饲料中甲基睾酮含量对阿里雌鱼生长及体色的影响

姜巨峰，刘克明，李春艳，刘肖莲，周 勇，韩现芹，史东杰，马 林，宋红梅，赵立明

( 1.天津市水产研究所，天津市观赏鱼技术工程中心，天津 300221； 2.北京市水产科学研究所暨国家淡水渔业工程技术研究中心，北京 100068； 3.中国水产科学研究院 珠江水产研究所，农业农村部休闲渔业重点实验室，广东 广州 510380； 4.天津市静海区畜牧水产业发展服务中心，天津 301600 )

随着我国人民生活水平的日益提高，观赏鱼已逐渐成为消费新时尚。色彩是观赏鱼的主要观赏价值，影响鱼类体色的因素有鱼类的遗传因素、神经内分泌因素、年龄、性别、外部环境和所摄食饵料等[1]。性别对观赏鱼类体色的影响较为普遍，大部分鱼类雄性体色较雌鱼鲜艳。

马拉维湖慈鲷(简称“马鲷”)是目前观赏鱼市场上较为畅销的品种，多是雌雄二态，雄性的成鱼拥有艳丽极具金属感的体色，观赏价值和经济价值大，而雌鱼和幼鱼大多呈现单调的灰色，观赏价值和经济价值小。阿里(弗氏鬼丽鱼)(Sciaenochromisfryeri)是马鲷中最受欢迎的品种，属硬骨鱼纲、鲈形目、慈鲷科、鬼丽鱼属。其梦幻般的蓝色为阿里赢得了“蓝色闪电”的美誉，其特别的金属蓝体色吸引了一大批阿里爱好者。然而，在实际养殖生产中，阿里繁殖的后代雌雄比例约为1∶1，其中有一半的阿里雌鱼需要人工增色成金属蓝色再出售，中国目前每年需要人工增色的阿里鱼逾200万尾。

目前国内外学者对阿里的研究较少，仅见其营养、麻醉剂、繁养技术等方面的少量报道[2-5]，而对其增色剂研制、增色策略尚未见相关报道。甲基睾酮(MT)在促进鱼类增色研究中的应用较为广泛，目前已见在黄姑鱼(Nibeaalbiflora)[6]、斑马鱼(Daniorerio)[7]、草鱼(Ctenopharyngodonidella)[8]、剑尾鱼(Xiphophorushelleri)[9]、珍珠玛丽鱼(Mollienisiavelifera)[10]、红剑尾鱼(X.helleri)[10]、中华鳑鲏(Rhodeussinensis)[11]、马拉瓜丽体鱼(Cichlasomamanaguense)[12]、鲤(Cyprinuscarpio)[13]等20多种鱼增色方面进行了研究和应用，促进了水产产业的良性化发展。笔者以阿里雌鱼为研究对象，通过研究饲料中不同甲基睾酮剂量对阿里雌鱼生长及增色效果的影响，旨在为阿里人工养殖及售后技术服务提供数据支撑。

1 材料与方法

1.1 阿里增色饲料

试验饲料以阿里养殖普通饲料为基础饲料(表1)，在增色预试验的基础上，分别配制含有4、8、12、16 mg/kg 4个甲基睾酮(西亚试剂，分析纯，99%)含量梯度(MT4、MT8、MT12、MT16组)的试验饲料，基础饲料为对照组饲料，所有饲料烘干后，装袋置于4 ℃冰箱备用。基础饲料由鱼粉32%、豆粕18%、花生饼18%、面粉19%、鱼油8%、磷酸二氢钙1%、硫酸铜0.5%、硫酸锰0.5%、维生素混合物1%组成。

表1 基础饲料的营养分析

1.2 增色试验

增色试验在天津市观赏鱼技术工程中心静海实验基地水族实验室进行。以平均体质量(5.78±1.05) g的阿里雌鱼为试验对象，试验分为5组，每组3个平行，每个平行30尾试验鱼。随机选择规格基本一致、形体健康、游动迅速的110日龄试验鱼置于光照周期为14L∶8D装有30 W LED灯的75 cm×60 cm×28 cm水族缸中，并在每个缸体上标注试验饲料的标签。水温22～24 ℃，pH 7.8～8.0，每日9:00和16:00定时饱食投喂，持续养殖8周。由于甲基睾酮不溶于水，其可以作为饲料添加剂应用于观赏鱼增色。在投喂试验鱼时，坚持少量多次的原则，鱼的摄食速度很快，基本上在3 s内饲料就被摄食完毕，因此饲料中的营养物质不会溶失到养殖用水中造成水体环境的污染。当鱼吃饱后，及时将漂在水面的剩余饲料捞出回收。

