血清miR-140-3p、sLOX-1对急性STEMI患者PCI术后支架内再狭窄的预测能效

陈愿，赵子明，崔留义，马翔宇，沈蕾

急性ST段抬高型心肌梗死（ASTEMI）是指具有典型缺血性心绞痛和ST段抬高的急性心肌梗死，为冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）的严重类型，也是患者致死致残的主要原因[1]。因溶栓适应症条件限制，经皮冠状动脉介入治疗（PCI）成为ASTEMI患者疏通狭窄或闭塞冠状动脉管腔、改善心肌血流灌注的主要方法[2]。但相关统计显示，PCI术后即使规范用药仍有较高几率出现支架内再狭窄，严重影响患者预后，因此有必要对PCI术后支架内再狭窄进行早期预测，从而指导临床治疗。研究表明，新生动脉粥样硬化（AS）是支架内再狭窄和支架晚期治疗失败最为重要的病理机制之一[3]。近年来研究证实，微小RNA（miRNA）参与了多种细胞因子转录调控，其中miR-140-3p存在于编码E3泛素连接酶WWP2基因的内含子中，并在内含子剪切的过程导出。Zhu等[4]研究发现miR-140-3p在动脉粥样硬化血管和氧化应激损伤的内皮细胞中显著下调，并能够通过上调C-Myb和B淋巴细胞瘤-2基因改善AS。凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1（LOX-1）是一种Ⅱ型糖蛋白，通过影响内皮细胞功能、促进平滑肌细胞迁移等过程参与AS发生和发展，可溶性LOX-1（sLOX-1）为LOX-1经蛋白酶水解释放，反映LOX-1的表达情况[5]。本研究旨在分析血清miR-140-3p、sLOX-1水平对ASTEMI患者PCI术后支架再狭窄的预测价值，以期为PCI术后支架再狭窄的防治提供参考。

1 资料与方法

1.1 研究对象选取2019年1月～2021年1月于郑州市第七人民医院心内科收治的247例接受PCI的ASTEMI患者，其中男性147例，女性100例；年龄42～80岁，平均年龄（61.16±8.49）岁；体质指数（BMI）18～26 kg/m2，平均BMI（23.24±2.07）kg/m2；病史：糖尿病77例、高血压98例、脑卒中19例；病变支数：单支病变56例、双支病变100例、多支病变91例；急诊PCI156例，择期PCI91例。纳入标准：①符合《急性ST段抬高型心肌梗死诊断和治疗指南》[6]诊断标准；②且接受PCI；③病理资料完整，可接受随访者；④患者及家属均知情研究。排除标准：①合并肝、肾等重要脏器严重功能障碍者；②造血、免疫系统疾病者；③恶性肿瘤疾病者；④既往PCI史；⑤合并全身急慢性感染性疾病者。本研究经医院伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1 基础资料收集收集患者性别、年龄、体质指数、吸烟饮酒史、病史、病变支数、PCI术式、支架数量、支架内径、支架长度、药物使用情况、Gensini积分[7]和基线血脂四项[血清总胆固醇（TC），三酰甘油（TG），高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C），低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）]、血糖、超敏C反应蛋白（hs-CRP）水平（迈瑞BS-180全自动生化分析仪测定）。左心室射血分数（LVEF）由DW-PE582彩色多普勒超声诊断仪测定。

1.2.2 血清miR-140-3p、sLOX-1水平测定PCI后次日清晨采集患者空腹静脉血6 ml，3000 r/min离心10 min（半径15 cm），取上清分置两份。一份通过酶联免疫吸附法（北京百奥莱博科技有限公司提供，编号：ARB10414）检测血清sLOX-1水平；一份使用总RNA提取试剂盒（北京索莱宝科技有限公司，编号：R1200）提取血清总RNA，逆转录试剂盒（北京智杰方远科技有限公司，编号：RR036A）转录合成cDNA，加入miR-140-3p引物（上游引物：5’-ACACTCCA GCTGGGAGGCGGGGCGCCGCGGGA-3’；下游引物：5’-CTCAACTGGTGTCGTGGA-3’）混匀，进行PCR扩增，以U6做内参（上游引物：5’-CTCGCTTCGGCAGCACA-3’；下游引物：5’-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3’），扩增条件：95 ℃ 10 min、95 ℃ 15 s、60 ℃ 60 s，循环40次，反应结束后得到各管Ct，2-ΔΔCt法计算miR-140-3p相对表达量。

