叉头框蛋白P3 在胃癌中的表达及与患者临床特征和预后的关系

王希，张勇峰，段会娟

河南科技大学第一附属医院病理科，河南 洛阳4710030

胃癌是消化系统常见的恶性肿瘤，全球范围内，胃癌的发病率居恶性肿瘤第四位，病死率居恶性肿瘤第二位。目前，胃癌的临床治疗以手术切除病灶联合化疗等综合治疗为主，但胃癌的临床治疗水平仍有待进一步提高。近年来，精准靶向治疗是胃癌临床研究的重点，免疫疗法已成为临床研究的热点。叉头框蛋白P3（forkhead box P3，FOXP3）等免疫细胞及其相关因子的表达水平与胃癌的发生发展、转移与预后密切相关，因此，调节性T（regulatory T，Treg）细胞可影响胃癌的进展，从而发挥抗肿瘤作用。FOXP3 是一种转录因子，在Treg 细胞的形成与免疫抑制中发挥重要作用。FOXP3 为Treg 细胞的特异性标志物，而Treg 细胞的功能与表型呈多样性，FOXP3 Treg 细胞在恶性肿瘤微环境中也存在诸多表型异质性，不同肿瘤组织中的FOXP3 表达水平及功能亦可能存在差异。目前，临床研究主要集中于胃癌患者的胃癌组织和外周血FOXP3的表达方面，在胃癌组织与癌旁组织中的研究较少。本研究探讨FOXP3在胃癌组织及癌旁组织中的表达情况，为患者的病情和预后评估提供必要参考，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2016 年1 月至2018 年12 月河南科技大学第一附属医院收治的胃癌患者。纳入标准：①年龄≥18 岁；②经手术病理或内镜活检确诊为胃癌。排除标准：①癌前病变及其他胃部疾病；②合并其他恶性肿瘤；③3 年随访资料完整；④因其他病因行胃、腹部手术。依据纳入和排除标准，本研究共纳入115例胃癌患者，其中男90例，女25例；年龄﹤70 岁70 例，≥70 岁45 例。取115 例胃癌患者的胃癌组织及相应的癌旁组织。

1.2 免疫组化法检测FOXP3 的表达情况

取胃癌组织及相应的癌旁组织常规切片，厚度3～5 μm，妥善黏附，65 ℃烘片1 h，置于二甲苯中10 min，重复1 次，以无水乙醇清洗5 min，重复1次。使用90%、80%、70%梯度的乙醇清洗，双蒸水（doble distilled water，ddHO）清洗5 min；pH=6.0 的柠檬酸缓冲液1 L 于高压锅内煮沸，将玻片放入高压锅内煮沸3 min，自然冷却后以ddHO 清洗3 次，每次5 min。室温下以3%的过氧化氢浸泡15 min；pH=7.2 的磷酸缓冲液（phosphate buffered saline，PBS）浸泡3 次，每次5 min；置入湿盒内维持37 ℃加封闭液封闭1 h，PBS 浸泡3 次，每次5 min。加入一抗，4 ℃孵育过夜，PBS 浸泡3 次，每次5 min；加入二抗，室温下孵育1 h，PBS浸泡3次，每次5 min。二氨基联苯胺（diaminobenzidine，DAB）显 色，ddHO 漂洗5 min，苏木素衬染后自来水冲洗，65 ℃的烤箱内烘干，中性树胶封片。

使用Dmetrix 扫描系统转换为数字切片，由2名病理科副主任医师以双盲法阅片，如遇分歧由2名医师协商一致后决定。显微镜下观察细胞核着色强度（阳性细胞），计算阳性细胞所占比例，无阳性细胞计0 分，﹤10%计1 分，10%～50%计2 分，﹥50%计3 分；0～1 分为低表达，2～3 分为高表达。

1.3 随访方法

治疗后每月复查1 次，复查3 次后改为每3 个月复查1 次，于复查时随访，未到院复查的通过电话随访，以患者死亡或随访3 年为随访终点。

1.4 统计学方法

采用SPSS 23.0 软件对所有数据进行统计分析，计数资料以例数和率（%）表示，组间比较采用

χ

检验，等级资料的比较采用秩和检验；采用Kaplan-Meier 绘制生存曲线，组间比较采用Log-rank检验；以

P

﹤0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 FOXP3 表达情况的比较

胃癌组织中FOXP3 高表达52 例，低表达63例；癌旁组织中FOXP3 高表达47 例，低表达68 例；胃癌组织与癌旁组织中FOXP3 表达情况比较，差异无统计学意义（

