厚积薄发破难攻坚 匠心履职勇攀高峰——访河北省第二期现代农业产业技术体系蛋肉鸡创新团队蛋鸡疫病防控岗岗位专家李佩国

□本刊记者 张丽凤

河北省是蛋鸡养殖大省， 不仅养殖存栏量大，而且养殖品种丰富，既有优质的地方鸡种，也有自主培育的高产配套系蛋鸡。 然而在推进蛋鸡产业健康发展的进程中， 疾病始终是不容忽视的制约因素。2018 年，李佩国教授受聘河北省第二期现代农业产业技术体系蛋肉鸡创新团队蛋鸡疫病防控岗岗位专家后， 带领团队以护航蛋鸡产业高质量发展为核心目标， 通过整合院校、体系以及企业资源，凝聚各种社会力量，以科技创新为抓手，以服务养殖企业为主线，组织开展下基层做调研，挖问题找方案，攻难题推技术，做培训搞帮扶，用扎实的专业知识赋能疫病防控工作。 五年来，共举办蛋鸡疫病防控技术培训12 次，团队成员讲座20 人次，为蛋鸡产业培训技术及管理人员1400 余人， 为30 个蛋鸡场开展技术服务，到企业现场进行技术指导100多次，真诚地服务每一家养殖企业，既提升了企业蛋鸡养殖水平， 也为河北省蛋鸡疾病防控奠定了基石。

科研攻关破难题 护航蛋鸡健康养殖

丹心未泯创新愿， 白发犹残求是辉。 五年来，李佩国带领团队积极投身科研攻关工作中，发扬求真务实的精神， 为蛋鸡疫病防控工作保驾护航。

一是对种鸡场垂直传播疾病进行系统研究

河北省种禽企业的规模及管理水平存在较大差距，一些垂直传播疾病时有发生，尤其是地方品种的鸡白痢和禽白血病等胚传疾病的发病率较高，必须采取有效的净化措施。 李佩国团队根据河北省种鸡场的养殖现状研究制订了河北省地方标准 “蛋种鸡场禽白血病的净化技术规程”、“种鸡场鸡白痢净化技术规程”， 并在河北省不同地区的试验站进行推广。

禽白血病的防控除采取有效净化外， 还要将生产系统中各环节有机结合起来， 构建科学的防控体系， 其中开发针对该病毒的有效疫苗是避免禽白血病病毒早期感染， 加快禽白血病净化进程的有效途径。 李佩国带领团队以分离的禽白血病流行亚群ALV-J 为材料，进行了“河北地区ALV-J gp85 原核、真核表达构建及免疫保护力评价， 初步研发出具有一定免疫效果的禽白血病核酸疫苗， 为禽白血病核酸疫苗的开发与应用提供科学依据。

白痢沙门菌为典型胞内寄生菌， 机体清除其感染要同时依赖于细胞免疫和体液免疫，因此减毒弱疫苗白痢沙门菌疫苗是开发的主要方向。 李佩国团队借鉴医学上伤寒沙门菌及其他病原菌疫苗开发经验， 选取白痢沙门菌上重要的毒力相关基因cpxR、htrA 和wzxE 作为研究对象， 利用λ-同源重组技术对白痢沙门菌的cpxR、htrA 和wzxE 等基因进行了敲除， 构建出鸡白痢沙门菌cpxR、htrA 和wzxE 等基因缺失菌株疫苗，并对其与细菌抗应激、蛋清存活、LPS 合成及细菌致病力间的密切关系等方面进行生物学特性进行分析， 为开发安全有效的沙门菌疫苗奠定了基础。

二是对新发病进行系统研究

安卡拉病是由I 亚群血清4 型禽腺病毒引起的一种新型鸡传染病， 容易与其他疾病混合感染，临床很难确诊。 而实验室诊断大多操作复杂、费时，不便于基层推广应用。 基于以上原因，李佩国团队选择临床采集的安卡拉阳性血清和实验室保存的SPF 阴性血清，利用纯化的GSThexon 重组蛋白作为包被抗原，通过摸索抗原稀释度、一抗血清稀释度、包被条件、酶标二抗稀释度、避光显色时间等条件，建立的安卡拉病毒Hexon 蛋白间接ELISA 检测方法，具有很好的重复性、特异性、敏感性，作为快速诊断安卡拉病毒的重要手段，具有较好的应用价值。

为了更好地对鸡安卡拉病进行防控， 李佩国团队还构建了鸡安卡拉病毒Hexon-Penton 串联重组核酸疫苗，具有很好的免疫效果，为安卡拉病毒亚单位疫苗的应用提供支撑。 同时选取了连翘、鱼腥草、板蓝根等8 种抗病毒中草药进行了体内外抗FAdV-4 的研究， 通过CPE 观察和CCK-8 检测初步筛选出抗FAdV-4 的有效中草药，选取3 种不同的作用方式（中草药对病毒的直接杀伤、中草药对病毒的吸附阻断、中草药对病毒的复制阻断） 确定了中草药抗病毒的有效抑制率，研究了中草药在体外抗病毒的机制。团队在2019 年制定了河北省地方标准“鸡安卡拉病防治技术规程”，并在河北省不同地区的试验站进行推广。

