复合型饲料添加剂对大口黑鲈生长和健康状况的影响

张 奇，杨 军，廖伟坚，李自金，郑连春，何绪刚

( 1.华中农业大学 水产学院，湖北 武汉 430070； 2.湖北省宜昌市水产技术推广站，湖北 宜昌 443000； 3.荆门市五龙饲料有限公司，湖北 荆门 448000 )

大口黑鲈(Micropterussalmoides)，属鲈形目、鲈亚目、太阳鱼科、黑鲈属，是北美重要的淡水鱼类之一[1]。20世纪70年代我国台湾从原产地引进此鱼，并于20世纪80年代引进广东，现已推广到全国各地，已成为我国重要的淡水养殖品种之一[2]。大口黑鲈属肉食性鱼类，饲喂方式上经历了投喂冰鲜杂鱼和人工配合饲料两个阶段。投喂冰鲜杂鱼的方式不仅容易造成水质污染，而且还极易带入病原细菌，故这种饲喂方式已被逐渐淘汰[3-5]。由于人工配合饲料的营养配方和加工工艺仍有不足，加之大口黑鲈具有易患脂肪肝[6]、且对碳水化合物利用效率较低[7]等固有特性，全程饲喂人工饲料易出现生长缓慢、肝脏肿大和组织坏死等不良状况[8]。

为解决上述饲喂问题，生产中已开始广泛使用各种非抗生素类功能性饲料添加剂。如单独添加一定量的黄芪多糖[9]、杜仲[10]、胆汁酸[11]、L-肉碱[12]、酵母细胞壁[13]等物质到饲料中，对水产动物的生长、免疫和抗氧化性能等有一定的促进作用。从经济效益和生物学效应的角度来看，单一型饲料添加剂作用有限，复合型饲料添加剂的研发是大势所趋[14]，而复合型饲料添加剂对大口黑鲈养殖生产的效果尚未见报道。笔者评价了复合型饲料添加剂对大口黑鲈生长、生理生化和抗氧化性能等方面的效应，旨在为大口黑鲈养殖生产中合理使用功能性饲料添加剂提供科学依据和指导。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验用大口黑鲈来自华中农业大学水产学院实训基地，选择健康活跃、规格一致的1龄大口黑鲈270尾作为试验用鱼，平均体质量为(50.42±6.42) g，平均体长为(11.09±0.30) cm。试验基础饲料、复合型饲料添加剂、功能饲料由荆门市五龙饲料有限公司提供。基础饲料主要组成：粗蛋白≥48.00%，粗脂肪≥6.00%，粗纤维≤4.00%，粗灰分≤16.00%；复合型饲料添加剂主要组成：黄芪多糖10.50%、杜仲20.00%、酵母细胞壁10.00%、胆汁酸25.00%、L-肉碱10.00%以及维生素(C、E、B6等)24.50%；功能饲料是在上述基础饲料中添加了三黄粉50%、胆汁酸30%、L-肉碱20%的等蛋白、等脂类商品化功能饲料。

1.2 试验设计

将270尾大口黑鲈进行为期2周的适应性饲养后，随机分为空白对照组(基础饲料)、试验组(基础饲料+0.01%复合型饲料添加剂)、阳性对照组(功能饲料)共3个处理组，每组3个平行，每个平行30尾，在室内循环水系统养殖8周，养殖密度3尾/m3，投饵量为体质量的1%～3%，每日8:00和17:00各喂1次，水源为曝气自来水。试验期间水温(26.5±0.30) ℃，溶解氧质量浓度高于6.40 mg/L，pH为7.56±0.15，氨氮质量浓度低于1.00 mg/L，亚硝态氮质量浓度低于0.30 mg/L，磷酸盐质量浓度低于0.80 mg/L。

1.3 样品采集与分析

饲养试验结束后，每个平行随机取5尾鱼，用氨基甲酸乙酯(乌来糖)麻醉后，迅速测定体长和体质量，然后用2.5 mL的注射器尾部静脉取血，室温静置1 h后，在转速3500 r/min(离心半径8 cm)、4 ℃条件下离心30 min，分离血清，-80 ℃保存备用。将每尾鱼解剖后分离肝脏、脾脏，并称质量，取5 g肝脏于冻存管中，液氮速冻后置于冰箱-80 ℃保存，用于肝脏抗氧化指标测定，另取1 g肝脏置于多聚甲醛中用于苏木精—伊红染色，剩余肝脏部分以及背部肌肉，置于-20 ℃冰箱保存，用于肌肉基础营养组分测定。

大口黑鲈全鱼、肌肉和肝脏采用105 ℃烘干至恒等质量的干燥法测定水分含量，马福炉550 ℃灼烧法测灰分含量，凯氏定氮法测定粗蛋白含量，索氏抽提法测定粗脂肪含量。

血清生化指标总蛋白、白蛋白、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、碱性磷酸酶采用全自动生化分析仪测定，试剂盒购自中生北控生物技术股份有限公司。肝脏抗氧化指标超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、丙二醛和总抗氧化能力采用南京建成生物工程研究所生产的试剂盒测定。

