注射用泮托拉唑钠中EDTA-2Na的含量测定方法

梁超

摘要：目的 建立注射用泮托拉唑钠中EDTA-2Na的含量测定方法。方法 HPLC法，色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶（Intersil ODS-3，4.6mm×150mm，3μm），以缓冲液（10%四丁基氢氧化铵溶液20ml，加水180ml，以三氟乙酸调节pH值至3.5）-乙腈-水（10：22：68）为流动相，流速为1.0ml/min，检测波长为254nm，柱温为30℃。结果 线性回归方程为Y=10098.3985X-704.3415（r=0.9998），EDTA-2Na浓度在3.95～39.40μg/ml范围内线性关系良好;平均回收率为99.60%（n=9），RSD为0.5%，样品在24h内基本稳定。 结论 本方法快速、准确、灵敏度高、重复性好，可用于测定注射用泮托拉唑钠中EDTA-2Na的含量。

关键词：泮托拉唑钠;EDTA-2Na;HPLC法;含量

【中图分类号】 R927.2 【文献标识码】 A      【文章编号】2107-2306（2022）13--01

注射用泮托拉唑钠主要用于十二指肠溃疡、胃溃疡、急性胃粘膜病变、复合型胃溃疡等所致的急性上消化道出血[1-2]，为质子泵抑制剂，是一种良好的抑制胃酸药物，临床使用广泛。EDTA-2Na是常用的金属离子络合剂，许可用于注射制剂。它能有效增强药物的稳定性，其原理为EDTA-2Na可以与金属离子形成稳定的水溶性螯合物，能够防止自身的氧化，有利于提高药物在制备、存储和临床配制过程中的稳定性。因此需要在处方中加入EDTA-2Na提高产品的稳定性。中国药典2020年版及进口注册标准JX20150094均收录了注射用泮托拉唑钠的质量标准，但标准中均未收录EDTA-2Na检测方法，为了更好地控制产品质量，本研究开发了一种简单、迅速、精确的用于测定注射用泮托拉唑钠中的EDTA-2Na含量测定方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器  HPLC高效液相色谱仪（LC-20AT，岛津）、电子天平（梅特勒）、PB-10型酸度计（梅特勒）。

1.2 试药 硫酸铜（CuSO4·5H2O，分析纯）、10%四丁基氢氧化铵（分析纯）、三氟乙酸（色谱纯）、乙腈（色谱纯）、EDTA-2Na对照品（纯度100%）、注射用泮托拉唑钠（武田制药，批号：442145）、纯化水自制。

2 溶液的配制

2.1 溶剂：称取硫酸铜250mg，加入水1000ml，搅拌使溶解，即得。

2.2 供试品溶液：取本品1瓶，全部取出称重为45.3mg（含EDTA-2Na约1.0mg），将粉末全部加入到50ml容量瓶中，加入溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3 对照品贮备液：取EDTA-2Na对照品约20mg，精密称定，置100ml量瓶中，加溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.4 对照品溶液：精密量取对照品贮备液5ml，置50ml量瓶中，用溶剂稀释至刻度，摇匀，即得。

2.5 系统适用性溶液：取泮托拉唑钠约40mg，精密称定，置50ml量瓶中，加对照品贮备液5ml，用溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取滤液。

3 方法与结果

3.1 色谱条件 色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶（Intersil ODS-3，4.6mm×150mm，3μm），流动相为缓冲液（10%四丁基氢氧化铵溶液20ml，加水180ml，以三氟乙酸调节pH值至3.5）-乙腈-水（10：22：68），流速为1.0ml/min，检测波长为254nm，柱温为30℃。

3.2 系统适用性试验 分别取“空白溶剂”、“系统适用性溶液”和“对照品溶液”各20μl，注入高效液相色谱仪，采用“3.1”项下色谱条件进样检测，记录色谱图，由色谱图可知EDTA-2Na的保留时间约为15min，系统适用性溶液中EDTA-2Na色谱峰与泮托拉唑色谱峰之间的分离度大于1.5;对照品溶液，连续进样5次，保留时间RSD值小于1.0%，峰面积的RSD值小于5.0%，系统适用性符合要求。