三是对蛋鸡常发疾病进行研究

针对河北省蛋鸡多发的主要疫病鸡传染性支气管炎，该病传播速度快、发病率高，影响养禽业的健康发展。 传染性支气管炎病毒（IBV）的基因组易发生变异和重组， 导致其基因型和血清型众多，且交叉保护力弱，不同地区或者同一地区的基因型都可能出现较大差别， 为了解河北省传染性支气管炎病毒流行毒株情况， 团队对不同地区进行临床样本采集并检测， 并分离毒株进行全基因组测序，对IBV 的基因型、同源性进行分析， 结果显示， 我省IBV 流行毒株与LX4 型的QX 株相似性的最高。团队还检测了河北省IBV 流行株的致病性， 并评估了常用商品疫苗H120、QX 和4/91 对我省IBV 流行毒株的保护效果， 为河北省蛋鸡养殖企业选择适合的疫苗提供帮助。

团队还通过河北地区蛋鸡IBV 流行毒株建立了IBV 的ELISA 检测方法， 可作为快速诊断和免疫检测IBV 的重要手段， 具有较好的应用价值。

团队利用河北地区蛋鸡IBV 流行毒株研发了灭活疫苗，经测定安全无毒性，稳定性好，免疫攻毒试验显示，IBV 灭活疫苗免疫后可产生较高的抗体水平，且对同株产生很好的保护效果，将为河北省蛋鸡传染性支气管炎的防控提供帮助。

同时建立了细胞病变模型， 以原代鸡胚肾（CEK） 细胞为宿主， 通过观察细胞病变效应（CPE）、细胞计数（CCK-8）计算有效抑制率，再结合实时荧光定量RT-PCR 法检测IBV 核衣壳蛋白（N）基因的mRNA 相对表达量，三者方法结合起来，根据结果评估药物体外抗IBV 效果，研究结果表明连翘酯苷A 抗河北QX 型IBV 的效果良好，为开发新型、有效的抗IBV 中药药物奠定基础。

针对河北省蛋鸡多发的主要疫病鸡大肠杆菌病， 团队每年都从不同地区进行临床样本采集并分离菌株，并进行了系统研究，通过对分离菌株进行血清型、致病力、耐药性、耐药基因、毒力基因等检测，摸清了优势菌株流行规律，掌握不同地区大肠杆菌的耐药谱及耐药变化情况，为不同地区防控鸡大肠杆菌病提够帮助。

同时， 团队还进行了防治鸡大肠杆菌复方中草药的筛选，通过人工感染动物试验，筛选出了具有一定防治效果的复方中草药超微粉，并在一些蛋鸡场进行应用， 在一定阶段可作为抗生素的替代品，减少抗生素的使用。

鸡球虫病是一种严重危害养鸡业的主要寄生虫病，该病分布广泛，感染率、死亡率高，病愈后雏鸡生长长期受阻，产蛋性能下降，给养鸡业带来巨大经济损失。 防止球虫病最常用的是药物防治和活疫苗， 但是两者都伴随着一定的风险与局限性。 为此李佩国团队研发出了鸡球虫新型核酸疫苗。 一是构建了柔嫩艾美耳球虫（E.tenella）河北株卡介苗活载体疫苗。 二是研发柔嫩艾美耳球虫AMA-1、SO7 基因疫苗。研究克隆了E.tenella HB 株AMA-1 基因与SO7 基因分别与IL-2 和pPIC9 串联， 构建了免疫调节型真核表达载体GS115-pPIC9-IL-2-AMA-1、GS115-pPIC9-IL-2-SO7 并进行蛋白表达，用纯化后的重组蛋白IL-2-AMA-1 及IL-2-SO7 对进行免疫保护性试验， 均达到了良好的抗球虫效果，综合评价其抗球虫效果、免疫原性和抗氧化能力， 为柔嫩艾美耳球虫核酸疫苗的应用提供依据。

除了针对主要疾病进行研究， 在指导蛋鸡用药安全与免疫操作技术规程上， 李佩国团队也做了深入的分析与研究。 养殖生产中，存在药物品种、剂量和使用疗程的盲目性，造成药物用量大、防治效果差，污染环境。 也存在免疫程序不科学，疫苗使用呈现“三多一大”现象，致使蛋鸡长期处于应激状态，免疫器官不堪重负，产生免疫抑制或麻痹，导致免疫无应答。 为了有效防治细菌性和支原体疾病，规范免疫程序，保证畜产品安全，团队组织编写了蛋鸡安全用药手册，制定并颁布实施了河北省地方标准 “鸡免疫操作技术规程”，并在沿海、冀东等试验站30 个养鸡场推广应用。