1.2.3 支架内再狭窄标准支架内再狭窄定义为冠状动脉造影证实支架两端和/或全程5 mm节段内管腔丢失，管腔狭窄程度≥50%[7]。所有患者入院后由同一介入团队进行PCI，术后均随访1年，根据是否发生支架内再狭窄分为再狭窄组和无再狭窄组。

1.3 统计学方法采用SPSS 26.0统计学软件，计数资料以例数（百分比）表示，两组间比较采用χ2或Fisher检验；正态分布计量资料以均数±标准差（±s）表示，两组间比较采用t检验；多因素Logistics回归分析ASTEMI患者PCI术后支架内再狭窄影响因素；ROC曲线判断血清miR-140-3p、sLOX-1水平对ASTEMI患者PCI术后支架内再狭窄的预测价值，曲线下面积（AUC）采用Z检验；P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 ASTEMI患者PCI术后支架内再狭窄影响因素的单因素分析随访1年，247例患者共出现38例支架内再狭窄，发生率为15.38%（38/247）。单因素分析显示，再狭窄组HDL-C、LVEF、支架内径、miR-140-3p水平明显低于无再狭窄组（P＜0.05），支架长度、FBG、hs-CRP、sLOX-1水平明显高于无再狭窄组（P＜0.05）；两组患者性别、年龄、BMI、吸烟史、饮酒史、病史、病变支数、TC、TG、LDL-C、支架数量、药物使用情况比较差异均无统计学意义（P＞0.05），表1。

表1 ASTEMI患者PCI术后支架内再狭窄影响因素的单因素分析

2.2 ASTEMI患者PCI术后支架内再狭窄影响因素的多因素Logistics回归分析以HDL-C、hs-CRP、FBG、LVEF、急诊PCI（是=1，否=0）、支架内径、支架长度、Gensini积分、sLOX-1、miR-140-3p为自变量，PCI术后是否支架内再狭窄（是=1，否=0）为因变量，多因素Logistics回归分析显示，hs-CRP、急诊PCI、支架内径、miR-140-3p为ASTEMI患者PCI术后支架内再狭窄独立保护因素，Gensini积分、sLOX-1为独立危险因素（P＜0.05），表2。

表2 ASTEMI患者PCI术后支架内再狭窄影响因素的多因素Logistics回归分析

2.3 血清miR-140-3p、sLOX-1水平对ASTEMI患者PCI术后支架内再狭窄的预测价值ROC曲线显示，miR-140-3p联合sLOX-1预测ASTEMI患者PCI术后支架内再狭窄的AUC为0.892，明显大于miR-140-3p、sLOX-1单独预测的0.791、0.784（Z=3.586、3.500，P＜0.001）。miR-140-3p联合sLOX-1预测ASTEMI患者PCI术后支架内再狭窄的敏感度、特异度、准确度分别为81.58%、85.65%、85.02%，图1及表3。

图1 血清miR-140-3p、sLOX-1水平预测ASTEMI患者PCI术后支架内再狭窄的ROC曲线

3 讨论

急性ST段抬高型心肌梗死（ASTEMI）是临床常见心血管急症，在全球范围内具有极高的致残和致死风险。目前，随着区域协同救治体系的逐渐完善，ASTEMI死亡率大幅度降低，但PCI术后支架内再狭窄仍然是一个难题，严重影响患者治疗效果和远期预后。新生动脉粥样硬化（AS）是一种潜在致命性的病理过程，指支架术后新生内膜组织中迅速聚集富含泡沫的巨噬细胞，伴或不伴钙化和（或）坏死核心，是多因素多机制共同参与的过程，慢性炎症、内皮功能障碍、平滑肌细胞增殖等在其中发挥重要作用[9]。