3.3 线性关系考察 称取EDTA-2Na对照品大约20mg，精密称定置200ml容量瓶中，加入溶剂溶解并定容，分别精密移取EDTA-2Na对照品贮备液4ml、10ml、20ml、30ml、40ml分别加入到100ml容量瓶中，再分别加入溶剂稀释至刻度，摇匀，即得各线性对照品溶液，含EDTA-2Na质量浓度分别为4.0μg/ml、10.0μg/ml、20.0μg/ml、30.0μg/ml、40.0μg/ml，采用“3.1”项下色谱条件进样检测，以峰面积（Y）对浓度（X）为进行线性回归，得到标准曲线方程Y=10098.3985X-704.3415（r=0.9998），说明EDTA-2Na浓度在3.95～39.40μg/ml范围内线性关系良好。

3.4 精密度试验  取对照品溶液，分别连续进样6次，记录色谱图，EDTA-2Na的峰面积RSD为0.3%，结果表明此方法精密度良好。

3.5 定量限及检测限  取EDTA-2Na对照品贮备液用溶剂逐级稀释，制备定量限及检测限溶液，同法测定，定量限为0.62ng，S/N约为10，检测限为0.16ng， S/N约为3。

3.6 重复性试验  取本品1瓶，全部取出称重为45.3mg（含EDTA-2Na约1.0mg），将粉末全部加入到50ml容量瓶中，加入溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液进样测定，制备6份供试品溶液中，EDTA-2Na含量均在90.0%～110.0%之间，RSD值为1.1%，小于5.0%，表明此方法重复性良好。

3.7 準确度试验 供试品溶液中EDTA-2Na浓度为20µg/ml，考察浓度分别15µg/ml、20µg/ml、25µg/ml。在3个浓度上考察EDTA-2Na的回收率，分别为供试品溶液中EDTA-2Na浓度的75%、100%、125%，每个浓度上平行制备3份样品溶液。以外标法计算EDTA-2Na的含量。9个样品的回收率在95.0%～105.0%范围内，平均回收率为99.6%，RSD值为0.5%，小于5.0%，表明该方法准确性良好。

3.8 稳定性试验 取供试品溶液，分别在0h、2h、4h、12h和24h进样测定，EDTA-2Na主峰峰面积相对于0h的比值在95.0%～105.0%之间，表明供试品溶液在24h内稳定性良好。

3.9 样品含量测定 取注射用泮托拉唑钠样品3瓶，每瓶全部取出称重为 45.3mg（含EDTA-2Na约1.0mg），将粉末全部加入到50ml容量瓶中，加入溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液按3.1项色谱条件进样测定;同时取对照溶液进样测定，按照外标法计算每瓶中EDTA-2Na的含量。3瓶注射用泮托拉唑钠粉末中EDTA-2Na含量分别为0.996mg、0.989mg、0.991mg。

4 讨论

4.1 测定方法选择  EDTA-2Na现有的检测方法包括滴定法和比色法，该方法的灵敏度和专属性较差，产生较大干扰;有报道采用HPLC 法测EDTA-2Na的方法，但该方法经验证后峰形较差，检测的准确性和重现性较差[3]。本研究以缓冲液（10%四丁基氢氧化铵溶液20ml，加水180ml，以三氟乙酸调节pH值至3.5）-乙腈-水（10：22：68）作为流动相时，EDTA-2Na出峰时间适宜，峰形较好，基线平稳，检测结果准确可靠，专属性强，检测时间较短，灵敏度较高，检测限低，干扰较少的高效液相色谱法。

4.2 色谱柱的选择 本次实验采用缓冲盐-乙腈-水（10：22：68）為流动相，若使用常规 C18柱，长时间用纯水相冲洗可能会导致固定相的流失，柱效下降，故试验中采用了更强的疏水性相互作用的Intersil ODS-3-Cl8色谱柱，实验结果证明，多次进样后，色谱峰形保持良好。

本方法可用于测定注射用泮托拉唑钠中的EDTA-2Na含量，快速、简便、灵敏度高。因此可利用此法判断该药物辅料中EDTA-2Na的存在，判断是否与参比制剂一致辅料用量，确保仿制产品质量一致性。

参考文献：

[1]陈江飞，苗彩云，杨洪明.国产和进口泮托拉唑钠在输液中的配伍稳定性考察[J].中国临床药学杂志，2013，22（1）：27-30.

[2]刘青青，陈瑶，肖雨婷.泮托拉唑钠粉针剂治疗上消化道出血疗效观察[J].中国实用医药，2013，8（1）：25-26.

[3]赵杰，HPLC法测定注射用泮托拉唑钠中EDTA-2Na的含量[J].医学信息，2013，31（11）：138-139.