Ki-67在肺鳞状细胞癌组织的表达及其与预后相关性研究

易琳 刘新福* 金得芳 司马李杰

据统计肺癌发病率和病死率居我国所有肿瘤首位，但其发病率仍未达到最高峰［1］。根据肺癌组织学类型分类，非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）约占全部肺癌的85%，其中肺鳞状细胞癌占NSCLC 的30%［2］。目前，对于肺鳞状细胞癌的治疗措施，以外科手术切除为主，对于不能手术的疾病只能采取细胞毒性化疗和免疫治疗。然而，相同的治疗手段，患者预后和疗效却存在明显差异。研究表明，在疾病进展中，肿瘤细胞在空间和时间上均处于不断变化的状态［3］，导致其遗传基因及功能的多样性，使得治疗效果出现差异。本文从蛋白的层面上讨论不同肺鳞状细胞癌组织中Ki-67 的表达情况及其预后的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2016 年6 月至2018 年6 月在本院收治的59 例经皮手术切除、肺穿刺活检或经支气管镜活检确诊的肺鳞状细胞癌患者的临床资料进行回顾性分析，随访0～48 个月，本研究获得南华大学附属邵阳医院伦理委员会批准。纳入标准：（1）所有患者均行病理检查确诊且病理标本充足；（2）所有患者按美国癌症联合委员会（American Joint Committee on Cancer，AJCC）TMN 分期；（3）规范接受治疗，病史资料保存完整。（4）总生存期（overall survival，OS）定义为从实验入组开始至因任何原因引起死亡的时间。采用门诊随访、电话随访等方式，末次随访时间为2020 年6 月。

1.2 免疫组化染色方法 所有肺癌组织蜡块均制成4 μm 厚切片2 张，一张用于HE 染色，其余1 张用于免疫组化检测Ki-67 的表达水平。免疫组织化学方法步骤：石蜡组织标本常规脱蜡至水，抗原修复，加入内源性过氧化物酶阻断剂，滴加一抗，放置湿盒中室温条件下孵育，滴加生物素标记二抗，放置湿盒中室温条件下孵育，滴加DAB 显色剂，并在湿温盒中室温下反应，苏木素复染，常规脱水，透明，干燥，封片，拍照读片。由2 位病理科高级职称医师在对临床资料不知情的情况下，对标本染色结果进行判断。

1.3 结果判定 Ki-67 判定标准：细胞核内有棕黄色颗粒为Ki-67 阳性细胞，根据目前免疫组织化学实验中普遍采用的百分比分类。阳性细胞（细胞总数为200 个）＜60%定义为低表达，≥60%定义为高表达。

1.4 统计学方法 采用SPSS 22.0 统计软件。计量资料以（±s）表示，组间比较采用t检验；计数资料以n表示，分析Ki-67 表达、临床特征之前的关系采用χ2检验；生存分析采用Kaplan-Meier 法进行评估；多因素分析采用Cox 风险回归模型进行分析。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 患者的一般情况分析 排除随访丢失患者，本研究共纳入59 例肺鳞状细胞癌患者，其中男43 例，女16例；年龄45～80 岁，中位年龄65 岁；接受手术治疗11例，接受同步放化疗治疗2 例，接受化疗28 例，其它姑息治疗方案18 例。截止最后一次随访，死亡33 例，其它26 例为截尾。

2.2 肺鳞状细胞癌组织中Ki-67 的表达与临床特征的关系 见表1。

表1 肺鳞状细胞癌组织中Ki-67表达情况与临床特征的关系（n）

图1 Ki-67的表达与患者预后的关系

图2 两组患者2年生存率比较

2.3 肺鳞状细胞癌组织中Ki-67 的表达与患者预后的关系 如图1 所示，59 例肺鳞状细胞癌患者中，Ki-67高表达组与Ki-67 低表达组的生存曲线整体Log-rank检验结果为P=0.007（P＜0.001），表明Ki-67 高表达与预后不良有关。

