禽偏肺病毒对种鸭影响及治疗体会

任年旭，张中波，刘洁，张东渺，马元元，林正美，姜媛，杜永振，汪建华，李玉峰

（1.山东和康源生物育种股份有限公司，山东济南 250101；2.山东省农业科学院家禽研究所，山东济南 250100）

1 前言

禽偏肺病毒在分类学上属副黏病毒科（Paramyxoviridae）、 肺病毒亚科（Pneumovirinae）的偏肺病毒属（Metapneumovirus）[1]。 主要感染火鸡和鸡。 偏肺病毒感染在临床上主要以呼吸道症状为主，并出现咳嗽、流鼻液、肿头以及产蛋下降等症状。 Sun 等在2014 年报道了我国南方的种番鸭暴发C 亚型禽偏肺病毒感染引起严重的产蛋下降，之后陆续有从水禽中检出禽偏肺病毒的报道[1]。 有报道称，法国番鸭发生了与C 亚型类似的病毒病， 但该病毒与C 亚型病毒的遗传谱系不同，发病鸭表现为呼吸道症状和产蛋下降[2]。 禽偏肺病毒感染一般在春季（3～4 月）和冬季（10～12 月）多发，种鸭在20～30 周的开产前期和开产爬坡期易感染，并混感大肠杆菌。

2 材料和方法

2.1 材料

2.1.1 检测动物及病料

山东省泰安市、济南市，河北省沧州市某父母代种鸭场的病鸭。

2.1.2 样品采集

使用无菌棉签擦取有咳嗽症状种鸭的喉头表面或鼻腔分泌物、排泄物拭子，放入装有无菌生理盐水离心管中。 并摘取病死鸭的肺、 气管、肝脏、脾脏、盲肠扁桃体装入自封袋。

2.2 方法

2.2.1 样品处理

病料处理 取处理好的病料， 剪碎放入灭菌的研磨器中，按1∶3～1∶5 的比例加入灭菌PBS（加双抗，终浓度3000～5000 单位/毫升），研磨好后反复冻融3 次，8000 转/分钟离心10 分钟，取上清液备用，并将样品编号。

拭子处理，置于含灭菌PBS（加双抗，终浓度3000～5000 单位/毫升）的EP 管中，制成悬液，反复剧烈震荡，8000 转分钟离心10 分钟， 取上清备用。

2.2.2 病毒分离

将制备的上清液， 经0.45 微米滤膜过滤除菌， 卵黄囊接种6～8 日龄SPF 鸡胚或非免疫健康鸡胚，0.2 毫升/胚，37℃孵育， 弃去24 小时内死胚，继续观察8～10 天。 若不致死鸡胚，则取48～96 小时尿囊液盲传2～3 代， 观察鸡胚病变，收获病变严重的尿囊液。

2.2.3 病毒的鉴定

禽偏肺病毒是单链RNA， 鉴定用RT-PCR的方法。

禽偏肺病毒引物序列 （退火温度53℃，580bp）：

P1：GCAGCTGAAGTAGGAATGCAGTA

P2：CCTGCACCATAAGCTTGCA

2.2.4 结果判定

禽偏肺病毒RT-PCR 扩增可以得到580bp大小的片段，扩增到目的片段则判定相应的病料为阳性。

2.2.5 细菌的分离与鉴定

取出密封袋中肝脏，点燃酒精灯，灼烧吊菌环，迅速插到肝脏内，无菌采取采集肝脏组织于麦康凯琼脂培养基、Baird-Parker 琼脂培养基分别划线5 个区域， 划线分离，37℃培养24 小时，观察菌落生长情况。

3 结果与分析

3.1 临床症状及大体剖检观察

禽偏肺病毒感染临床症状表现为咳嗽、流鼻涕。 大体解剖可见气管环出血，心肌出血（图1A），喉头气管有黏液（图1B），鼻窦有黏液，腹膜炎（图1C），输卵管堵塞（图1D）。

