平均血小板体积与血小板计数比值、微小RNA-26b相对表达量、微小RNA-195相对表达量与高血压性左心室肥厚的关系及其对患者预后的预测价值研究

闫玉敏，王希柱，张振飞，常绍菊，陈荣花，贾洪娟，宋巧凤

高血压是临床常见慢性病，长期高血压可改变患者心脏及血管功能，因此其是导致靶器官损伤及心脑血管疾病的基础，其中左心室肥厚是高血压导致的常见靶器官损伤表现之一，可进一步导致患者出现心力衰竭、急性心肌梗死、脑卒中及猝死等［1-3］。因此，及早诊断并有效防治对高血压性左心室肥厚患者尤为关键。左心室心肌质量指数（left ventricular mass index，LVMI）是衡量心肌肥厚及心脏重构的主要参考指标。微小RNA（microRNA，miRNA）作为一类小的非编码RNA，可调节各种细胞活动包括细胞的增殖、分化、发育及凋亡，其在基因表达、转录后的调节中具有重要作用，同样在心肌重构及细胞增殖、分化等过程中发挥着重要的调控作用。研究表明，miRNA-26b、miRNA-195与心肌重构密切相关［4］。另有研究表明，高血压发病机制复杂，其中血小板在高血压发生、发展中具有重要作用［5］。基于此，本研究旨在分析平均血小板体积（mean platelet volume，MPV）与血小板计数（platelet count，PLT）比值（MPV/PLT）、miRNA-26b、miRNA-195与高血压性左心室肥厚的关系，并分析其对患者预后的预测价值，现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选取2017年4月—2019年12月唐山市人民医院收治的高血压性左心室肥厚患者102例。纳入标准：（1）符合《中国高血压防治指南（2010年修订版）》［6］中的原发性高血压病诊断标准；（2）经超声心动图检查显示左心室后壁厚度≥12 mm，符合左心室肥厚的判定标准［7］；（3）左心室射血分数＞40%。排除标准：（1）继发性高血压者；（2）肥厚型、缩窄型心肌病者；（3）合并糖尿病、先天性心脏病、中重度瓣膜病、冠心病、心力衰竭、恶性肿瘤者；（4）伴有甲状腺功能亢进或减退者；（5）合并严重肝肾功能不全者；（6）正在或已服用降压药物者。根据LVMI将所有患者分为低LVMI（≤110 g/m2）组52例与高LVMI（＞110 g/m2）组50例。本研究经唐山市人民医院医学伦理委员会审核批准，患者对本研究知情并签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 临床资料收集 通过病案系统收集患者入院时临床资料，包括性别、年龄、体质指数（BMI）、空腹血糖、血红蛋白、三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、诊室收缩压、诊室舒张压、诊室脉压、诊室平均动脉压、24 h动态收缩压、24 h动态舒张压、24 h动态脉压、24 h动态平均动脉压、左心室射血分数、心输出量、每搏输出量、左心室心肌质量（left ventricular mass，LVM）、LVMI、MPV、PLT等，其中空腹血糖、血红蛋白、三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、MPV、PLT应用日本SYSMEX公司XE-2100型血细胞分析仪、Beeckman Coulter全自动生化分析仪检测，诊室收缩压、诊室舒张压、诊室脉压、诊室平均动脉压、24 h动态收缩压、24 h动态舒张压、24 h动态脉压、24 h动态平均动脉压应用Meditech ABPM-05无创性携带动态血压监测仪测量，左心室射血分数、心输出量、每搏输出量应用美国PHILIPS EPIQ7C心脏超声诊断仪检测。

