ISO15189体系下全自动血凝分析仪的3Q验证

莎 仁 梁 鱼

1.内蒙古自治区巴彦淖尔市医院检验科，内蒙古巴彦淖尔 015000；2.内蒙古医科大学，内蒙古呼和浩特 010110

随着凝血检测项目在临床的不断发展，临床以及相关领域对凝血检测结果的准确性和凝血检测效率的要求越来越高[1]。因此，为确保检测数据的准确可靠，在ISO15189体系下对医学实验室仪器设备进行3Q验证非常有必要。3Q验证即IQ、OQ和PQ，其中最关键的步骤为PQ即性能验证，要求验证频率是每年一次[2]。ISO15189体系也要求实验室新仪器在安装和应用于临床检测前应对其性能指标进行验证[3-5]，这都是保证检测过程每个环节质量的重要手段[6]。美国FDA也有同样的规定[7-8]。目前国内已有很多品牌的全自动凝血分析仪的性能验证报道[9-10]。以SysmexCS-2500全自动血凝分析仪为例，探究在15189体系下该全自动血凝分析仪的性能验证过程。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

仪器为日本希森美康公司（Sysmex）[11]生产的SysmexCS-2500全自动血凝分析仪；试剂为凝血酶原时间（PT）测定试剂盒（批号565631）、活化部分凝血活酶时间（APTT）测定试剂盒（批号556969）、凝血酶时间（TT）测定试剂盒（批号556839）、纤维蛋白原（FIB）测定试剂盒（批号595024）、D-二聚体；质控品为正常凝血质控品：质控1（批号548087）和 INNOOANCED-DIMERControl1（批 号562243）；异常凝血质控品：质控P（批号562143）和 INNOOANCED-DIMERControl2（批号 556715）。

1.2 方法

1.2.1 批内精密度 根据《临床血液学检验常规项目分析质量要求》[12]、《D-二聚体定量检测》文件[13]选取2个浓度水平高低值样本，连续重复测定11次，计算变异系数（CV），标准差（SD）。要求计算CV值需≤厂家要求。

1.2.2 日间精密度 根据CLSI EP15-A3文件[14]选取两个水平质控品，每天取出两个水平的样品各一份测定一次，共测定20 d，计算CV，SD。要求计算CV值需≤厂家要求。

1.2.3 准确性

1.2.3.1 准确性（PT、APTT、TT、FIB） 根据 CLSI EP15-A3文件[15]取两个水平的血凝质控品进行测定，计算每份样本检测结果与靶值的相对偏差。以偏差为评价指标，要求计算的检测结果与靶值的偏差在厂家规定的允许范围内。

1.2.3.2 准确性（D-二聚体） 根据EP15-A3文件[15]选取两个水平的定值质控品重复测定3次。要求D-二聚体低值、高值测定结果在厂家规定的允许范围内。

1.2.4 线性范围 根据408-2012《临床化学设备线性评价指南》[16]选取一份接近预期上限的高值血浆样本（H），FIB、D-二聚体按 100%、80%、60%、40%、20%、10%、5%的比例进行稀释。每个稀释度重复测定2次，计算均值。计算y=ax+b，验证线性范围，需符合a值在1±0.05范围内，R2≥0.9801的要求。

1.2.5 FIB、D-二聚体检测下限灵敏度 根据EP9-A3文件[17]连续测定接近理论低值水平血浆10次。结果需符合CV%＜20%。

1.2.6 携带污染率

1.2.6.1 PT、APTT、TT、FIB携带污染率 连续测定对倍稀释的正常血浆PT或APTT三次（j1、j2、j3）后，立即连续测定原血浆FIB或TT三次（i1、i2、i3），再连续测定血浆 PT或 APTT三次（j4、j5、j6）。根据下面公式计算PT、APTT、TT携带污染率CV值，要求均应≤10%。血浆中FIB的浓度要求在3～4 g/L。