1.3 停药试验

在增色试验结束时，改投普通饲料，每日正常投喂，观察试验鱼的体色变化情况，持续养殖4周。

1.4 样品测定与数据分析

在试验第0、2、4、6、8、10、12周时，分别于每缸中各取10尾鱼，用0.1 mL/L质量浓度的丁香油将其麻醉，用滤纸吸干体表水分后，每尾鱼均按头部朝左的顺序放置，快速用色度色差仪(Konica Minolta CM-700d，日本)测定其体表色度色差值，每尾鱼测定腹部前部、中部和后部3个部分，取平均值，并与标准阿里真雄鱼的体表色度值(取13尾阿里真雄鱼上市鱼进行测定，标准鱼色度值为:L,35.62±3.04；a,0.06±1.79；b,-18.99±2.79)进行比较，测出总色差值(△Eab*)和黄蓝度值(b*)；同时测其全长、体长、体质量，测毕，快速将鱼放入充氧的干净水桶中进行苏醒，恢复正常后将鱼移至原养殖缸中养殖。阿里雌鱼特定生长率(RSG，%/d)[14]按下式计算：

RSG=(lnm2-lnm1)/t×100%

式中，m1为初始体质量(g)，m2为终末体质量(g)，t为试验时间(d)。

1.5 试验用水的处理

试验结束后，将养殖用水排入阿里专用增色池中，定期检测池水中的甲基睾酮含量，如甲基睾酮含量超标，可采用Fenton氧化法或睾丸酮丛毛单胞菌(Comamonastestosteroni)基因工程菌对养殖用水进行处理，待合格后再进行养殖利用。

1.6 数据分析

试验结果用SPSS 22.0软件进行单因素方差分析，差异显著时进行Duncan多重比较。

2 结 果

2.1 饲料中甲基睾酮含量对阿里雌鱼生长及成活率的影响

不同质量浓度的甲基睾酮对阿里雌鱼的成活率没有影响，均为100%(表2)。试验结束后，所有甲基睾酮组的阿里体质量均显著高于对照组(P<0.05)，12 mg/kg的甲基睾酮组的体质量最高，平均体质量为8.32 g，显著高于16 mg/kg处理组和对照组(P<0.05)，但与4、8 mg/kg处理组之间的体质量差异不显著(P>0.05)。4、12 mg/kg处理组特定生长率差异不显著(P>0.05)，均显著高于对照组(P<0.05)，但与其他处理组差异不显著(P>0.05)。

表2 饲料中甲基睾酮含量对阿里雌鱼生长及成活率的影响

2.2 饲料中甲基睾酮含量对阿里雌鱼体色的影响

2.2.1 饲料中甲基睾酮含量对阿里雌鱼色差值(△Eab*)的影响

色差值代表测定鱼体色色度值与标准体色的差距，其值呈现越小说明其测定色度值与标准体色值的差异越小。由表3和图1可见，甲基睾酮对阿里雌鱼具有增色效应，其与标准鱼的色差值随着增色时间的延长而逐渐变小。在增色第2、4、6、8周时，12、16 mg/kg甲基睾酮组的色差值差异不显著(P>0.05),但均显著低于其他各组(P<0.05)；4、8 mg/kg甲基睾酮组的色差值差异不显著(P>0.05),但均显著低于对照组(P<0.05)。

表3 饲料中甲基睾酮含量对阿里增色效果(△Eab*)

图1 饲料中甲基睾酮含量和添加时间对阿里雌鱼体色的影响

8周增色时间结束后，改投对照组饲料，在第10周时，各处理组色差值较第8周时色差值均有所下降。8、12、16 mg/kg甲基睾酮组色差值差异不显著(P>0.05)，但均显著低于4 mg/kg甲基睾酮组和对照组的色差值(P<0.05)；4 mg/kg甲基睾酮组色差值显著低于对照组(P<0.05)。

第12周时，除对照组，其他处理组的色差值均略高于第10周时各处理组的色差值。8、12、16 mg/kg甲基睾酮组色差值差异不显著(P>0.05)，但均显著低于4 mg/kg甲基睾酮组和对照组的色差值(P<0.05)；4 mg/kg甲基睾酮组色差值显著低于对照组(P<0.05)。

