艽龙胶囊对胃肠动力障碍小鼠的影响

林文明 陈晓艳 陈贵娥 孙阳 刘铁明 董明芝 李宇华,

(1.中国人民解放军南部战区海军第一医院药剂科，广东 湛江 524005；2.空军军医大学药理学教研室/国家中药胃肠药理重点实验室，陕西 西安710032；3.西安正大制药有限公司，陕西 西安 710032)

胃肠动力障碍是功能性消化不良(FD)的主要病理生理基础[1]。临床上对胃肠动力障碍的治疗主要以促动力药、助消化药、抑酸药、抗幽门螺杆菌药物等为主；近些年来，中医药在治疗胃肠动力障碍上疗效确切、不良反应小，故在临床上应用广泛[2]。艽龙胶囊的有效成分为中药秦艽中提取的龙胆总苷，具有清肝泄热之功效，临床上用于功能性消化不良属肝胃郁热证者，疗效显著，不良反应少[3]。本文旨在探讨艽龙胶囊对小鼠胃肠动力的影响，为临床治疗提供新的思路。

1 材料与方法

1.1动物与药物 昆明种小鼠60只(雌雄各半，雌性未孕)，体质量20～25 g，由空军军医大学实验动物中心提供，动物合格证号为SCXK(军)2015-0007。艽龙胶囊，0.08 g/粒(西安正大制药有限公司，批号160202)；多潘立酮片(吗丁啉)，10 mg/片(西安杨森制药有限公司，批号：151203)。

1.2试剂与仪器 盐酸左旋精氨酸(北京拜尔迪生物技术有限公司，批号150905)，活性碳(成都市科龙化工试剂厂，批号20061030)，血浆胃动素EILISA测定试剂盒(上海索莱宝生物科技有限公司，批号DRE30082)，血管活性肠肽EILISA测定试剂盒(上海索莱宝生物科技有限公司，批号DRE30543)，NO试剂盒(上海索莱宝生物科技有限公司，批号DRE30105)；电子天平(ME204，METTLER公司)、光学显微镜(Nikon H600L，日本Nikon公司)、酶联免疫检测仪、低速台式离心机。半固体营养糊的配制：羧甲基纤维素钠10 g溶于250 mL蒸馏水中，分别加入蔗糖12 g、奶粉16 g、淀粉10 g，搅拌均匀后，加入活性炭末2 g，配制成300 mL的黑色半固体糊，4℃冰箱储存，用前取出恢复至室温。

1.3方法 将60只昆明小鼠适应性饲养3 d后，随机分为空白对照组、模型对照组、吗丁啉对照组、艽龙胶囊低、中、高3个剂量组(30 mg/kg、60 mg/kg、120 mg/kg)，每组10只，雌雄各半。从实验第1天开始，空白对照组和模型对照组给予蒸馏水，10 ml/kg灌胃，1次/d，连续7 d；吗丁啉对照组1.4 mg/kg给药，1次/d，连续7 d；艽龙胶囊分别按30 mg/kg、60 mg/kg、120 mg/kg给药，1次/d，连续7 d。胃肠动力模型复制参照李琼等[4]实验方法基础上改良，即模型组及各给药组在实验第4天以1.5 g/kg剂量腹腔注射左旋精氨酸注射液，第5、6、7天腹腔注射左旋精氨酸注射液0.75 g/kg复制胃肠动力障碍模型，每日先腹腔注射左旋精氨酸1 h后灌胃给药。

1.4观察指标 一般情况观察：动物生长状况、粪便性状、被毛色泽、自主活动、行为活动。平均体质量和平均摄食量观察。胃肠运动功能的测定：于给药第6天晚上，禁食不禁饮水，次日腹腔注射左旋精氨酸1 h后给药，1 h后按0.8 mL/只灌胃半固体营养糊，15 min后麻醉动物，打开腹腔，腹主动脉采血，肝素抗凝，收集血浆，按以下方法取样并计算小鼠胃内残留率和小肠推进率。(1)胃内残留率：结扎贲门部和幽门下端，取出胃，用生理盐水冲洗胃表面的血渍，称全重，然后沿胃大弯剪开胃体，洗去胃内容物后在滤纸上擦干，称重，计算胃内残留率(%) =胃全重(g)-胃净重(g)/炭末混悬液灌胃总质量(g) ×100%。(2)小肠推进率：摘取小肠管：上端至幽门下端，下端至回盲部；测量小肠全长和半固体糊在小肠中的推进距离，计算小肠推进率(%) =幽门部到炭末前沿的长度(cm)/小肠总长度(cm) ×100%。分离血浆生化指标：4℃，2 000 r/min，离心15 min，收集血浆，置于-80℃保存；按照试剂盒要求进行血浆胃动素(MTL)和一氧化氮(NO)测定。

2 结 果

2.1一般情况观察 在给予左旋精氨酸注射液前，正常组、模型组及各给药组小鼠未见活动异常、粪便异常及毛色改变，当在第5天，第二次给药左旋精氨酸注射液造模后，模型组小鼠出现毛色不光泽、毛发竖起的改变。正常组和各给药组无异常表现，均未出现死亡小鼠。