微小RNA（miRNA）是一组非编码小分子RNA，通过抑制靶miRNA翻译在转录后水平调控基因表达[10]。近年研究表明，部分miRNAs在保护心肌细胞和维持内皮细胞功能方面发挥重要作用，且在循环系统中具备高度稳定性，因此被认为是心血管疾病的理想生物标志物[11]。miR-140基因位于染色体17p13.1上，早期下肢动脉硬化闭塞症miRNA芯片和RT-PCR芯片分析发现，下肢动脉硬化闭塞症组织中miR-140-3p表达显著下调[12]。张海涛等[13]通过基因芯片分析也发现，ASTEMI患者外周血外泌体中miR-140-3p表达显著下调。本研究发现，再狭窄组血清miR-140-3p水平明显降低，且miR-140-3p为PCI术后支架内再狭窄的独立保护因素，说明高血清miR-140-3p水平有利于预防PCI术后支架内再狭窄发生，但尚不明确其保护机制。血管平滑肌细胞增殖和凋亡是AS发生发展的关键因素[14]。Zhu等[4]研究发现，将miR-140-3p模拟物转染至血管平滑肌细胞中，能减弱血小板源性生长因子BB诱导的血管平滑肌细胞增殖和凋亡，抑制支架内再狭窄。生物信息学分析显示，miR-140-3p是Toll样受体4的上游miRNAs之一，具有负向调控作用。已有研究证实[15]，Toll样受体4可通过损伤内皮功能和增强系统炎性反应促进支架内再狭窄发生。因此我们推测miR-140-3p可能通过负向调控Toll样受体4和抑制血管平滑肌细胞增殖、凋亡发挥支架内再狭窄保护作用。

氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）是AS发生和发展过程中重要参与者，其可通过结合巨噬细胞表面清道夫受体形成巨噬细胞源性泡沫细胞，使泡沫细胞坏死崩解，促进AS形成并加速破裂[16]。凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1（LOX-1）为血管内皮细胞摄取ox-LDL主要受体，参与ox-LDL结合、内吞、蛋白降解等过程[17]。研究表明，LOX-1能促进泡沫细胞形成和加重内皮细胞功能损伤促进AS形成[18]。大量研究显示[19,20]，血清sLOX-1水平与冠心病患者AS形成、血管内皮损伤、冠状动脉慢血流、心肌缺血等密切相关，但关于sLOX-1是否参与PCI术后支架内再狭窄尚不明确。本研究结果显示，再狭窄组血清sLOX-1水平明显高于无再狭窄组，且再狭窄组血清FBG和hs-CRP水平明显高于无再狭窄组，推测血清高sLOX-1水平与再狭窄患者机体炎症反应和血糖水平较高促进sLOX-1分泌有关。排除其他影响因素后，高血清sLOX-1水平仍然是ASTEMI患者PCI术后支架内再狭窄独立危险因素，提示高血清sLOX-1水平可能通过促进AS形成参与PCI术后支架内再狭窄。此外本研究结果还显示，急诊PCI、支架内径、Gensini积分为ASTEMI患者PCI术后支架内再狭窄独立影响因素，考虑与急诊PCI患者发病至入院时间更短，心肌损伤更小有关；较大支架内径血管直径更大，不易发生血流堵塞；Gensini积分是评估冠脉病变狭窄程度积分，分值越大反映冠脉病变狭窄程度越高，说明ASTEMI患者病情越严重，PCI术后支架内再狭窄风险高。ROC曲线显示，血清miR-140-3p、sLOX-1水平均对ASTEMI患者PCI术后支架内再狭窄具有一定预测价值，且miR-140-3p联合sLOX-1预测AUC显著提升，敏感度、特异度、准确度为81.58%、85.65%、85.02%，说明联合检测血清miR-140-3p、sLOX-1水平可提升支架内再狭窄预测价值。

综上所述，PCI术后支架内再狭窄ASTEMI患者血清miR-140-3p水平明显降低，sLOX-1水平明显提升，两者均为支架内再狭窄独立影响因素，均对支架内再狭窄具有一定预测价值，联合预测价值更高。但本研究为单中心研究，且研究仅限于PCI术前血清miR-140-3p、sLOX-1水平，没有动态观察随访期间血清指标变化，还需多中心大样本研究验证。