图1 病鸭大体剖检病变

3.2 细菌分离与鉴定

将肝脏组织接种在麦康凯琼脂培养基、Baird-Parker 琼脂培养基上，并在37℃温箱培养24 小时， 可观察到麦康凯琼脂培养基5 个区域分别都有大量红色菌落，Baird-Parker 琼脂培养基未观察到任何菌落生长。说明病鸭感染大肠杆菌，未感染葡萄球菌。

3.3 病毒PCR 检测结果

将PCR 扩增产物进行1.2%琼脂糖凝胶电泳，结果显示，被检5 个样品中，有1 只为偏肺病毒阳性，结果见图2。

图2 病鸭PCR 检测结果

3.4 偏肺病毒对种鸭产蛋率影响及分析

养殖场1、2、4 种鸭分别在25、26、28 周产蛋爬坡期感染病毒，出现呼吸道症状，并出现产蛋率下降，降蛋幅度在10%～20%(见图3)。 由于发病周期较长， 且混感大肠杆菌导致产蛋率无高峰，未达到90%。 养殖场3 在20 周产蛋前发病，发病周期较短，控制较早，产蛋率可以达到高峰。

图3 感染偏肺病毒对种鸭产蛋率变化图

4 结论与分析

根据解剖症状，PCR 检测和细菌分离鉴定，确诊为禽偏肺病毒感染并混感大肠杆菌，导致种鸭出现呼吸道症状，并影响种鸭产蛋率。 根据发病情况调查，禽偏肺病毒感染主要在春季（3～4月）和冬季（10～12 月）以及20～30 周处于开产前期和开产爬坡期的种鸭多发， 并混感大肠杆菌。导致种鸭出现输卵管炎、腹膜炎等临床症状，破坏种鸭生殖系统， 使鸭群产蛋高峰期产蛋率低于90%，造成产蛋无高峰。

5 治疗与防控

通过进行剖检观察、 细菌分离鉴定和PCR病毒检测，该养殖场种鸭出现呼吸道症状，产蛋率下降的主要原因是禽偏肺病毒和大肠杆菌混感。 根据诊断结果，使用抗病毒药加抗生素的原则进行治疗[3]。 使用抗生素可以减轻细菌继发感染进而降低疾病的严重性[4]。 根据药敏试验结果，选用多西环素治疗，连用5 天，并配合使用治疗呼吸道的中药。 用药治疗后产蛋率上升、呼吸道症状减少、死淘率恢复正常。

虽然尚未见有关鸭偏肺病毒感染免疫预防的报道， 但火鸡和鸡的疫苗免疫和免疫研究值得借鉴[1]。 在饲养环境方面，改善鸭舍环境通风，使用刺激较小的消毒药带鸭消毒， 每天消毒2次，减少病原并预防鸭群间的互相传染。

6 讨论

禽偏肺病毒感染主要引起产蛋鸭呼吸道症状、 产蛋率下降， 混感大肠杆菌会造成输卵管炎、腹膜炎等症状，导致鸭群产蛋率无高峰。 根据禽偏肺病毒的基因序列特征可将其划分为A、B、C、D 4 个亚型[4]。 通过基因测序公司检测4次偏肺病毒阳性，均为C 亚型。 法国1999 年番鸭源C 亚型禽肺病毒分离株Fr-AMPV-C 的基因组全长为14152bp。我国番鸭源C 亚型偏肺病毒S-01 的基因组全长约14079bp, 与国外报道的C 亚型禽偏肺病毒全基因组序列同源性为92.3%～94.3%[1]。

禽偏肺病毒可通过病禽、水源、流动人员和设备等媒介发生水平传播， 也有空气和垂直传播的可能，饲养密度过高、通风不良、温控不合理、卫生条件差等都可诱发[5]。 目前，关于禽偏肺病毒对种鸭的影响研究较少， 预防措施主要包括易感季节加强饲养管理， 必要时使用营养药增强鸭群抵抗力， 及时使用抗生素减少混感细菌病，降低细菌对种鸭生殖系统的危害。