四是建立了蛋鸡痛风快速诊断方法

鸡痛风病主要是通过临床表现和病理剖检变化进行初步诊断，不能对其进行早期诊断，为此， 本研究通过使用双氯芬酸钠药物建立成年蛋鸡的痛风病理模型， 确定发生鸡痛风时的尿酸临界值，借助人痛风病快速诊断原理，通过尿酸干化学试验， 研发出可以快速准确诊断鸡痛风病的尿酸干化学试纸条，具有较好的特异性、重复性、敏感性，可在临床上推广及应用。

推广创新成果 助推蛋鸡产业发展

五年期间， 李佩国率领团队在河北省不同地区试验站的示范场积极开展蛋鸡疫病检测与防控技术的推广工作。 “任何科技创新成果只有落地实施推广应用并产生作用， 才能真正展现价值。 ” 李佩国告诉记者，“我们的科研创新成果——种鸡场鸡白痢和禽白血病的净化技术、建立的诊断方法、 鸡场用药和免疫操作技术规程都得到了不同程度地推广应用， 并取得了良好的效果。 ”

据李佩国介绍， 其团队先后对秦皇岛都山金牧种禽科技有限公司、 张家口市绿色田园禽业科技有限公司、 赞皇县天然农产品开发有限公司、河北大午农牧集团种禽科技有限公司、天凯牧业种禽有限公司、 来源六旺川养殖有限公司、石家庄宝丰种鸡场、河北滦平华都食品有限公司种鸡场、河北三兴家禽育种有限公司、河北华裕家禽育种公司、沧州志华种鸡场等11 个种鸡场调研， 选择了6 个示范场开展种鸡鸡白痢与禽白血病的检测与净化技术的推广， 涉及种鸡100 万套，五年来，对6 个示范场采集蛋清或肛拭子样本共8862 份，进行ALV-P27 抗原和鸡白痢的检测。 发现国外引进品种海兰褐和国内自主培育的大午金凤、大午小金凤、京白939、农大3 号、北农1 号、农大3 号等品种的鸡白痢和禽白血病的检出率均较低，其中鸡白痢的年检出率为0～0.32%， 禽白血病的年检出率为0～1.25%， 其中大午家禽育种公司种对鸡禽白血病和鸡白痢净化保持较好；而地方品种太行鸡和坝上长尾鸡的鸡白痢和禽白血病的检出率相对较高，且逐年下降。

建立的禽传染性支气管炎和鸡安卡拉病的ELISA 检测方法及禽痛风快速诊断方法在秦皇岛、唐山、沧州、石家庄等地区30 个商品蛋鸡场推广应用， 三种方法具有很好的特异性、 重复性、敏感性，提高了疾病诊断水平。

编制的蛋鸡安全用药手册和鸡免疫操作技术规程在秦皇岛、唐山、沧州、石家庄等地区30个商品蛋鸡场推广应用， 指导养鸡场正确使用药物，进一步提升了鸡场免疫操作的技术水平，提高鸡只免疫效果， 对养鸡业健康发展起到积极的推动作用。

发挥技术优势 着力提升产业脱贫实效

脱贫攻坚战全面胜利后， 做好巩固拓展脱贫攻坚成果同乡村振兴有效衔接， 是习近平总书记做出的重大决策部署。 为此，团队成员持续深入青龙县、涞源县、南皮县开展产业技术扶贫工作，通过实地调研指导、电话咨询、举办培训会、 赠送兽药等方式， 协调青龙前岭养殖合作社、秦皇岛都山金牧种禽科技有限公司、来源六旺川养殖合作社和沧州市泽丰禽业有限公司解决贫困户的就业问题， 为贫困户脱贫提供基础保障。 另一方面，就当地蛋鸡养殖户，通过建立联合体，为养殖户提供优质鸡苗、饲料和相关技术，并在鸡舍建设上提供方案，大大降低了养殖户的风险，使养户达到少投入，多获利的目的，做到了真正的精准扶贫，直接带动1000 余贫困户增收。 此外，李佩国团队常年为秦皇岛、唐山及周边地区进行疾病检测与技术服务， 为养鸡场提供药物敏感检测和禽流感H5、H7、H9 和新城疫抗体效价的监测服务，五年来，共进行药敏检测950 次，抗体检测10500 份，解决了蛋鸡养殖企业疫病诊断、免疫、用药等生产实际问题。

厚积薄发破难攻坚，匠心履职勇攀高峰。 五年来， 李佩国带领团队始终立足于蛋鸡养殖企业，致力于维护蛋鸡产业健康发展，孜孜不倦地奋斗在蛋鸡疫病防控路上，初心不悔，矢志不渝……