1.2.2 miRNA-26b、miRNA-195相对表达量检测 患者均于入院后晨起抽取空腹外周静脉血5 ml，在4 ℃环境下3 000 r/min离心处理10 min（离心半径为15 cm），取血浆并置于无RNA酶的EP管内，置于-80 ℃环境中保存待测；按照TRIZOL试剂盒〔天根生化科技（北京）有限公司提供〕说明书提取血浆总RNA，而后采用0.1% DEPC水溶解，采用Bio-Rad检测RNA纯度、浓度，另取1 μl RNA经1%琼脂糖凝胶电泳检测其完整性；采用反转录聚合酶链式反应进行试验，反应条件为 95 ℃ 15 min，94 ℃ 15 s，55 ℃ 30 s，70 ℃ 34 s共进行40个循环；采用2-ΔΔCt方法计算miRNA-26b、miRNA-195相对表达量，ΔCt值=Ct值（目的基因）-Ct值（内参基因）。

1.2.3 预后 将患者6个月内出现心脑血管事件（包括心绞痛、无症状心肌缺血、心功能不全、心律失常、脑血管意外）视为预后不良，未出现则视为预后良好。

1.3 统计学方法 应用SPSS 22.0统计学软件进行数据处理。符合正态分布的计量资料以（±s）表示，组间比较采用两独立样本t检验；计数资料以相对数表示，组间比较采用χ2检验；采用多元线性回归分析探讨高血压性左心室肥厚患者LVMI的影响因素；采用多因素Logistic回归分析探讨高血压性左心室肥厚患者预后的影响因素；绘制受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic curve，ROC曲线）以分析LVMI、MPV/PLT、miRNA-26b相对表达量、miRNA-195相对表达量及其联合对高血压性左心室肥厚患者预后的预测价值。双侧检验水准为α=0.05。

2 结果

2.1 高LVMI组、低LVMI组患者临床资料、miRNA-26b相对表达量、miRNA-195相对表达量比较 高LVMI组患者24 h动态收缩压、24 h动态脉压、LVM、miRNA-195相对表达量高于低LVMI组，MPV/PLT、miRNA-26b相对表达量低于低LVMI组，差异有统计学意义（P＜0.05）；两组患者性别、年龄、BMI、空腹血糖、血红蛋白、三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、诊室收缩压、诊室舒张压、诊室脉压、诊室平均动脉压、24 h动态舒张压、24 h动态平均动脉压、左心室射血分数、心输出量、每搏输出量比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1 两组患者临床资料、miRNA-26b相对表达量、miRNA-195相对表达量比较Table 1 Comparison of clinical data and relative expression levels of miRNA-26b，miRNA-195 between the two groups

2.2 高血压性左心室肥厚患者LVMI的影响因素分析将表1中有统计学差异的指标作为自变量（赋值均为实测值），高血压性左心室肥厚患者LVMI（赋值：实测值）作为因变量，进行多元线性回归分析，结果显示：24 h动态收缩压、24 h动态脉压、LVM、MPV/PLT、miRNA-26b相对表达量、miRNA-195相对表达量是高血压性左心室肥厚患者LVMI的独立影响因素（P＜0.05），见表2。

表2 高血压性左心室肥厚患者LVMI相关因素的多元线性回归分析Table 2 Multiple linear regression analysis on related factors of LVMI in patients with hypertensive left ventricular hypertrophy

2.3 高LVMI组、低LVMI组患者预后比较 高LVMI组患者中预后良好33例（66.0%），预后不良17例（34.0%）；低LVMI组患者中预后良好44例（84.6%），预后不良8例（15.4%）。高LVMI组患者预后良好发生率低于低LVMI组，差异有统计学意义（χ2=4.774，P=0.029）。

2.4 不同预后的高血压性左心室肥厚患者的临床资料、miRNA-26b相对表达量、miRNA-195相对表达量比较 预后不良的高血压性左心室肥厚患者24 h动态收缩压、24 h动态脉压、LVM、LVMI、miRNA-195相对表达量高于预后良好者，MPV/PLT、miRNA-26b相对表达量低于预后良好者，差异有统计学意义（P＜0.05）；不同预后的高血压性左心室肥厚患者性别、年龄、BMI、空腹血糖、血红蛋白、三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、诊室收缩压、诊室舒张压、诊室脉压、诊室平均动脉压、24 h动态舒张压、24 h动态平均动脉压、左心室射血分数、心输出量、每搏输出量比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表3。

