D12S391基因座检出四等位基因2例

郑瓯翔，夏雷

温州市公安局刑事科学技术研究所，浙江 温州 325000

1 案 例

1.1 简要案情

本实验室在人员建库工作中，通过对32 000余份无关个体样本进行常染色体检验，发现2 例D12S391基因座具有四等位基因现象，发生率约为0.006 25%。为验证该样本检验的准确性及探究四等位基因形成的原因，本实验室对其进行了复核检验。

1.2 检测方法

采用直接扩增法进行DNA扩增。

分别采用华夏TM白金PCR 扩增试剂盒（美国Applied Biosystems 公司），人类STRtyper-21G 扩增荧光检测试剂盒、SureID® PanGlobal 人类DNA 身份鉴定试剂盒（宁波海尔施公司），在9700型PCR 仪（美国Applied Biosystems 公司）上按各试剂盒说明书进行STR复合扩增，扩增体系为10μL，扩增产物应用3500xL基因分析仪（美国Applied Biosystems 公司）进行检测，并使用GeneMapperTMID-X软件（美国Applied Bio⁃systems公司）进行分型。

1.3 检测结果

首次采用华夏TM白金PCR 扩增试剂盒进行扩增，结果显示，除D12S391基因座表现为四等位基因外，其余基因座均表现为正常分型。1号样本D12S391基因座基因型依次为19，21，22，23，峰高比约为1∶1∶1∶1（图1）；2 号样本D12S391基因座基因型依次为16，21，22，23，峰高比约为1∶1∶1∶1（图2）。

图1 1号样本采用华夏TM白金PCR扩增试剂盒的扩增结果Fig.1 The amplification results of sample 1 with HuaxiaTM Platinum PCR Amplification Kit

图2 2号样本采用华夏TM白金PCR扩增试剂盒的扩增结果Fig.2 The amplification results of sample 2 with HuaxiaTM Platinum PCR Amplification Kit

随后分别采用人类STRtyper-21G 扩增荧光检测试剂盒、SureID® PanGlobal 人类DNA 身份鉴定试剂盒进行复核，结果一致。

2 讨论

目前，国内外法庭科学中个体识别、亲子鉴定主要采用STR 分型方法。正常人常染色体单个STR 基因座只有2 个等位基因，纯合子个体图谱表现为只有1 个峰或1 条带，而杂合子个体图谱表现为2 个峰或2 条带，也有报道[1-3]称个别基因座检出3 个峰或3 条带。四等位基因是指个体图谱单个STR 基因座表现为4个峰或4条带，并且通过不同试剂盒验证，可以得到确认，情况极为罕见。本文涉及的2 个样本在分别采用华夏TM白金PCR扩增试剂盒、人类STRtyper-21G扩增荧光检测试剂盒、SureID® PanGlobal 人类DNA身份鉴定试剂盒复合扩增后，在D12S391基因座检出相同的基因型，且除D12S391基因座表现为四等位基因外，其余基因座均表现为正常分型，可以排除样本污染、实验室污染、PCR 扩增异常、荧光燃料污染、Pull-up 峰、某基因座过大或过小的off-ladder（OL）等位基因落在了相邻基因座范围内[4-5]以及试剂盒引物设计等因素。在确定样本为单一来源的情况下，某个STR 基因座检出多等位基因，这种拷贝数变异（copy number variation，CNV）现象产生的原因是由于样本中存在多余的染色体片段，采用PCR 引物扩增时产生了额外的PCR 扩增片段[6]。多等位基因的形成机制尚不明确，可能是由于遗传因素，如染色体在减数分裂时出现不等价交换，或有丝分裂时异常分离导致三体综合征、体细胞突变，或受精卵发育阶段，染色体不分离产生嵌合体等，也可能是骨髓移植后形成了嵌合体。而根据遗传学发育特征及D12S391基因座所在的染色体的特点，推测本文2 例样本出现四等位基因的原因可能是局部基因重复，具体需要进一步开展基因座测序才可明确。关于峰高，本文2例在D12S391基因座中形成的4 个峰的峰高比均为1∶1∶1∶1，推测应该是该基因座的引物区存在相邻的结合位点，且实现了均衡扩增。

在个体识别或亲子鉴定中，四等位基因可能导致错误判断，因此，出现基因座分型异常时应引起重视，使用多种试剂盒、多个基因座分型进行复核确认，排除各种因素的干扰和影响，降低错误分析的风险，确保鉴定意见的准确性，同时，可以考虑将四等位基因座作为特征基因座在个体识别中加以应用。