1.4 指标计算

wWGR=(m2-m1)/m1×100%

RSG=(lnm2-lnm1)/t×100%

IF=m3/(m2-m1)

CF=100mb/L3

wv=mv/mb×100%

wh=mh/mb×100%

ws=ms/mb×100%

RS=nt/n0×100%

式中，wWGR为体质量增加率(%)，RSG为特定生长率(%/d)，IF为饵料系数，CF为肥满度，wv为脏体比(%)，wh为肝体比(%)，ws为脾体比(%)，RS为成活率(%)，m1为鱼体最初平均质量(g)，m2为鱼体最终平均质量(g)，t为饲喂天数，m3为每尾鱼平均摄食饲料总质量(g)，nt为收获数量(尾)，n0为放养数量(尾)，mh为每尾鱼终末肝脏质量(g)，mv为每尾鱼终末内脏质量(g)，ms为每尾鱼终末脾脏质量(g)，mb为每尾鱼终末体质量(g)，L为每尾鱼终末体长(cm)。

1.5 数据统计分析

试验结果用平均数±标准差表示，采用SPSS 25.0软件进行单因素方差分析，利用Duncan′s多重比较进行组间显著差异分析，P<0.05为差异显著。

2 结 果

2.1 复合型饲料添加剂对大口黑鲈生长以及形体指标的影响

与空白对照组相比，试验组体质量增加率和特定生长率显著升高(P<0.05)，饵料系数、肥满度和成活率各试验组间差异不显著(P>0.05)，但试验组饵料系数有降低趋势。相比于空白对照组，试验组和阳性对照组的肝体比显著降低(P<0.05)；脏体比、脾体比各试验组间差异不显著(P>0.05)(表1)。

表1 复合型饲料添加剂对大口黑鲈生长性能的影响

2.2 复合型饲料添加剂对大口黑鲈全鱼、肌肉和肝脏营养成分的影响

各试验组全鱼和肌肉组织的营养成分均差异不显著(P>0.05)，但试验组肝脏中粗脂肪含量显著低于空白及阳性对照组(P<0.05)(图1)。

图1 复合型饲料添加剂对大口黑鲈鱼体营养组分的影响

2.3 复合型饲料添加剂对大口黑鲈血液生化指标的影响

试验组和阳性对照组谷草转氨酶、谷丙转氨酶活性显著低于空白对照组(P<0.05)，同时试验组碱性磷酸酶活性显著提高(P<0.05)；白蛋白和总蛋白质量浓度在各处理组间差异不显著(P>0.05)，但试验组相对于空白及阳性对照组有上升趋势(表2)。

表2 复合型饲料添加剂对大口黑鲈血液生化指标影响

2.4 复合型饲料添加剂对大口黑鲈肝脏抗氧化性的影响

与空白对照组相比，试验组和阳性对照组中超氧化物歧化酶、过氧化氢酶活性显著提高(P<0.05)，总抗氧化能力有所上升但差异不显著(P>0.05)；同时试验组丙二醛质量摩尔浓度相比于空白及阳性对照组显著降低(P<0.05)(表3)。

表3 复合型饲料添加剂对大口黑鲈肝脏抗氧化指标影响

2.5 复合型饲料添加剂对大口黑鲈肝脏组织学影响

肝脏形态和组织苏木精—伊红染色结果(图2)显示，投喂8周后，空白对照组肝脏组织出现了明显的黑色素巨噬细胞中心和组织炎症；阳性对照组肝细胞可见核迁移和许多空泡形成；试验组肝细胞形状较规则，细胞结构基本保持正常。从肝脏外观形态上看，空白对照组肝脏颜色泛黄，这是典型的病变特征；相比之下，试验组、阳性对照组肝脏颜色红润。

图2 大口黑鲈肝脏组织学结构及外观形态(苏木精—伊红200×)

