孟鲁司特上调Treg数量在儿童急性支气管哮喘治疗中发挥作用

陈石娇，陈妮，徐莉，王才春

(海南医学院第二附属医院 儿科，海口 570311)

支气管哮喘是一种常见的慢性气道持续性炎症性疾病，中国支气管哮喘患者数高达3 000万，且呈逐年上升趋势[1]。婴幼儿哮喘多数在上呼吸道病毒感染后被诱发，起病较缓慢，而儿童哮喘多由吸入的变应原诱发，起病较急[2-4]。支气管哮喘以气道高反应性为主要病理特征，发病受遗传和环境因素的共同影响，但具体发病机制尚不清楚。研究报道，支气管哮喘与气道炎症、过敏反应等因素密切相关[5-6]。糖皮质激素治疗是急性支气管哮喘最常用的方案，具有很强的抑炎和免疫抑制作用。然而，长期使用糖皮质激素会导致明显的不良反应和戒断效应[7]。近年来，国内外大量临床报道表明，孟鲁司特可替代糖皮质激素治疗急性支气管哮喘[8-9]。孟鲁司特是一种半胱氨酰白三烯(CysLTs)受体拮抗剂，可调节白三烯相关通路活性，临床上用于哮喘的短期和长期治疗，目前广泛应用于儿童哮喘的治疗[10]。此外，孟鲁司特可与靶细胞表面的CysLT1受体结合以阻断由其介导的促炎作用[11]。Treg可调节机体免疫平衡并介导免疫耐受，据报道，Treg可抑制Th2型细胞因子的产生和气道嗜酸性粒细胞的聚集[12]。因此，研究孟鲁司特在治疗儿童急性支气管哮喘时对Treg的影响，探讨孟鲁司特的可能作用机制具有一定可行性。研究围绕孟鲁司特对儿童急性支气管哮喘的临床疗效及对Treg的影响，探究其作用机制，为孟鲁司特治疗儿童急性支气管哮喘提供一定理论依据。

1 资料与方法

1.1 临床资料收集2016年3月至2018年6月于海南医学院第二附属医院就诊的急性支气管哮喘患儿108例，所有病例均符合《预防和治疗指南》中的支气管哮喘诊断标准[(1)反复喘息，呼吸急促，胸闷和咳嗽；(2)在哮喘发作过程中可听到呼气相喘息性啰音；(3)以上症状可自发或在治疗后缓解]。孟鲁司特治疗组患儿63例，于每晚睡前口服5 mg孟鲁司特钠片(四川大冢制药有限公司)。常规治疗组患儿45例，给予抗感染联合氨茶碱治疗。治疗以1周为1个疗程，至少治疗4个疗程，所有患儿的疗效观察时间点为D3和D7。在此治疗期间患儿没有出现自身免疫性疾病或肺部感染，并且治疗前1个月内无糖皮质激素或白三烯受体拮抗剂服用史。2组患儿的一般临床资料如下(表1)。研究获得患者的监护人知情同意签字并通过医院医学伦理委员会批准。

表1 2组患儿的一般临床资料比较

1.2 方法

1.2.1 2组患儿肺功能的检测 检测患儿的肺功能，详细记录相关参数：第1秒用力呼气容积/用力肺活量(forced expiratory volume in one second/forced vital capacity， FEV1/FVC)比值和呼气流量峰值(peak expiratory flow， PEF)。

1.2.2 2组患儿治疗效果的评估 具体标准如下(表2)。

表2 疗效评估评分标准

1.2.3 2组患儿外周血Treg的分离和检测 治疗前后分别抽取患儿空腹静脉血5 mL；混匀抗凝剂和抗CD4、CD25多色标记荧光抗体混合物；以IgG1-FITC和IgG1-PE为阴性对照。 于室温下避光孵育混合物10 min，FCM检测。根据检测结果计算患者外周血Treg百分比和1 μL 外周血中Treg的绝对数量。

1.2.4 2组患儿血清炎性因子水平的检测 分离患儿外周血，ELISA检测IL-4、IL-5、IL-6、IL-10和IgE及 IFN-γ水平，并在相应孔中加入标准样品。每组血清样本用稀释剂稀释10倍，于室温静置60 min。吸去上清液，加入相应的生物素标记抗体于37 ℃反应60 min，后加入100 μL抗生物素蛋白-过氧化物酶复合物于37 ℃反应30 min。终止反应，于酶标仪检测光密度D(570 nm)值并绘制标准曲线，通过该曲线计算IL-4、IL-5、IL-6、IFN-γ、IL-10和IgE水平。

