快速冰冻切片技术在病理诊断中的应用价值

文/施珊珊

快速冷冻切片技术（Rapid frozen slicing technique）是在特定的温度下冷冻组织样本，等到样本在规定的硬度后开展检测[1]。病理诊断多使用常规切片技术处理，但是使用的时间较久（约为24-48小时以上）。快速冷冻切片技术利用现代技术手段，将报告时间缩短至45分钟。快速冷冻切片技术能够有效地保持组织样品的酶活性和结构，并且确诊率高[2]。为了评估病理诊断中应用快速冰冻切片技术的作用，此次研究选择我院病理科收集的66例病理组织标本开展具体的调查。

1 资料和方法

1.1 基线资料

纳入我院病理科收集的66例病理组织标本，研究时间在2019年4月至2020年4月，66例病理组织标本均接受不同处理方式（快速冰冻切片技术、常规切片技术）。66例病理组织标本中，男性样本26例、女性样本40例；年龄范围在26-84岁，平均年龄是（46.59±5.82）岁。病理组织样本类型：28例甲状腺样本、38例乳腺样本。

1.2 方法

1.2.1 快速冰冻切片

取材时应注意选择新鲜的活体组织，清除毛发和脂肪，避免选择坏死组织和出血点的组织标本。选择的活体组织大小在1.5cmx1.5cm，厚度约为0.3cm至0.5cm。

取样后，将样品置于冷冻中，根据样品的耐寒性选择适宜的温度(甲状腺样本最佳温度：零下19至零下17摄氏度。乳腺样本最佳温度：零下29摄氏度至零下21摄氏度) ，除甲状腺保存2.5分钟外，其余组织均保存3分钟，保存后将组织切片贴于玻璃片上，滴入适量固定液固定2分钟，用苏木素液染色，染色时间也为2分钟。染色后，用水冲洗组织。若染色完成后水洗，清水变为蓝色3分钟后，将水溶性伊红滴入染色，水洗后乙醇二甲苯脱水透明后用中性树脂封片。

1.2.2 常规切片技术

取材时应选择新鲜的活体组织，大小在1.5cmx1.5cm，厚度约为0.3cm至0.5cm。在活体新鲜组织中加入浓度为10%福尔马林溶液固定，取材后进行组织脱水透明处理，后将组织浸泡在70摄氏度的石蜡溶液三小时，最后包埋制片。先观察切片上的组织分布情况，通过肉眼观察并掌握整体情况。观察在大组织周围是否存在小组织，避免漏诊病变组织。采用低倍镜到高倍镜的观察顺序，重点并仔细观察患者病变主质细胞，包括细胞的外形、细胞清晰程度、细胞胞浆情况，观察细胞和细胞之间的排列关系，要检查并反复核对患者的疾病史，作为临床阅片的参考，同时在患者病变分析中需要重点核查临床病史，避免误诊。

1.3 观察指标

（1）与最后确切结果为参考金标准，分析快速冰冻切片技术检查和常规切片技术处理的诊断符合率。

（2）切片的清晰度、细胞结构和细胞形态三项指标进行评分，各项10分。由我院病理科资深医师进行打分。

1.4 统计学处理

数据资料在确认无误后，输入统计学软件SPSS23.0处理，应用（%）表示良性肿瘤、恶性肿瘤、交界性肿瘤确诊率，组间差异性应用卡方检验。应用（均数±标准差）表示快速冰冻切片技术的清晰度、细胞结构和细胞形态三项指标评分，组间差异性应用t检验。若比较具有统计学意义，（P＜0.05）。

2 结果

2.1 对比两种切片检测后诊断确诊率

如表1数据显示，快速冰冻切片技术的确诊率与常规切片技术处理相比，组间无显著差异，两种切片检测后诊断确诊率对比，（P＞0.05）无统计学意义。

表1 对比两种切片检测后诊断确诊率[n（%）]