3 讨 论

3.1 复合型饲料添加剂对大口黑鲈生长、形体指标以及营养成分的影响

大口黑鲈作为我国重要的淡水养殖经济鱼类，饲料中氧化鱼油[15]、蛋白质或脂肪含量不适宜[16]均会影响其生长。近年来针对以上问题，饲料添加剂在水产养殖领域的应用受到广泛关注。在本试验中，将复合型饲料添加剂添加到基础饲料中，显著提高了大口黑鲈体质量增加率和特定生长率，表明复合型饲料添加剂对大口黑鲈生长具有积极作用。这可能因为复合型饲料添加剂中黄芪多糖、胆汁酸、L-肉碱等活性物质能促进鱼体蛋白质的合成，提高脂肪利用率，从而提高了大口黑鲈的生长性能。此外，已有研究表明，黄芪多糖对齐口裂腹鱼(Schizothoraxprenanti)[17]和大黄鱼(Larimichthyscrocea)[18]的饲料转化利用具有明显改善效果；胆汁酸对于大菱鲆幼鱼的饵料系数也具有显著降低作用[11]。在本试验中，添加复合型饲料添加剂对于大口黑鲈饵料系数无显著影响，研究结果间的差异可能是试验鱼的种类、鱼体发育阶段、基础饲料中脂肪和蛋白质含量不同所致。脏体比、肝体比以及脾体比是评价鱼体健康和品质的重要指标。添加复合型饲料添加剂能显著降低大口黑鲈肝体比，而且根据肝脏粗营养成分分析结果，复合型饲料添加剂也显著降低了肝脏粗脂肪含量，这与复合型饲料添加剂中含有胆汁酸和L-肉碱有关。已有研究表明，L-肉碱在脂肪酸代谢中起重要的作用，它可以将长链脂肪酸转运到线粒体中进行β氧化，加速了组织脂肪氧化[19]；而胆汁酸可以促进小肠中脂肪和脂溶性维生素的吸收以及维持肝脏中胆固醇稳态[20]；L-肉碱或胆汁酸应用于草鱼(Ctenopharyngodonidella)[21-22]和鲤(Cyprinuscarpio)[23]的研究也得到了一致的结果。因此，饲料中添加适量的复合型饲料添加剂可以有效改善鱼体营养状况，减少肝脏能量的沉积，降低组织脂肪含量。

3.2 复合型饲料添加剂对大口黑鲈血清生化指标和肝脏健康的影响

鱼类的血液生化指标在一定程度上可以反映鱼体的健康状况。血清中总蛋白和白蛋白含量是评估动物体内蛋白质代谢状况的指标，间接反映其健康和免疫水平[24]。碱性磷酸酶不仅是机体重要的代谢调控酶，还可以增强机体对病原体的识别和吞噬能力，进而提高鱼体的抗病能力[25]。有研究发现，饲料中添加适量的黄芪多糖[26]或胆汁酸[22]可以增加养殖鱼类血清总蛋白和白蛋白的含量；本试验结果有所不同，各组之间总蛋白和白蛋白含量并未出现显著差异，这主要归因于添加剂的种类和含量不同。复合型饲料添加剂使大口黑鲈血清碱性磷酸酶活性显著升高，这可能与其中黄芪多糖、胆汁酸和杜仲等活性物质有关。已有研究报道，黄芪多糖[26]、胆汁酸[27]、杜仲[10]等均可通过提高血清碱性磷酸酶活性改善养殖鱼类的非特异性免疫功能。但是，具体是哪种或哪几种组分对提高免疫力作用最大尚未知晓，需要进一步的研究验证。谷丙转氨酶和谷草转氨酶都是评估肝脏功能的重要指标，其活性显著增强通常表示肝脏发生变性、损伤或坏死[28]。在本试验中，添加复合型饲料添加剂显著降低大口黑鲈血清中谷草转氨酶、谷丙转氨酶活性。这与在高淀粉饲料中添加胆汁酸能减轻大口黑鲈肝脏损伤[27]的研究结果一致。再结合肝脏外观形态和组织学苏木精—伊红染色结果，添加复合型饲料添加剂后，大口黑鲈肝脏颜色红润，组织结构中巨噬细胞中心和组织炎症较投喂基础饲料组具有明显改善，表明复合型饲料添加剂对大口黑鲈肝脏健康有利，对肝脏病变有一定的预防和治疗效果。

3.3 复合型饲料添加剂对大口黑鲈肝脏抗氧化能力的影响

抗氧化系统、溶菌酶、补体系统等是鱼类非特异性免疫系统的重要组成部分[29]，而机体抗氧化系统功能与总抗氧化力、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶等指标密切相关，这些指标活性的高低直接反映机体对于应激代偿能力和清除自由基能力的强弱[30]。丙二醛是脂质过氧化反应的最终产物，其浓度间接反映机体细胞的损伤程度[31]。王煜恒等[9]研究表明，黄芪多糖能够显著提高杂交鳢(Channamaculate♀×C.argus♂)肝脏中超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的活性，同时能显著抑制丙二醛的合成；明建华等[32]研究表明，添加L-肉碱可提高青鱼(Mylopharyngodonpiceus)肝脏中超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的活性，降低丙二醛的浓度。本试验的结果与之类似，添加复合型饲料添加剂能够显著提高大口黑鲈肝脏中超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的活性，同时显著降低了丙二醛的浓度，总抗氧化能力虽然没有明显差异，但也呈现了升高趋势。这可能与复合型饲料添加剂中的黄芪多糖、L-肉碱和胆汁酸能抑制活性氧自由基的产生[33]有关，同时杜仲也具有清除自由基的能力[10,34]。以上结果表明，复合型饲料添加剂能有效提高大口黑鲈抗氧化能力、增强肝功能、降低氧自由基对机体的损伤。

4 结 论

综上所述，黄芪多糖、杜仲、酵母细胞壁、胆汁酸、L-肉碱等有机结合的复合型饲料添加剂，在基础饲料中添加0.01%投喂，能有效促进大口黑鲈生长，显著降低肝脏脂肪含量，并能提高肝脏抗氧化能力，对鱼体健康有积极作用。