Sysmex XN-9000复检规则及3R规则在综合医院应用中的评估

王小华

（福建医科大学附属南平市第一医院检验科，福建 南平 353000）

SysmexXN-9000型全自动血细胞分析流水线（以下简称XN-9000），是在XE系列的基础上增加了白细胞、嗜碱粒细胞和有核红细胞同时计数的“WNR通道”，幼稚细胞检测的“WPC通道”和血小板荧光计数的“PLT-F通道”等。XN-9000较传统的血细胞分析仪检测质量和效率都大幅提高。然而，在临床实践中工作人员对全自动仪器的过分信赖导致血细胞检验中形态学的观察被忽视，以至于漏检、漏诊及误诊的现象屡有发生[1]。参照国际实验血液学学会推荐的“41条自动CBC和DC复检规则”[2]和国内XE-2100血液分析仪复检标准制定协作组推荐的“23条复检规则”[3]，并综合考虑本实验室的情况和XN-9000仪器的性能，我们建立了本实验室的复检规则和3R规则，以提高血液学检测的质量和效率。

1 材料与方法

1.1 一般资料 静脉血液样本来自2019年1～6月福建省南平市第一医院门诊和住院的患者，样本使用EDTA-K2抗凝管采集，所有样本均在2 h内检测，分别用XN-9000流水线自动进样模式进行检测和SP-10进行推片染色。

1.2 仪器与试剂 Sysmex XN-9000全自动血细胞分析仪,试剂、校准品、质控品及SP-10全自动推片机均由Sysmex公司提供；瑞氏染液由贝索公司提供；显微镜OLYMPUS-BX53。

1.3 方法

1.3.1 人员培训 根据第四版《全国临床检验操作规程》和《白细胞分类计数参考方法》，对相关检验人员进行培训[4-5]。仪器的操作、仪器结果的审核由主管检验技师完成；显微镜镜检由2名具有丰富经验的主管检验技师完成，并进行双盲检验。

1.3.2 检测方法 样本使用Sysmex XN-9000自动进样模式进行检测，需2 h内检测完成。同时，SP-10推片机将需要镜检的样本自动制作涂片、固定、染色、洗脱和干燥。其他没有自动推片的样本由人工制作血涂片，并用瑞氏染液进行染色，保证推片和染色的质量。镜检由经验丰富的检验人员按照培训的方法进行。需镜检的内容有：①估算白细胞和血小板数量。②白细胞形态分类：采用双盲检验对每张血涂片进行分类200个白细胞，并观察其形态。③观察血小板和红细胞的大小、形态及染色情况。④观察有无巨大血小板、有无血小板聚集现象。⑤其他异常情况：有无核红细胞、红细胞冷凝集及疟原虫等寄生虫。

1.4 涂片镜检阳性判读标准 依据国际制定的12条镜检阳性规则，国内血液学专家将规则进行进一步的完善，统一国内的评估标准[6]。修改后的判读标准为：①RBC体积大小不均一（细胞体积大小相差1倍以上）；RBC淡染区扩大（大于1/2淡染区的红细胞多于30.00%）；若血涂片中发现寄生虫即可认为其红细胞形态有改变。②PLT聚集（原则上是血小板轻微小堆聚集）。③巨大血小板大于15.00%。④Dohle小体的中性粒细胞大于10.00%。⑤有空泡变性的中性粒细胞大于10.00%。⑥有中毒颗粒的中性粒细胞大于10.00%。⑦原始和幼稚细胞大于1.00%。⑧早幼粒细胞和中性中幼粒细胞大于1.00%。⑨中性晚幼粒细胞大于2.00%。⑩有核红细胞大于或等于2.00%；异常淋巴细胞大于5.00%。⑪浆细胞≥1.00%[7]。

1.5 复检规则的验证以及结果的判读 以涂片镜检为金标准，对1032例全血样本（包括门诊和病房患者样本）的检测结果进行分析，并计算使用本实验室制定的复检规则后的血涂片复检率。并统计真阳性率、假阳性率、真阴性率、假阴性率。真阳性的定义为触犯了复检规则且人工镜检结果也是阳性；真阴性的定义为未触犯复检规则且人工镜检结果同为阴性；假阴性的定义为未触犯复检规则但人工镜检结果为阳性；假阳性的定义为触犯了复检规则但人工镜检结果为阴性。

