益肾消结方对阿霉素肾病综合征大鼠的药效学研究

文皑巍 欧源术 邓延莉

【摘要】目的：讨论益肾消结方对阿霉素肾病综合征大鼠的尿蛋白、血清白蛋白、血  脂、血肌酐等药效学指标的影响。方法：将 60 只雄性 SD 大鼠随机分为激素组、激素加卡托普利组、中药加激素加卡托普利、模型组、空白对照组。除空白对照组外，其余各组建立阿霉素肾病综合征模型。各组大鼠于造模后 29 天起开始灌胃对应药物，连续 4 周。计算各组单位体重 24 小时尿蛋白排出量。测定治疗结束后各组大鼠血清总蛋白、血清白蛋白、尿素氮、血清肌酐、总胆固醇等指标。结果：治疗结束后中药加激素加卡托普利组单位体重 24 小时尿蛋白排出量、血清总蛋白、血清白蛋白、总胆固醇均显著优于其余各组。结论：益肾消结方能有效控制蛋白尿及低蛋白血症，调节脂代谢紊乱，改善肾病综合征预后。

【关键词】肾病综合征;益肾消结方;尿蛋白;血清白蛋白;血脂

【中图分类号】R285.5 【文献标识码】A 【DOI】10.12332/j.issn.2095-6525.2021.11.002

肾病综合征（nephrotic syndrome，NS）是肾小球疾病中最常见的一组临床表现综合征症候群，以大量蛋白尿、低蛋白血症、高度水肿、高脂血症为表现，以肾小球基膜通透性增加为特征，蛋白尿是其最基本病理生理机制。目前治疗以激素或激素联合免疫抑制剂为主，不良反应较大。寻求清除蛋白尿，并有保护肾功能作用的中医药疗法，成为了国内外学者关注的热点。加强中西医结合防治肾病综合征的研究，具有十分重要的意义。

益肾消结方由三棱、莪术、白芥子、瓦楞子、王不留行、水蛭组成，该药作为四川省第二中医医院肾病科科室协定处方，治疗肾病综合征已有30 年时间，临床累计使用上万病例数。本研究采用尾静脉注射阿霉素建模方法建立阿霉素肾病模型，观察益肾消结方对阿霉素肾病大鼠尿蛋白、血清白蛋白、血脂、血肌酐等药效学指标的影响。

1  实验材料

1.1 实验动物及环境条件

雄性 SD 大鼠，体重 200g-240g，SPF 级合格动物。室内通过自动空调控制室温在 20～ 24℃，相对湿度控制在 40～70%，分笼饲养，自由饮水，常规全价饲料，定时定量喂养。

1.2实验药物

益肾消结方（三棱、莪术、王不留行、白芥子、瓦楞子、水蛭，方中各种药物等量）， 中药均由四川新绿色药业提供，将中药方剂制成免煎剂备用。醋酸泼尼松片，规格：5mg; 卡托普利片，规格：25mg;造模药物：盐酸多柔比星（阿霉素）。

1.3 实验试剂及仪器

总蛋白定量测试盒（BCA 法）;白蛋白测试盒;高密度脂蛋白胆固醇（HDL）试剂盒;低密度脂蛋白胆固醇（LDL）试剂盒;总胆固醇（TC）试剂盒;甘油三酯（TG）试剂盒;肌酐（Crea）试剂盒;尿素（Urea）试剂盒。日立 7020 型全自动生化分析仪，Varioskan Flash全波长扫描式多功能读数仪。

2  实验方法

2.1 造模、分组

取体重 200g～240g 的雄性 SD 大鼠 60 只放入清洁代谢笼中，收集 24h 尿液，检测尿蛋白含量和 24h 尿蛋白排出量，所得测量值即为每只大鼠造模前尿蛋白排出量。一次性尾静脉注射剂量为 6.5mg/kg 剂量的阿霉素，造模 28 天后用代谢笼接取 24h 尿液测定尿蛋白，每100g 体重 24h 尿蛋白排出量超过造模前测量值 1.5 倍即认为肾病模型成立。选取造模成功大鼠随机分为 A、B、C、D 四组，即激素组、激素+卡托普利组、激素+卡托普利+中药组、模型对照组。另外取 12 只正常大鼠作为正常对照组。

2.2给药方法

按上述方法造模成功后，各给药组大鼠于造模 29 天起开始灌胃（ig），按 70kg 成年人每日给药量，通过《药理实验方法学》附录四“人和动物间按体表面积折算的等效剂量比值” 计算得到大鼠每日药物灌胃量。其中 A 组灌胃强的松 10mg/kg，B 组灌胃强的松 10mg/kg 及卡托普利片 20mg/kg，C 组灌胃强的松 10mg/kg、卡托普利片 20mg/kg 及益肾散结方免煎颗粒 8.1g/kg（等效于成年人益肾消结方每种药物给药 15g，成方合计 90g），D 组 ig 蒸馏水10ml/kg，每组连续灌胃 4 周。正常对照组 ig 给予给药组等体积蒸馏水。

2.3观察指标

于治疗后第 4 周，收集 24h 尿液，测定 24h尿量及尿蛋白浓度，计算 24h 尿蛋白定量（mg/24h）及 100g 单位体重 24h 尿蛋白定量（mg/100g）。通过腹主动脉取血，检测血清总蛋白（TP）、血清白蛋白（Alb）、尿素氮（BUN）、血清肌酐（Cr）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL）。