1.2.6.2 D-二聚体、FDP携带污染率

1.2.6.2.1 高值样本对低值样本的污染率 低值样本置样本架1和3位置，高值样本置于2位置，每个样本分别测定3次，记录结果：N1、N2、N3、A1、A2、A3、N4、N5、N6。计算：K1=[N4-Mean（N1，N2，N3）]/Mean（N1，N2，N3）。 计 算 结 果 K1 应≤10.0%。

1.2.6.2.2 低值样本对高值样本的污染率 高值样本置样本架1和3位置，低值样本置于2位置，每个样本分别测定3次，记录结果：A1、A2、A3、N1、N2、N3、A4、A5、A6。 计 算：K2=[A4-Mean（A1，A2，A3）]/Mean（A1，A2，A3）。 计 算 结 果 K2 应≤10.0%。

1.3 统计学处理

采用SPSS 20.0统计学软件进行数据处理。计算的各检验指标性能验证结果的CV值用百分数的形式表示。

2 结果

2.1 批内精密度

批内精密度正常质控和异常质控CV值均符合厂家要求，验证合格。见表1～2。

表1 批内精密度正常质控水平验证结果

表2 批内精密度异常质控水平验证结果

2.2 日间精密度

日间精密度正常质控和异常质控CV值均符合厂家要求，验证合格。见表3～4。

表3 日间精密度正常质控水平验证结果

表4 日间精密度异常质控水平验证结果

2.3 准确性

2.3.1 准 确 性（PT、APTT、FIB、TT） PT、APTT、FIB、TT检测结果与靶值的偏差均符合要求，验证合格。见表5～6。

表5 准确性正常质控水平验证结果

表6 准确性异常质控水平验证结果

2.3.2 准确性（D-二聚体） D-二聚体检测结果与靶值的偏差符合要求，验证合格。见表7～8。

表7 D-二聚体低值准确度验证结果

表8 D-二聚体高值准确度验证结果

2.4 线性范围

所得FIB与D-二聚体的线性验证回归方程均符合要求，验证合格。见图1～2。

图1 验证FIB线性结果图

图2 D-二聚体线性结果图

2.5 检测下限（灵敏度）

FIB与D-二聚体检测结果CV值均符合要求。见表9。

表9 CS-2500灵敏度验证结果

2.6 携带污染率

检测结果显示PT/FIB、APTT/TT、FIB、TT/APTT、K1、K2的携带污染率CV值分别为-0.97%、0.50%、-0.52%、1.56%、2.56%、2.65%，均＜10%，符合要求，验证合格。

3 讨论

本研究在ISO15189体系下，参照CLSI颁布的EP系列文件，结合实际，对CS-2500全自动血凝分析仪进行了性能验证。精密度是用变异系数CV来衡量在规定的条件下对同一被测量品进行连续多次独立检验所得的测定结果之间的一致性。进行精密度验证是ISO15189体系中性能验证的关键一步[4]，也是进行其他项目性能验证的前提和基础[6]。准确性是衡量三次测量结果与靶值之间的一致程度的指标。线性范围是检测确定测定值与稀释倍数呈线性关系的范围。灵敏度是仪器测量最小被测量的能力，所测的最小量越小，该仪器的灵敏度越高。携带污染率是具体的量化携带污染，其值越小代表仪器检测过程样本相互影响越小。国内已有相应文献综述FIB项目比其他项目污染率高[5]。

SysmexCS-2500全自动血凝分析仪检测项目的3Q性能验证结果均符合厂家标识要求，同时该血凝分析仪多数验证指标也能达到ISO15189的规定要求[6]。所以通过验证可以确定该血凝分析仪精密度良好、准确性可靠、线性相关性较好、灵敏度较高、携带污染率低并具有较好的自洁能力，可用于ISO15189认可的医学实验室凝血检测等工作，向临床提供准确真实可靠的检验数据。