2.2.2 饲料中甲基睾酮含量对阿里雌鱼黄蓝色度值(b*)的影响

b*表示黄蓝度值，+表示偏黄，-表示偏蓝。由表4和图1可见，阿里雌鱼体表b*随着增色时间的延长，呈逐渐减小趋势。在增色8周时，12、16 mg/kg甲基睾酮组体表b*差异不显著(P>0.05)，但显著低于其他各组(P<0.05);4 mg/kg甲基睾酮组体表b*显著高于8 mg/kg甲基睾酮组(P<0.05)，但显著低于对照组(P<0.05)。

表4 饲料中甲基睾酮含量对阿里增色效果(b*)

在增色试验结束后，所有处理组换投对照组饲料后，试验第10周时，各处理组阿里雌鱼体表b*较第8周时均有所下降，阿里雌鱼体表蓝色呈现更深趋势；12、16 mg/kg甲基睾酮组体表b*差异不显著(P>0.05)，但显著低于0、4、8 mg/kg甲基睾酮组(P<0.05);4 mg/kg甲基睾酮组体表b*显著高于8 mg/kg组(P<0.05)，但显著低于对照组(P<0.05)。

第12周时，12、16 mg/kg甲基睾酮组体表b*差异不显著(P>0.05)，但显著低于0、4、8 mg/kg甲基睾酮组(P<0.05); 4、8 mg/kg甲基睾酮组体表b*差异不显著(P>0.05)，但显著低于对照组(P<0.05)。与第10周相比，第12周各处理组除0、4 mg/kg甲基睾酮组体表b*稍低外，其他各组体表b*均比第10周时稍高。

3 讨 论

3.1 饲料中甲基睾酮含量对阿里雌鱼生长及成活率的影响

甲基睾酮对养殖动物的生长作用具有剂量效应机制，低剂量能明显促进蛋白质合成，减少氨基酸分解，使肌肉增长、体质量增加，高剂量可抑制养殖动物的生长。本试验中，4、8、12、16 mg/kg甲基睾酮组均对阿里雌鱼具有促生长作用，且12 mg/kg组的体质量显著高于16 mg/kg组(P<0.05)，但与4 mg/kg和8 mg/kg组体质量差异不显著(P>0.05)。这与用甲基睾酮处理樱桃鲃(Barbustitteya)雌鱼[1]、马拉瓜丽体鱼[12]、鲤[13]、金鱼(Carassiusauratus)[13]、吉富罗非鱼(Oreochromisniloticus)[15]能够促使其生长速度加快的结论相一致。本试验结果亦显示，高剂量的甲基睾酮有抑制阿里雌鱼生长的趋势，这与高浓度激素处理会抑制舌齿鲈(Dicentrarchuslabrax)[16]、尼罗罗非鱼(O.niloticus)[17]生长的结论相类似，但与雄性激素对庸鲽 (Hippoglossushippoglossus)[18]生长速度无明显差别及雄性激素对黄姑鱼[6]、大口黑鲈(Micropterussalmoides)[19]、稀有鲫(Gobiocyprisrarus)[20]、食蚊鱼(Gambusiaaffinis)[21]的生长有显著抑制作用的研究结果不同。这可能是由鱼类种类的特异性所导致，也可能是因为鱼类不同生长阶段对甲基睾酮的耐受性和吸收转化利用能力不同。另外，雄性激素投喂时间也是影响鱼类生长的关键因素，如甲基睾酮投喂体长15.1 mm的大口黑鲈[19]，在前40 d内50 mg/kg组和100 mg/kg组的体长和体质量差异不显著(P>0.05)，而到60 d时，100 mg/kg组的体长和体质量显著低于50 mg/kg组(P<0.05)。本试验中，在投喂甲基睾酮饲料12周后，不同试验组的阿里雌鱼生长性能不一致，表明在实际应用中，激素的效应时间也是重要的考虑因素。

当激素含量在适宜范围内时对鱼类成活率无显著影响，但在超过某个阈值后，鱼类的成活率将会显著降低。投喂17α-甲基睾酮对白斑狗鱼(Esoxlucius)[22]有显著致死效应；用辛基酚处理日本青锵(Oryziaslatipes)[23]发现，当处理质量浓度为2 μg/L时，死亡率升高20%～30%。本试验中，各处理组对阿里雌鱼的成活率无影响，这与樱桃鲃[1]、马拉瓜丽体鱼[12]的研究结果相同，说明甲基睾酮含量在阿里雌鱼耐受范围之内。