2.4 Ki-67 在肺鳞状细胞癌组织的表达对生存率的影响 如图2 所示，Ki-67 低表达组的2 年生存率比Ki-67高表达组提高了41%，表明ki67 表达情况与鳞状细胞肺癌预后密切相关。

2.5 单因素和多因素Cox 风险比例模型分析 如表2所示，单因素分析结果显示，吸烟、TMN 分期、淋巴结转移、远处转移、Ki-67 表达与2 年总生存期有相关性。性别、年龄、组织学分级与2 年总生存期无相关。将上述单因素变量全部纳入Cox 风险回归模型多因素分析，结果显示Ki-67 表达情况对肺鳞状细胞癌生存时间有影响，高表达的死亡风险是低表达的3.265 倍，95%CI 为1.709～7.765，P=0.001。有淋巴结转移的患者死亡风险是无转移的4.751 倍，95%CI 为1.808～12.480，P=0.002。有远处转移患者死亡风险是无远处转移的3.060 倍，95%CI 为1.171～4.963，P=0.01。调整其它因素影响后表明，组织学分级亦是肺鳞状细胞癌患者的独立因素，OR=2.257，95% CI 为1.040～4.899，P=0.040。

表2 影响2年OS的单因素和多因素分析

3 讨论

近年，以EGFR、ALK 靶点为代表的靶向药物在非小细胞肺癌治疗中取得巨大进展，为驱动基因阳性的非小细胞肺癌患者带来了巨大的生存获益［4-5］。肺鳞状细胞癌占非小细胞肺癌的30%，但肺腺癌的高频突变基因在肺鳞状细胞癌内并不常见。尽管目前有大量的临床研究，但在肺鳞状细胞癌的治疗手段仍有限。早期肺鳞状细胞癌多无明显临床症状，大多数患者在确诊时已属晚期，失去手术机会［6］。驱动基因阴性的不可手术肺鳞状细胞癌患者目前主要依靠化疗，但是部分肺鳞状细胞患者因不能接受化疗带来的副反应而放弃治疗。因此，寻找影响肺鳞状细胞癌的发生机制及预后相关因素用于评估患者预后、指导临床治疗、开发新治疗药物十分重要。

癌细胞增殖是影响癌症发展的关键，用于评判癌细胞增殖的标记物较多，Ki-67 是目前较为肯定的核增殖标志物。Ki-67 是细胞核内分裂增殖相关蛋白［7］，由MKI-67 基因编码，其表达在所有活动的细胞周期（G1、S、G2 和有丝分裂期），而在G0 期不表达。临床研究表明Ki-67 增殖指数高低与肿瘤分化程度、浸润转移以及预后密切相关［8］。本研究数据显示，Ki-67 的表达与患者的组织学分级、淋巴结转移、TMN 分期有关，与文献数据相符。有文献［9］研究发现，当Ki-67 指数＞60%时，病情发展迅速，恶性程度高，生存期短。因此，本研究将Ki-67 指数是否≥60%作为研究临界值进行分组。本研究中59 例肺鳞状细胞癌患者中，Ki-67 高表达患者的2 年总生存期明显长于Ki-67 低表达患者。Cox风险回归模型多因素分析Ki-67 高表达组的死亡风险是低表达的3.265 倍，95%CI 为1.709～7.765，P=0.001，与文献结果大致符合。结果说明Ki-67 表达情况对肺鳞状细胞癌生存时间有影响。另外，本研究发现有无淋巴结转移、有无器官转移、组织学分级亦是肺鳞状细胞癌患者的独立因素。

2011 年St.Gallen 共识确定Ki-67 作为分子分型的重要标准，建议Ki-67 高表达乳腺癌患者在内分泌基础上加化疗，但不能预测疗效。Ki-67 表达高低与肺鳞状细胞癌的预后密切相关，但目前临床尚无明确的指南及共识指导Ki-67 高表达的肺鳞状细胞肺癌患者治疗。

综上所述，Ki-67 表达情况与肺鳞状细胞癌的预后具有一定的关系。由于本研究为回顾性分析，可能存在信息不全面、偏倚等缺点，有必要进一步开展大宗病例研究，为预后评估及治疗提供帮助。