肿瘤坏死因子α诱导蛋白8型-2在原发性骨质疏松症中的表达及意义

吴迎春，许泽川，甘 俊，刘 漫

原发性骨质疏松症是随着年龄增长必然发生的一种生理退行性病变，目前认为其发病机制主要与内分泌、营养状况及免疫有关[1]。有研究指出，原发性骨质疏松症患者的免疫功能与骨代谢密切相关，其免疫因子表达异常可促进或抑制破骨细胞的分化增殖，与破骨细胞凋亡有关[2]。肿瘤坏死因子α诱导蛋白8型-2(tumor necrosis factor -α-induced protein -8-like 2, TIPE2)属于肿瘤坏死因子α诱导蛋白8家族的一员，是一种免疫负调控因子，在维持机体免疫稳态中发挥着重要调节作用[3]。TIPE2已被证实了在多种自身免疫性疾病中存在表达异常现象，但目前尚无其与原发性骨质疏松症关系的报道，故本研究通过分析原发性骨质疏松症患者TIPE2表达变化，旨在探究二者关系及TIPE2表达的意义。

1 资料与方法

1.1临床资料 选取我院2018年7月—2020年7月收治的原发性骨质疏松症139例为观察组，并以同期健康体检者70例为对照组。①纳入标准：符合《原发性骨质疏松症诊疗指南(2017)》关于原发性骨质疏松症的诊断标准[4]；经我院伦理委员会审核通过；患者知情同意且签署同意书；骨密度(T值)≤-2.5SD。②排除标准：严重心肝肾功能异常者；继发性骨折者；类风湿性关节炎者；甲状腺疾病者；慢性肝病者；慢性肾疾病史者；入组前半年内接受过雄激素替代治疗者；近3个月内有类固醇激素治疗史者。观察组男61例，女78例；>60岁83例，≤60岁56例；吸烟52例，饮酒47例。对照组男32例，女38例；>60岁39例，≤60岁31例。2组性别、年龄比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

1.2.1TIPE2 mRNA表达测定：采集2组外周血5 ml，应用天津灏洋生物制品科技有限责任公司提供的淋巴细胞分离液分离单核细胞；应用美国Invitrogen公司的Trizol试剂裂解组织，并采用美国Promega公司的M-MLV反转录酶及缓冲系统、上海生工生物科技有限公司的Oligo(dT)18引物提取总RNA；应用TIPE2 mRNA引物及SYBR Green荧光染料定量检测TIPE2 mRNA表达量。TIPE2 基因引物序列：5'-GTCGGTTCGGTAGCGCTGCT-3'(sence)、5'-TATCCTGGAACGTACGTATG-3'(antisence)，以GAPDH基因为内参基因。PCR反应条件为94℃、2 min，94℃、30 s，6℃、30 s，72℃、30s ，共35个循环；72℃、5 min。ΔCt值=CtTIPE2-Ct内参。其表达量用2-ΔΔCt评估。

1.2.2骨代谢指标：采集2组晨空腹静脉血5 ml，离心，分离血清，采用电化学发光法检测血清N-端骨钙素(N-MID)、β-胶原特殊序列(β-CTX)值。

1.3观察指标 ①比较2组TIPE2 mRNA表达及血清N-MID、β-CTX水平。②分析TIPE2水平、骨代谢指标对原发性骨质疏松症的诊断价值分析。③分析TIPE2水平与骨代谢指标的相关性。④根据ROC曲线分析结果，将观察组分为TIPE2 mRNA高表达组及TIPE2 mRNA低表达组，比较2组一般资料，分析影响TIPE2 mRNA表达的危险因素。

2 结果

2.1TIPE2 mRNA表达及骨代谢指标比较 与对照组比较，观察组TIPE2 mRNA表达水平降低，血清N-MID、β-CTX水平升高，差异有统计学意义(P<0.01)。见表1。