χ

=0.443，

P

﹥0.05）。

2.2 不同临床特征胃癌患者胃癌组织和癌旁组织中FOXP3 表达情况的比较

不同性别、年龄、肿瘤最大径、分化程度、临床分期、N 分期、M 分期胃癌患者癌旁组织中FOXP3表达情况比较，差异均无统计学意义（

P

﹥0.05）。不同性别、年龄、分化程度、临床分期、M 分期胃癌患者胃癌组织中FOXP3表达情况比较，差异均无统计学意义（

P

﹥0.05）；不同肿瘤最大径、N 分期胃癌患者胃癌组织中FOXP3表达情况比较，差异均有统计学意义（

χ

=12.916、

Z

=-3.086，

P

﹤0.05）。（表1）

表1 不同临床特征胃癌患者胃癌组织和癌旁组织中FOXP3 表达情况的比较（n=115）

2.3 生存情况的比较

随访24.86～45.64个月，胃癌组织中FOXP3低表达胃癌患者的平均总生存期为34.837个月（95%CI：33.291～36.384 个月），短于FOXP3 高表达患者的43.392 个月（95%CI：42.038～44.746 个月），差异有统计学意义（

χ

=30.450，

P

﹤0.05）；癌旁组织中FOXP3低表达胃癌患者的平均总生存期为34.959个月（95%CI：33.434～36.484 个月），短于FOXP3 高表达患者的44.278个月（95%CI：43.146～45.410个月），差异有统计学意义（

χ

=36.932，

P

﹤0.05）。（图1、图2）

图1 胃癌组织中FOXP3低表达（n=63）与FOXP3高表达（n=52）胃癌患者的总生存曲线

图2 癌旁组织中FOXP3低表达（n=68）与FOXP3高表达（n=47）胃癌患者的总生存曲线

3 讨论

胃癌为消化系统种常见的恶性肿瘤，早期手术可以获得理想的预后，但胃癌的病死率仍高居恶性肿瘤第二位。随着胃癌治疗的不断深入研究，近年来，免疫疗法已成为治疗胃癌的重要手段。FOXP3 是Treg 细胞的特异性生物学标志物，其在Treg 细胞分化、维持Treg 细胞功能与免疫抑制等方面均发挥着重要作用。Treg 细胞作为调控机体免疫功能稳态与自身免疫耐受的重要调节细胞，在肿瘤免疫调控中发挥着重要调节作用，其在免疫应答中通过抗原受体刺激后可抑制CD4T 淋巴细胞、CD8T 淋巴细胞、B 细胞的活化增殖。肿瘤组织中FOXP3 表达下调、Treg 细胞减少，多提示预后不良。肿瘤细胞核内FOXP3 高表达是恶性肿瘤患者预后的重要保护因素。目前，FOXP3 在细胞质内表达的临床价值尚未完全清晰，有研究认为，早期胃癌细胞中FOXP3 高表达与预后良好有关，表明FOXP3 具有拮抗肿瘤细胞的作用。

本研究结果表明，胃癌患者胃癌组织和癌旁组织中FOXP3 高表达患者的总生存期更长，表明FOXP3 高表达可能是胃癌患者预后良好的保护因素。本研究结果显示，不同肿瘤最大径、N 分期胃癌患者胃癌组织中FOXP3 表达情况存在差异（

P

﹤0.05），表明胃癌组织中FOXP3 高表达患者的肿瘤最大径更小、区域淋巴结转移范围更小且程度更轻，可为患者病情和预后评估提供科学参考。但本研究仅独立评估胃癌组织和癌旁组织中FOXP3表达情况，尚未比较胃癌组织、癌旁组织中FOXP3均高表达或低表达患者的生存情况，有待于进一步研究明确。同时，本研究纳入的样本量较小，有待于进一步扩大样本量进行验证。

综上所述，FOXP3 在胃癌组织和癌旁组织中的表达情况无明显差异，其高表达往往提示肿瘤最大径更小、区域淋巴结转移范围更小且程度更轻，患者生存期更长。