面皿用热水5 mL冲洗,冲洗液并入坩埚中,用无灰滤纸滤过,坩埚内的残渣用水洗于滤纸上,至洗涤液不显氯化物反应为止。滤渣连同滤纸移至同一坩埚中,干燥,炽灼至恒重。根据残渣重量,计算酸不溶灰分含量,结果见表2。10批样品酸不溶灰分在0.96%~3.93%之间。

2.7 醇溶性浸出物测定 根据《中国药典》2015 版四部通则 2201 浸出物测定法项下醇溶性浸出物测定法第二法,热浸法测定[14]:取供试品约2~4 g,精密称定,置100~250 mL 的锥形瓶中,精密加人50%乙醇100 mL,密塞,称定重量,静置1 h后,连接回流冷凝管,加热至沸腾,并保持微沸1 h。放冷后,取下锥形瓶,密塞,再称定重量,用50%乙醇补足减失的重量,摇匀,用干燥滤器滤过,精密量取滤液25 mL,置已干燥至恒重的蒸发皿中,在水浴上蒸干后,于105 ℃干燥3 h,置干燥器中冷却30 min,迅速精密称定重量。除另有规定外,以干燥品计算供试品中醇溶性浸出物的含量,结果见表2。10批样品醇溶性浸出物在18.94%~25.94%之间。

表2 水分、总灰分、酸不溶性灰分、水溶性浸出物、醇溶性浸出物测定结果 (n=3)

3 讨论

由于酸模素、游离蒽醌与结合蒽醌极性相差较大,难以在一张薄层板、同一展开系统下使要鉴别的斑点得到很好地分离,所以本研究分为两个展开系统,分别对酸模素和游离蒽醌以及结合蒽醌进行鉴别。

TLC实验过程中进行了不同检测波长、不同溶剂和不同薄层板的考察,薄层板在日光及紫外225 nm、254 nm、365 nm不同波长下检识,在紫外365 nm波长下,对照品及供试品斑点明亮、清晰。石油醚为主的展开系统,沸程30~60 ℃、90~120 ℃石油醚为展开剂,色谱斑点有拖尾,沸程60~90 ℃石油醚为展开剂,色谱斑点清晰、无拖尾;在确定展开剂基础上,发现德国Merck公司生产的硅胶G板对大黄素、酸模素、大黄酚和大黄素甲醚分离效果更佳;中国青岛海洋化工生产的硅胶G板对大黄酚-8-O-β-D-葡萄苷分离效果更佳。因此,确定网果酸模的检测波长为365 nm;石油醚沸程选择90~120 ℃沸程石油醚,不同成分的鉴别采用了两种不同的薄层板。采用中国青岛海洋化工生产的硅胶G板对大黄酚-8-O-β-D-葡萄苷进行分离,硅胶板前沿会出现亮蓝色弧线,反复试验未能消除,可能是展开剂中乙酸乙酯和丙酮最大吸收波长较大有关。

浸出物实验过程中发现,网果酸模水溶性浸出物难过率,可能与网果酸模中淀粉含量高有关,故本实验只测定网果酸模醇溶性浸出物。经过对冷浸法、热浸法以及不同乙醇浓度的考察,采用热浸法,50%乙醇为溶剂网果酸模醇溶性浸出物易过滤,浸出物含量较稳定,因此,采用50%乙醇为溶剂测定网果酸模醇溶性浸出物较合理。

网果酸模TLC鉴别,游离蒽醌及酸模素、大黄酚8-O-β-D-葡萄糖苷鉴别的展开剂分别为石油醚(60~90 ℃)-甲酸乙酯-甲酸(20∶5∶1)上层溶液和乙酸乙酯-氯仿-丙酮-甲醇-水(1∶5∶2.5∶1.5∶0.4)上层溶液。根据表2并结合《中国药典》2015年版对药材水分、浸出物的规定,建议将网果酸模的水分拟定不得过7.0%,总灰分不得超过8.0%,酸不溶性灰分不得超过4.0%,醇溶性浸出物不得少于18.0%。

综上,本研究所建立的网果酸模定性、定量方法具有简便、可行、重复性好的特点,可为快速、准确的鉴别网果酸模提供科学依据,为完善、建立质量标准和提高临床疗效奠定基础。

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