表1 2组纳入者TIPE2 mRNA表达及骨代谢指标比较

2.2TIPE2 mRNA表达水平、骨代谢指标对原发性骨质疏松症的诊断价值分析 TIPE2 mRNA表达水平诊断原发性骨质疏松症的曲线下面积(AUC)大于N-MID、β-CTX(P<0.05)。见表2、图1。

表2 TIPE2 mRNA表达水平、骨代谢指标对原发性骨质疏松症的诊断价值分析

图1 TIPE2 mRNA表达水平、骨代谢指标诊断原发性骨质疏松症的ROC曲线

2.3TIPE2 mRNA表达与骨代谢指标相关性分析 原发性骨质疏松症TIPE2 mRNA表达水平与血清N-MID水平呈负相关(P<0.05)。见表3。

表3 原发性骨质疏松症患者TIPE2 mRNA表达水平与骨代谢指标的相关性分析

2.4TIPE2 mRNA高表达组与低表达组临床资料比较 TIPE2 mRNA低表达组在钙摄入量≤400 mg/d、有骨折史及合并基础疾病所占比例高于TIPE2 mRNA高表达组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表4。

表4 TIPE2 mRNA高表达组与低表达组原发性骨质疏松症患者临床资料比较 (例)

2.5危险因素分析 钙摄入量≤400 mg/d、合并基础疾病是影响原发性骨质疏松症TIPE2 mRNA表达的独立危险因素(P<0.05)。见表5。

表5 影响原发性骨质疏松症患者TIPE2 mRNA表达的多因素分析

3 讨论

原发性骨质疏松症主要包括绝经期后骨质疏松症与老年性骨质疏松症，该类患者如遭受轻微创伤即可发生相应部位骨折，严重时可增加病死率[5]；文献报道，原发性骨质疏松症的发生可能与免疫功能紊乱有关[6]。TIPE2是一种新型免疫调节蛋白，在固有和适应性免疫反应中均发挥着负性调节作用，可平衡机体的免疫动态，反映机体免疫功能[7-8]。

本研究结果显示，与对照组比较，观察组TIPE2 mRNA表达水平降低，N-MID、β-CTX表达水平升高，说明原发性骨质疏松症存在TIPE2基因失活现象。本研究结果同时显示，TIPE2 mRNA表达水平与N-MID表达水平呈负相关，说明原发性骨质疏松症TIPE2 mRNA表达水平与骨代谢水平有关。骨代谢指标可反映个体骨量的快速和慢速丢失，常用于原发性骨质疏松症辅助诊断[9]，提示TIPE2 mRNA表达水平或可作为骨质疏松症的诊断指标。本研究结果显示，TIPE2 mRNA表达水平诊断原发性骨质疏松症的AUC大于N-MID、β-CTX，表明TIPE2 mRNA表达水平对原发性骨质疏松症的诊断价值高于骨代谢指标，与部分文献[10-11]报道存在差异，可能与本研究样本少且观察时间短有关。

TIPE2基因与原发性骨质疏松症发病的关系目前尚不可知，推测与免疫功能异常有关，但尚未被证实。文献报道，通过分析影响患者TIPE2 mRNA表达的危险因素或可间接反映其与原发性骨质疏松症的关系[12]。本研究结果显示，TIPE2 mRNA低表达组在钙摄入量≤400 mg/d、有骨折史及合并基础疾病方面的比例高于TIPE2 mRNA高表达组，钙摄入量≤400 mg/d、合并基础疾病是影响原发性骨质疏松症患者TIPE2 mRNA表达的危险因素。表明每日钙摄入量过少、合并基础疾病是导致该类患者免疫功能下降的相关因素[13]。文献报道，每日钙摄入量过少、合并基础疾病也是引发原发性骨质疏松症发病的相关因素[14]，提示TIPE2 mRNA表达或可影响患者钙摄入，从而导致原发性骨质疏松症发生，但该想法仍处于猜想阶段，需进一步研究证实。

综上所述，原发性骨质疏松症患者存在TIPE2 mRNA表达异常的现象，且其表达水平与骨代谢指标存在相关性，钙摄入量≤400 mg/d、合并基础疾病是影响该类患者TIPE2 mRNA表达的危险因素。