表3 不同预后的高血压性左心室肥厚患者临床资料、miRNA-26b相对表达量、miRNA-195相对表达量比较Table 3 Comparison of clinical data and relative expression levels of miRNA-26b，miRNA-195 of patients with hypertensive left ventricular hypertrophy in different prognosis

2.5 高血压性左心室肥厚患者预后的影响因素分析将表3中有统计学差异的指标作为自变量（赋值均为实测值），高血压性左心室肥厚患者预后作为因变量（赋值：良好=0，不良=1），进行多因素Logistic回归分析，结果显示，24 h动态收缩压、24 h动态脉压、LVM、LVMI、MPV/PLT、miRNA-26b相对表达量及miRNA-195相对表达量是高血压性左心室肥厚患者预后的独立影响因素（P＜0.05），见表4。

表4 高血压性左心室肥厚患者预后影响因素的多因素Logistic回归分析Table 4 Multiple Logistic regression analysis of influencing factors of prognosis in patients with hypertensive left ventricular hypertrophy

2.6 LVMI、MPV/PLT、miRNA-26b相对表达量、miRNA-195相对表达量及其联合对高血压性左心室肥厚患者预后的预测价值 ROC曲线分析结果显示，LVMI、MPV/PLT、miRNA-26b相对表达量、miRNA-195相对表达量联合预测高血压性左心室肥厚患者预后的曲线下面积（AUC）大于各指标单独预测，差异均有统计学意义（Z值分别为6.303、4.469、6.675、3.670，P值均＜0.001），见表5、图1。

表5 LVMI、MPV/PLT、miRNA-26b相对表达量、miRNA-195相对表达量及其联合对高血压性左心室肥厚患者预后的预测价值Table 5 Predictive value of LVMI，MPV/PLT，miRNA-26b relative expression level，miRNA-195 relative expression level and their combination on the prognosis of patients with hypertensive left ventricular hypertrophy

图1 LVMI、MPV/PLT、miRNA-26b相对表达量、miRNA-195相对表达量及其联合预测高血压性左心室肥厚患者预后的ROC曲线Figure 1 ROC curve of LVMI，MPV/PLT，miRNA-26b relative expression level，miRNA-195 relative expression level and their combination in predicting the prognosis of patients with hypertensive left ventricular hypertrophy

3 讨论

高血压是多种心血管疾病的危险因素，长期血压控制不佳者心肌细胞在高压力负荷刺激下可出现肥厚性生长应答，主要表现为心肌细胞肥大、心肌纤维化及胞质蛋白合成等，进而导致心脏结构及功能改变，引发左心室肥厚［8］。左心室肥厚作为一种因高血压引发的常见亚临床脏器损伤，可一定程度增加心血管疾病发生率及病死率［9］。据调查，20%～40%的高血压患者并发左心室肥厚［10］。因此，及时掌握患者左心室肥厚程度并调整临床治疗方案对改善高血压性左心室肥厚患者预后具有积极意义。

研究指出，高血压患者MPV、PLT、P选择素等血小板活性指标均明显升高［11-12］，其中MPV、PLT获取简单。LVMI是判断左心室重构、左心室肥厚程度的重要指标。本研究结果显示，高LVMI组患者MPV/PLT低于低LVMI组，提示高LVMI的高血压性左心室肥厚患者血小板功能较差。本研究ROC曲线分析结果显示，LVMI预测高血压性左心室肥厚患者预后的AUC为0.832，可见LVMI对高血压性左心室肥厚患者预后具有一定的预测价值。MPV是反映血小板功能的有效指标，与炎性反应及血栓形成关系密切，MPV越大则血小板聚集功能越好。有研究表明，机体在重度炎症状态下，MPV越大、越具活性，则其消耗量越大［13］。PLT可反映机体血液循环中血小板数量，PLT越高则血浆可溶性CD40L分泌、释放越多，进而促进炎性反应及血栓形成［14］。由此推测，高血压性左心室肥厚患者MPV/PLT降低可能与炎性反应有关。本研究结果显示，MPV/PLT是高血压性左心室肥厚患者LVMI的独立影响因素，且其预测高血压性左心室肥厚患者预后的AUC为0.745，灵敏度为80.00%，可见MPV/PLT可作为预测高血压性左心室肥厚及患者预后的潜在指标。