2.4数据统计

所有数据均用x±s表示，采用 SPSS 11.0 统计软件进行组间单因素方差分析，各组均数间的两两比较采用 LSD-t 检验，P<0.05 具有显著性差异。

3  结果

3.1对各组大鼠体重的影响

个别动物在给药期间死亡。各组动物体重增长情况见表 1。

3.2 对各组大鼠尿蛋白排出量的影响

各给药组给药 4 周后，尿蛋白排出量均较模型组有一定减少，C 组与模型组比较有显著性差异（P<0.01），C 组尿蛋白排出量较大幅度低于B 组，提示益肾消结方对肾病综合征模型大鼠有一定改善作用。尿蛋白排出量情况见表 2。

3.3 对各组大鼠血清蛋白指標、肾功指标、血脂指标的影响

给药期结束，发现模型组动物血清总蛋白（TP）和白蛋白（Alb）较对照组均有不同程度下降，血清白蛋白下降更明显（P<0.05）。各给药组给药后与模型组比较血清 TP、Alb 值均有增长，TC 值均有下降，C 组血清 TP、Alb、TC 值与模型组比较有显著性差异（P<0.05）。各组动物血清蛋白指标、肾功指标、血脂指标情况见表 3。

4  讨论

肾病综合征属中医“水肿”范畴，病位在肺脾肾三脏。其病机虚实错杂，多致本虚标实。每当肾病反复发作，湿热内停日久不化，凝聚成痰。治疗过程中反复使用激素和利尿剂，激素为“壮阳之品”，内热灼液，利尿伤阴，阴液稠积成痰瘀，形成了肾病综合征的难治性、复杂性[1]。痰瘀一方面作为病理产物贯穿疾病始终，另一方面也可以是致病因素， 加重病势，是阻碍病情转归的重要因素，该病虽为本虚标实、虚实夹杂，然痰瘀为可化之物，正如张景岳所谓： “但化得其正，则形体强，营卫充; 若化失其正，则脏腑病” [2]。

益肾消结方由三棱、莪术、白芥子、瓦楞子、王不留行、水蛭组成。其中水蛭破血通经为君药，三棱、莪术破血逐瘀，行气散结，为臣药;白芥子散结通络，瓦楞子消痰化瘀为佐药，王不留行活血行气消肿为使药，组方中佐以“温药及行气之品”，体现出“阴邪者得温则散” 之理，痰瘀皆属阴邪之致病因素，得温则气血行。全方共奏消痰软坚，破血逐瘀，行气散结之功效。君药水蛭型平，味苦、咸，有小毒，经炮制后入藥，归肝经，能破血通经，逐瘀消癥，兼利水道。水蛭可能通过降低 PI3K/Akt/mTORmRNA 的表达，抑制各种炎性细胞因子的表达，减轻肾小球系膜细胞的增生，增加肾小球系膜细胞调亡，进而减轻肾脏纤维化[3]。臣药莪术性辛、苦、温，归肝、脾经，具有行气破血，消积止痛之功。莪术醇能够抑制细胞外基质中胶原的分泌，抑制血管内皮生长因子基因表达，能通过抑制 IRE1 磷酸化介导下游TRAF2 蛋白表达，干预 IRE1-XBP1 信号通路活化，阻止肾小管上皮细胞凋亡，减缓肾间质纤维化[4]。三棱性辛、苦、平，归肝、脾经，具有破血行气，消积止痛之功。研究显示三棱可抑制肾囊肿上皮细胞的增殖，从而延缓多囊肾病的发生与发展[5]。由“三棱、莪术”等药物组成的“安肾胶囊”，能有效降低膜性肾病大鼠蛋白尿，减轻血尿，改善基底膜损伤程度[6]。

该实验显示，在三组治疗组中，相比于纯西药治疗，中西医结合治疗后大鼠 24 小时尿蛋白定量、单位体重尿蛋白定量、血总蛋白、白蛋白、胆固醇改善幅度均更为明显。这显示了益肾消结方治疗肾病综合征的有效性，在改善蛋白尿及低蛋白血症、调节脂代谢紊乱均有很大的潜力。为进一步开展益肾消结方治疗肾病综合征肾组织病理学研究，以及其作用靶点、信号通路、代谢消除等机制研究打下了基础。对探讨中西医结合治疗肾病综合征的机制具有重要的意义。

参考文献：

[1]魏连波.肾病综合征高凝状态形成机制与中医治疗[J].中华肾病研究电子杂志志，2017，6（4）： 169-172.

[2]甘洪桥，吴巍.吴康衡教授从痰瘀论治肾性水肿经验[J].四川中医，2016，34（6）：1-3.

[3]曹响，谢丽萍，赵洁，江志雄，徐霜霜.基于 PI3K/Akt/mTOR 通路探讨水蛭对IgA 肾病的作用机制[J].亚太传统医药，2020，16（02）：181-184.

[4]张翠，张思琪，王丹枫，张腾娇，孙博.莪术醇对梗阻性肾病大鼠 IRE1 调控 TRAF2、XBP1 抑制细胞凋亡的影响[J].中国药学杂志，2018，53（18）：1557-1563.

[5]柳红芳，张向伟，胡济源， 等.中医分期辨治多发性肾囊肿经验[J].环球中医药，2018，11（3）：395-397.

[6]王先锋，许勇强，李陈雪， 等.中医药治疗肾病综合征的研究进展[J].中医药导报，2018，24（11）： 100-103，116.

基金项目：

四川省科技厅科研院所基本科研项目（编号：2019-4-537）。

*通讯作者：欧源术，四川省第二中医医院。