双孢蘑菇2796凝集素对食用菌菌丝扭结的影响*

林勇，王宏雨，张迪

（1.福建卫生职业技术学院，福建 福州 350101；2.福建省农业科学院食用菌研究所，福建 福州 350003）

凝集素是一类能与糖特异性结合，具有与糖专一性、可逆结合的特点的蛋白[1]。凝集素是食用菌的重要活性成分，参与食用菌自身的分化，识别异源物质等参与食用菌内多种生理过程，同时还参与其它生物体内的一些重要生理过程，在生物体内细胞癌变、受精、分化和分子识别等生命过程中起着重要作用，日益成为国内外生物科学研究的热点之一[2-5]。

从目前国外对双孢蘑菇凝集素的研究成果来看，凝集素能够显著地抑制人乳腺癌细胞、人结肠癌上皮细胞、大鼠乳腺纤维母细胞、人视网膜上色素上皮细胞、人眼成纤维细胞等多种细胞的增值，并且这些抑制是可逆的，而且其细胞学毒性不明显[6-10]，这些特殊的活性使其在未来成为治疗肿瘤和组织增生的新型药物。

但是，目前凝集素促进菌种菌丝分化扭结的情况的研究却很少，对于双孢蘑菇2796这一来源丰富，推广迅速的食用菌凝集素应用的研究更是少之又少，对其作用于不同菌种的菌丝分化的研究更是几乎接近空白。综合上述原因，本文将双孢蘑菇2796提取的凝集素滴加在不同种菌种上，研究其促进菌丝分化的扭结情况，观察双孢蘑菇2796凝集素促进下是否使菌种提前出菇，从而减少工厂生产的时间，降低生产成本。

1 材料与方法

1.1 供试材料

新鲜双孢蘑菇子实体产自福建省宁德市金海西食用菌有限公司，品种为双孢蘑菇2796；新鲜菇子实体去除菇脚上的污物后保存于-20℃冰箱备用。

武香一号、灰树花、姬松茸，真姬菇、鸡腿菇、竹荪等菌种。

1.2 试验方法

1.2.1 双孢蘑菇2796凝集素的分离纯化

参照张迪等分离纯化方法[11]，获得各峰值的凝血活性，然后对其进行冷冻干燥，收集得到双孢蘑菇2796凝集素纯品。

1.2.2 食用菌培养基的制备

固体琼脂PDA培养基有2种：草类的培养基与一般的固体培养基。

草类PDA培养基的配方为：马铃薯20%、葡萄糖2%、K2HPO4 0.15%、MgSO4 0.5%、蛋白胨0.3%、酵母浸膏0.2%。

一般的PDA培养基配方为：马铃薯20%、葡萄糖2%、K2HPO4 0.3%、MgSO4 0.5%、VB1=10 mg/L、琼脂20%。

分别各自配制1000 mL，将用电子天平称量好的马铃薯切成片放在水中用电磁炉煮熟，煮沸15 min后，将其用纱布过滤与其他物质充分混匀，放在电磁炉上加热促进其混匀，再将其放入高压锅灭菌消毒。等其冷却至一定温度（不能让其凝固）后开始在超净台上倒入PDA，然后等液体凝固后开始接种。

1.2.3 菌种接种

在平板中央接入0.5 cm2武香一号、灰树花、姬松茸、鸡腿菇、竹荪、真姬菇等菌块（接种过程要全程保持不染菌），放在25 ℃恒温培养箱培养，待菌丝布满菌块后，将浓度0、5、10、15 mg/mL的双孢蘑菇2796凝集素（ABL）滴加在菌丝的表面的4个相对的区域，重复5次，即5个实验组，一个对照空白组，继续放在培养箱中黑暗培养10 d左右，然后将培养皿分别转移到10～15 ℃条件下，自然光照，80%湿度继续培养，观察结果，隔3天拍一次照片记录过程。

2 结果与分析

2.1 双孢蘑菇2796凝集素对武香一号、灰树花、姬松茸子实体的扭结有促进作用。

图1 不同浓度ABL处理过的武香一号对照图

由图1可见，滴加不同浓度ABL的武香一号经20 d，观察发现，左边的培养皿在滴加浓度5～15 mg/mL凝集素后武香一号均有明显的子实体出现，且浓度越高出现的时间越早，而右边的培养皿只是通过水处理，转色及扭结的时间明显推迟。

图2 不同浓度ABL处理过的灰树花对照图

由图2可见，滴加不同浓度ABL的灰树花经过20 d，观察发现，图两边的培养皿在不同浓度下灰树花均有明显的子实体出现，但可以看出15 mg/mL浓度的凝集素下的扭结情况比其他浓度的程度高很多，但不如武香一号香菇的子实体出菇快及明显。

图3 不同浓度ABL处理过的姬松茸对照图

由图3而可见，滴加不同浓度ABL处理的姬松茸经过20 d，观察发现，图两边的培养皿在不同浓度下姬松茸均有明显子实体出现，在15 mg/mL浓度凝集素的刺激下出菇的时间明显高于其他浓度或者空白对照，说明在一定高浓度凝集素下灰树花的出菇时间会大幅缩短。但是，比较武香一号香菇可知，没有武香一号香菇的子实体出菇情况快并且明显，也没有灰树花的结果明显。

图4 不同浓度ABL处理过的鸡腿菇对照图

图5 不同浓度ABL处理过的竹荪对照图

图6 不同浓度ABL处理过的真姬菇对照图

2.4 双孢蘑菇2796凝集素对鸡腿菇、竹荪、真姬菇子实体扭结没有明显影响

由图4、图5、图6可见，滴加不同浓度ABL处理的鸡腿菇、竹荪、真姬菇经过20 d，观察发现培养皿在不同浓度过下都没有出现有扭结的迹象。

3 讨论与结论

⑴ 凝集素具调节免疫系统功能，促进细胞有丝分裂形成，抑制肿瘤细胞生长和抗病毒功能，同时调节器官的分化和形成[12-16]。因此本研究探讨食用菌凝集素在菌丝发育和形态建成是否起着重要的作用。

⑵ 本实验探讨食用菌凝集素对食用菌菌丝的扭结及子实体的影响，特别是研究对覆土食用菌品种的扭结及出菇影响。结果显示，双孢蘑菇2796凝集素对武香一号香菇的扭结有着非常明显的作用，其次是姬松茸、再次是灰树花，也就是说都有提高出菇速度的可能，而对于竹荪、真姬菇、鸡腿菇等无影响，可以推测双孢蘑菇2796凝集素可能对一些品种器官的分化和形成起着非常重要的作用，但不同种类菌种的出菇时间、速度不同，所以有必要进一步研究。

⑶ 根据本实验研究结果可以进一步地进行小规模化的生产以检验其是否真的有效，也可进一步研究是否在一定凝集素的浓度范围内其出菇的速度呈现上涨趋势，而超过一定的浓度后就会出现抑制作用。