miRNA作为一类具有高度保守性的非编码小RNA分子，对生物体基因表达具有精准的调控作用。目前，miRNA在循环系统、神经系统、呼吸系统及消化系统疾病中取得极大的研究进展，且已成为心血管领域的研究热点。研究表明，miRNA在心血管疾病生理、病理过程中具有重要的调节作用，并参与心脏发育、冠状动脉病变、心律失常及心室重构等过程［15］，还参与了心室肥厚的发生、发展［16］。多项动物实验结果表明，miRNA-26b与心室肥厚密切相关，并参与了心室肥厚及重构过程［17-18］。冯崴等［19］研究显示，miRNA-26b相对表达量诊断老年高血压患者左心室肥厚的AUC为0.836，且二者呈负相关，推测miRNA-26b可作为潜在生物标志物用于老年高血压患者左心室肥厚的诊断。基于此，本研究分析miRNA-26b相对表达量与高血压性左心室肥厚的关系，结果显示：miRNA-26b相对表达量是高血压性左心室肥厚患者LVMI的影响因素，推测原因为：高血压性左心室肥厚患者miRNA-26b相对表达量较低，更利于其心肌细胞增殖并出现代偿性肥大，且心肌间质胶原也可随之增加，进而导致心肌纤维化，致使肥厚心肌出现功能及生物反应异常，最终造成心脏舒张功能进行性下降，加重病情，不利于患者预后。本研究结果显示，miRNA-26b相对表达量预测高血压性左心室肥厚患者预后的AUC为0.796，灵敏度高达98.70%，可见miRNA-26b相对表达可作为预测高血压性左心室肥厚患者预后的重要指标。孔彪等［20］研究表明，miRNA-195在糖尿病心肌病乳鼠心肌细胞肥大中发挥着重要作用。另有研究表明，miRNA-195可诱导小鼠心脏病理性增大，且与心肌重构关系密切［21］。王文峰等［22］发现，自发性高血压大鼠心脏miRNA-195相对表达量明显升高，甚至是血压正常大鼠的4倍，提示miRNA-195相对表达量可能与血压有关。本研究结果显示，高LVMI组患者miRNA-195相对表达量高于低LVMI组，且miRNA-195相对表达量是高血压性左心室肥厚患者LVMI的独立影响因素，与曾伏虎等［23］研究结果一致，提示miRNA-195相对表达量与高血压性左心室肥厚相关，可作为诊断高血压性左心室肥厚的生物标志物。此外，本研究结果还显示，miRNA-195相对表达量预测高血压性左心室肥厚患者预后的AUC为0.719，灵敏度为68.00%，特异度为71.43%，提示miRNA-195相对表达量可作为预测高血压性左心室肥厚患者预后的潜在标志物。此外，本研究结果还显示，LVMI、MPV/PLT、miRNA-26b相对表达量、miRNA-195相对表达量联合预测高血压性左心室肥厚患者预后的AUC大于各指标单独预测，可见各指标联合对高血压性左心室肥厚患者预后的预测价值更高。

综上所述，LVM、MPV/PLT、miRNA-26b相对表达量、miRNA-195相对表达量是高血压性左心室肥厚的独立影响因素，且LVMI、MPV/PLT、miRNA-26b相对表达量、miRNA-195相对表达量联合对高血压性左心室肥厚患者预后具有较高的预测价值。但本研究纳入样本量较少，结果可能存在一定偏倚，后续还需纳入更多样本量进一步研究证实结论。

作者贡献：闫玉敏进行文章的构思与设计，负责文章的质量控制及审校；王希柱进行研究的实施与可行性分析；张振飞进行数据收集、整理、分析；常绍菊进行结果分析与解释；闫玉敏、陈荣花撰写论文；贾洪娟进行论文的修订；宋巧凤对文章整体负责、监督管理。

本文无利益冲突。