3.2 饲料中甲基睾酮含量对马雕阿里雌鱼体色的影响

一般情况下，雄鱼较雌鱼艳丽，因此也更具观赏价值。在饲料中添加一定量的甲基睾酮，可促使雌鱼呈现出雄鱼个体的副性征，其体色变得更加艳丽。研究显示，饲料中添加10 mg/kg的甲基睾酮能使3月龄的红剑尾鱼[24]体色加深，但对5月龄的珍珠玛丽鱼[24]的体色无影响，这可能是由于5月龄的珍珠玛丽鱼性腺分化程度已较高或者投喂的甲基睾酮的剂量太小、时间太短所导致的；饲料里添加30 mg/kg以上的17α-甲基睾酮，50日龄的中华鳑鲏[11]体色明显开始增强，效应时间需28 d；17α-甲基睾酮处理后的红剑尾鱼[10,24]、玛丽鱼 (M.latipinna)[25]以及红色斑马鱼[26]，体色更鲜艳。本试验结果表明，甲基睾酮可使阿里雌鱼体色呈现雄鱼金属蓝的体色。12 mg/kg与16 mg/kg的甲基睾酮增色效果差异不显著(P>0.05)，但显著高于其他各组(P<0.05)。结合养殖成本和增色时间等因素综合考虑，认为12 mg/kg甲基睾酮是促使阿里雌鱼体色增色的最佳添加量。

表5 甲基睾酮对观赏鱼增色情况

在8周增色试验结束改投普通饲料，试验第10周时，各试验组的阿里雌鱼体表b*比第8周时的偏小，体表呈“金属蓝”体色加深；在第12周时，各试验组鱼体表b*除4 mg/kg甲基睾酮组外，其他各组鱼体表b*均较第10周时的偏大；这说明前8周在体内富集的甲基睾酮后期通过代谢得以全部释放出来，所以在增色饲料开始停止投喂的一段时间里，阿里呈现出更深的金属蓝体色，到后期其颜色有逐渐变浅的趋势，但仍维持在体色较艳的程度，表明外源甲基睾酮对阿里雌鱼具有适应性反应。该试验中，阿里雌鱼在停止投喂增色饲料后4周仍然呈现金属蓝体色，可能是由于阿里雌鱼经过8周增色后已雄性化或者体内吸收的增色剂尚未代谢完全，所以呈现出较为稳定的金属蓝体色，具体原因还需进一步研究确定。

3.3 增色鱼与阿里真雄鱼颜色差异的比较分析

本试验结果表明，投喂甲基睾酮后的阿里雌鱼，其体色能够呈现出雄鱼金属蓝的体色。但与真雄鱼的色差值(△Eab*)和黄蓝度值(b*)相比较，其体色色度还有一定的差距。这可能与种类吸收利用甲基睾酮的特异性有关，也可能与具体养殖温度、光照有关，具体原因还需要进一步研究。

3.4 饲料中添加甲基睾酮对阿里雌鱼健康及养殖环境的影响分析

饲料中添加甲基睾酮能够促进阿里雌鱼生长且呈现出雄鱼金属蓝体色。已有多项研究证实，甲基睾酮在罗非鱼、虹鳟(Oncorhynchusmykiss)鱼苗雄性化应用方面能够消除完毕[27-29]，不会有残留。鱼类体内吸收的甲基睾酮可通过代谢而逐渐消除[30]，这可以从增色后的阿里雌鱼体色后期有变浅的趋势得到印证，阿里雌鱼体内的甲基睾酮到底多长时间能够消除完毕还有待进一步研究。

另外，应用甲基睾酮对观赏鱼增色时，可以在功能饲料表面包裹一层薄膜，以防止功能性添加剂在鱼类摄食的过程中溶失至水中，造成养殖环境的污染；同时坚持少量多次的投饲习惯，确保所投喂的饲料均能够在短时间内被鱼类摄食利用，避免对环境的污染。

4 结 论

饲料中添加甲基睾酮不仅可以促使阿里雌鱼生长速度加快，而且可以使其呈现雄鱼金属蓝体色，适宜添加量为12 mg/kg，增色8周后的阿里体色能够稳定4周以上。