2 结果

2.1 复检规则及3R规则 本实验室复检规则参考2005年国际血液学组织制定的“41条自动CBC和DC的复检规则”，以及2008年XE-2100血细胞复检标准协作组制定的《XE-2100自动血细胞计数和白细胞分类涂片复检规则》，结合我院患者的情况以及XN-9000仪器的性能，建立本实验室血液分析复检规则与XN-9000的3R规则。见表1和表2。

表1 本实验室复检规则

表2 XN-9000血常规检测3R规则

2.2 1032例样本的血常规复检情况 对1032例样本的血常规复检情况进行评估并优化。见表3。统计分析1032例样本的真阳性率、假阳性率以及真阴性率、假阴性率指标，真阳性224例（21.70%），假阳性50例（4.85%），真阴性743例（72.00%），假阴性15例（1.45%），总体符合967例（93.70%）。

表3 1032例血常规复检情况

2.3 500例全血标本验证结果 选择500例全血标本（主要为血液病和肿瘤化疗患者）对建立的复检规则及3R规则进行验证，验证结果见表4。结果显示：准确率为93.00%；需推片复检的标本有145例，推片率为29.00%；假阳性标本20例（4.00%）；假阴性标本15例（3.00%），符合国际规定的标准（小于5.00%），且无病理细胞漏检，假阴性的原因主要是仪器漏报少量巨大血小板和轻微血小板聚集。见表4。

表4 500例全血标本验证结果

3 讨论

尽管目前全自动血液分析仪极大的提高了工作效率，但仪器检测仍只是作为一种筛查方法，遇到比较异常情况时，依然需要用显微镜进行手工复检，而且制定合理的仪器复检规则是提高检验效率和准确性的重要工作[8-9]。本实验室建立的复检规则和3R规则是基于XN仪器的性能和国际“41条自动CBC和DC复检规则”和国内“23条复检规则”的基础上完成的，并遵从如下原则：①复检规则尽可能包含仪器所有检验参数、细胞形态学特征。②在保证异常病理细胞不漏检的前提下尽可能降低复检率。③具有诊断意义的检验参数不能出现假阴性，其他的假阴性率不得大于5.00%。④在假阴性率低于规定的前提下降低假阳性率。

本研究通过对1032例样本的结果进行分析，初步评估了本实验室24条血液分析复检规则和11条XN仪器的3R规则的准确性，结果显示准确率为93.70%；需推片复检的标本196例，推片率为18.99%；假阳性标本50例（4.85%），符合国际规定的小于5.00%。采用主要是血液科和肿瘤科的全血标本对复检规则及3R规则进行验证可行性及可靠性，结果显示准确率为93.00%；需要推片复检的标本有145例，推片率为29.00%；假阳性标本20例（4.00%），仪器报警存在原始细胞或幼稚细胞，而镜检发现原始细胞或幼稚细胞比例＜1.00%；假阴性标本15例（3.00%），符合国际规定的小于5%，且无血液病理细胞漏检，漏报的主要是轻微的巨大血小板和少量血小板聚集。本次验证的复检率和假阴性率均低于文献报道的35%和4.5%[10]，这可能与XN仪器的新通道和新检测模式有关：“WNR通道”增加了有核红细胞修正功能，并且能给予定值结果，这有助于应对来自儿科、血液科及肾内科等科室的特殊检测要求；低值白细胞样本检测模式为正常检测模式计数量的3倍，提高了低值白细胞的检测精密度和异常细胞检出率，降低假阴性；PLT-F采用恶嗪为荧光染料，对核酸进行特异性的染色，检测低值PLT及排除白细胞碎片、红细胞碎片的干扰能力更强[11-13]。鉴于XN-9000的性能及以上新增的新通道和新检测模式，我们制定了适用于XN-9000的3R规则，包括Repeat（仪器原因的重新检测）；Rerun（计数原因的重新检测）；Reflex（PLT低值或干扰问题的PLT-F通道，WBC低值问题的LW模式）。在复检规则的基础上，增加3R规则，可以大大的减少复检率，并且提高工作质量。

由于医院特色临床学科及实验室质量要求的差别[14]，各实验室需建立符合自身情况的个性化血液分析复检规则。复检规则不可片面地强调降低复检率，忽视检验质量。尽管从目前的数据分析，本实验复检率和假阴性率均低于相关文献报道，然而本实验也存在一些不足之处，本验证的样本数偏少，仅500例，在后续的工作中，还会不断增加样本对本规则进行验证、补充和完善，以提高血细胞分析质量和技术水平。