2.2平均体重和平均摄食量观察 小鼠体质量在第4天给予左旋精氨酸后，模型组小鼠体重在造模后表现为下降趋势，艽龙胶囊各给药组及吗丁啉组小鼠体重无明显下降，由此表明，艽龙胶囊和吗丁啉显著改善小鼠胃肠动力功能，减缓小鼠体重下降(见图1)。小鼠摄食量在给予左旋精氨酸注射液造模后，与模型组比较，给药组摄食量均呈上升趋势。其中艽龙胶囊高剂量组小鼠摄食量明显上升，与吗丁啉组小鼠摄食量基本一致，表明艽龙胶囊增加了左旋精氨酸诱导的胃肠动力障碍小鼠摄食量，明显改善小鼠的胃肠动力功能(见图2)。

注：A.雌性小鼠体重变化；B.雄性小鼠体重变化。图1 各组小鼠体重变化图

注：A.雌性小鼠摄食量变化；B.雄性小鼠摄食量变化。图2 各组小鼠摄食量变化图

2.3胃肠运动功能的测定 与正常组比较，给予左旋精氨酸注射液造模后，模型组小鼠胃内残留率明显增加，推进率明显降低；与模型组相比，艽龙胶囊中、高剂量组胃内残留率明显降低，小肠推进率明显增加。见表1。

表1 各组小鼠胃内碳末混悬糊胃内残留率及小肠推进率比较

2.4血浆生化水平 与正常组比较，给予左旋精氨酸注射液造模后，模型组小鼠血浆中MTL含量明显降低，NO含量明显升高；与模型组相比，艽龙胶囊中高剂量组均可明显升高小鼠血浆中MTL含量和降低小鼠血浆中NO含量。见表2。

表2 各组小鼠血浆中MTL和NO含量比较

3 讨 论

FD是临床常见病和多发病，50%以上的FD患者存在胃固体排空延缓，近端胃及胃窦运动异常，幽门十二指肠运动协调失常等胃肠动力障碍的表现[5]。胃肠动力障碍受胃肠激素(如MTL)、NO及某些药物等多种因素的影响[6]。MTL、NO等神经递质的释放，对胃肠运动起兴奋或抑制作用，如果这些递质的分泌比例失调，势必导致胃的运动功能障碍[7]。MTL是由胃黏膜内分泌细胞分泌[8]，同时存在于中枢神经系统和消化系统的一种活性肽类激素，又称为“脑肠肽”，是调控胃肠运动的重要激素[9]。MTL可以使胃体、胃窦和幽门不同部位的肌细胞强烈收缩，并能诱发胃和小肠的移行性运动复合波MMCⅢ相，导致胃产生明显的收缩运动和小肠明显的分节运动，对胃排空有一定的促进作用。MTL的释放量与胃活动有着密切的关系，MTL释放减少时，胃蠕动减慢；MTL释放增加时，胃蠕动加快[10]。NO为胃肠道非肾上腺能非胆碱(NANC)能神经的主要抑制性递质之一[11]。NO是由左旋精氨酸在一氧化氮合成酶(NOS)作用下产生，NOS催化左旋精氨酸转化为瓜氨酸和NO，可调节胃肠运动[1]。有研究[6-7]证明，NO在胃底基础张力、食物进入胃生理性扩张及肠蠕动的生理性下行性抑制作用等方面均有参与，NO通过介导平滑肌来保护胃肠道黏膜的功能：NO增多，平滑肌松弛，抑制胃蠕动，从而产生动力障碍；NO减少，平滑肌收缩，增加胃蠕动，减缓消化不良的症状，并可以同时调节胃肠道的分泌功能。本实验结果显示，艽龙胶囊不仅使胃肠功能障碍小鼠的摄食量增加，胃内残留率明显降低，小肠推进率明显增加，还明显升高小鼠血浆中MTL含量和降低小鼠血浆中NO含量，表明艽龙胶囊具有明显促胃肠排空作用并改善胃肠动力功能。

艽龙胶囊是临床处方药，用于FD属肝胃郁热证者，症见胃脘饱胀、脘部烧灼、口干口苦，临床常用日剂量为0.48 g，分3次口服。有研究[12]显示，艽龙胶囊在2290例的临床试验中，发生的不良反应轻，均为不常见或罕见，主要表现为轻微的消化道自觉症状，未发生严重的不良事件，安全性评价良好。本实验主要是探究艽龙胶囊治疗功能性消化不良的机制，发掘其新的临床适应症。此外，本实验剂量设置是依据临床剂人用剂量，即：60 kg成人为0.48 g/d，约8 mg/kg， 以人与动物体表面积换算，小鼠剂量约为60 mg/kg，取其为中剂量，分别设计小剂量30 mg/kg和大剂量120 mg/kg。在本实验中，连续给予小鼠灌胃艽龙胶囊，三个剂量组均未出现死亡小鼠，其体质量、摄食量等与正常组比较无差异，一定程度上反应其毒副作用小或无。为进一步明确实验中使用剂量是否有毒副作用，我们将在后续研究中阐明。