表2 对比两种切片技术相关指标评分 （±s，分）

表2 对比两种切片技术相关指标评分 （±s，分）

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2.2 对比两种切片技术相关指标评分

如表2数据显示，快速冰冻切片技术的清晰度、细胞结构和细胞形态三项指标评分均低于常规切片技术处理，组间比较无显著差异，两种切片技术相关指标评分对比，（P＞0.05）无统计学意义。

3 讨论

病理诊断是肿瘤疾病诊断的金标准，通过对手术切除、穿刺等获取的人体组织等标本进行处理，借助显微镜等仪器进行观察等。病理诊断方法越来越先进，临床上多使用常规切片技术处理，但是在时间上具有限制。快速冰冻切片技术具有较高的临床应用价值，是将活检组织快速低温冷冻后进行诊断。快速冷冻切片需要时间短，病理学家可在短时间内作出诊断。冰冻切片技术对活体组织冷冻，并将其冷冻至标准，使诊断更加方便、简便，使患者能在短时间内得到诊断结果，给予患者明确的诊断[3]。

快速冷冻切片技术能够有效提高工作效率，为诊断结果提供重要保证[4]。快速冷冻切片技术具有操作简便、组织变化小、保存组织酶活性效果好等优点，但如果不按照相关标准进行处理，病变组织易形成冰晶和脱落褶皱，影响病变细胞的形态结构和透明度[5]。因此，要根据临床步骤进行严格处理[6]。快速冰冻切片技术操作简单方便，使用时间短，无需样品固定、脱水、石蜡包埋等步骤，还可以准确判断病灶处的良恶性肿瘤，有利于明确病情，及时制定治疗方案。快速冷冻切片技术可以及时对患者的病理组织进行病理诊断，若结果显示病灶为良性，可以结束手术进入后期疗养，若诊断结果显示病灶为恶性，需要进一步手术。随着快速冷冻切片技术的完善，快速冷冻切片技术的优势越来越明显。不仅可以满足患者及其家属迫切想知道疾病情况的心理，减少患者的等待时间，还可以为患者的手术治疗方式提供依据，有利于手术方案的不断改进。

为了保证标本处于良好的待检查状态，有必要定期对样品进行冷冻清洗，在选择样本过程中应注意相关标准，活体组织的厚度应保持在合理的厚度范围内厚度应保持在0.2-0.4厘米左右。若冷冻组织长时间保存会使皮层变脆变硬，若样品厚度小于0.2厘米，支撑组织的头部会因切割而受到损伤，影响切割效果，在选材时应控制组织样品的厚度，以保证切片的顺利，注意掌握好冷冻技术，体液混合状态，冷冻温度低于0摄氏度，人体的冷冻需要特殊环境维持。在冰冻过程中，注意温度控制，避免细胞核受损。所以，在活体组织的处理过程中保证冰晶形成的速度，有利于提高诊断的准确性和有效性，刀片锋利性好有利于展示良好的优化效果[7]。根据相关研究报告，由于人体中水分属于混合溶液，其中含有大量的有机大分子、盐类等物质。所以，人体组织样品必须保持在零摄氏度以下才能冷冻，要求相关人员具备熟练的冷冻操作技术，正确掌握冷冻温度、时间等指标，保证快速冷冻技术的顺利运行，刀片的厚度和质量也必须足以保证操作者熟练掌握操作技术。为保证切面足够干净，脱水处理还应进行二次清洗，最后，使用中性胶封膜时，胶量适中，以免胶片上的泡沫或胶水溢出。

据研究结果显示，快速冰冻切片技术的确诊率与常规切片技术处理相比无显著差异，快速冰冻切片技术的清晰度、细胞结构和细胞形态三项指标评分均与常规切片技术处理相比无显著差异，无统计学意义（P＞0.05）。

综上所述，在临床病理诊断中，应用快速冷冻切片技术的效果显著，可以为后期的治疗提供确切的依据，具有使用和推广价值。