2 结果

2.1 肺功能的检测常规治疗组与孟鲁司特治疗组在治疗前的FEV1/FVC比值、PEF差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗7 d后，常规治疗组FEV1/FVC未有显著改变，孟鲁司特治疗组FEV1/FVC改善显著(P<0.01)。2组治疗后PEF均显著提高，且孟鲁司特治疗组改善较显著(P<0.05，P<0.01)。

注： 与治疗前相比，*P<0.05，**P<0.01。图1 治疗前后2组患者的肺功能比较

2.2 治疗1周后的疗效评估治疗1周后疗效评估结果显示，孟鲁司特治疗组的疗效评分显著高于常规治疗组(P<0.05， 表3)。

2.3 2组患儿治疗前后外周血Treg的变化分别检测2组患儿治疗前后外周血Treg的数量及百分比变化。结果显示，2组Treg的数量和百分比在治疗后均显著提高(P<0.05，P<0.01，图2)。

表3 治疗1周后的疗效评估

注：A. FACS分析Treg占患儿外周血CD4 + T细胞百分比；B. 2组患儿治疗前后Treg数量的变化；C. 2组患儿治疗前后Treg百分比的变化。与治疗前相比，*P<0.05，**P<0.01。图2 2组患儿治疗前后外周血Treg的数量和百分比变化

2.4 2组患儿治疗前后外周血炎性因子的变化2组患儿治疗后与治疗前相比IL-4、IL-5和IL-6水平均显著降低；常规治疗后与常规治疗前相比IL-10水平显著增加，IFN-γ和IgE水平没有显著变化；孟鲁司特治疗后与治疗前相比IL-10、IFN-γ和IgE水平均显著增加。(均有P<0.05， 表4)

表4 2组患儿治疗前后外周血炎性因子的变化

3 讨论

CysLT是白三烯的代谢产物，在哮喘患者外周血中浓度较高，是引起疾病的重要因素之一[13]。孟鲁司特是一种非甾体类抗炎药，可选择性与CysLT的受体结合，缓解支气管哮喘患者的气道痉挛症状[14]。此外，孟鲁司特可以抑制气道炎症细胞的增殖，减少腺体分泌黏液，影响淋巴细胞的分化和活化，降低血管通透性，在治疗肺纤维化和气道重塑中发挥重要作用[15]。Han等[16]研究表明，孟鲁司特可显著降低卵清蛋白诱导的小鼠哮喘模型气道局部嗜酸性粒细胞水平，减少黏液栓的形成并抑制气道平滑肌细胞增殖。Treg是一类调节体内免疫反应的T细胞亚群，可将其分为CD4+CD25+Treg、Th3和Tr1。这些细胞与支气管哮喘及其他过敏性疾病的发生密切相关[17]，其中Th1诱导的Th1/Th2失衡是哮喘发作的重要机制。

研究将孟鲁司特用于儿童急性支气管哮喘的治疗，通过临床症状和肺功能的检测评估其疗效，并进一步检测其对Treg和血清炎性因子的影响。经过1周的治疗，患儿肺功能得到明显改善，治疗有效率也较高，说明孟鲁司特可有效治疗儿童急性支气管哮喘，改善患儿肺功能。IFN-γ可抑制IL-4诱导的IgE高表达和过敏反应，IL-4和IL-5则可促进CysLT的合成[18-19]。在支气管哮喘患者中IFN-γ表达降低，IL-4和IL-5表达增加[20]。该研究发现，孟鲁司特治疗1周后可显著降低患儿IL-4、IL-5和IL-6的水平，提高IFN-γ、IL-10和IgE的水平，增加与支气管哮喘有关的Treg水平，从而调节Th1/Th2平衡进而有效改善支气管哮喘症状。

总之，研究发现孟鲁司特可以调节Th1/Th2平衡，增加Treg数量，抑制肺部炎症，改善肺功能，对儿童急性支气管哮喘具有重要的治疗作用。