抗凝与非抗凝血液标本对4项传染性指标酶联免疫吸附试验影响的研究

马红 张珊珊 何美香 杨靖

[摘要]目的觀察并比较抗凝与非抗凝血液标本对4项传染性指标酶联免疫吸附试验结果的影响效果。方法选择2020年1月至2021年10月乌鲁木齐市中医医院采血的患者264例血液标本进行研究，均为全血标本。每份血液标本均使用非抗凝管留取静脉血，每支5 ml，并使用抗凝管（枸橼酸-枸橼酸钠）留取静脉血，每支2 ml。所有样本均接受离心处理，按照试剂说明书操作步骤手工加样后进行处理，获得最终的检测结果。结果经酶联免疫吸附试验初步检测，抗凝标本与非抗凝标本在乙型肝炎病毒（HBV）、人类免疫缺陷病毒（HIV）、梅毒螺旋体（TP）检测结果方面比较，差异有统计学意义（P<0.05）。264个样本标本中，有5例初次检测结果出现不一致，重复实验后结果显示，上述5例标本的复试结果趋于一致。初次检测0.8≤ S/CO ≤1的抗凝标本共有22份，对其进行抗凝与非抗凝血各一孔的双孔复试，22份标本经复试后，1份标本的结果为灰区，其余21份标本的结果为非反应性，最终的复试结果一致率为95.45%。结论在血液标本的检测中，与非抗凝血液标本比较，应用枸橼酸-枸橼酸钠抗凝血液标本会对4项传染性指标酶联免疫吸附试验检测结果产生一定的影响，导致一定假阳性的出现，但经复试后，可有效排除干扰。

[关键词]血液标本;传染性指标;酶联免疫吸附试验;抗凝标本;非抗凝标本

[中图分类号] R446.6  [文献标识码] A   [文章编号]2095-0616（2022）09-0146-04

Study on the effects of anticoagulated and non-anticoagulated blood specimens on the results of ELISA detected four infectious indicators

MAHongZHANGShanshanHE  MeixiangYANGJing

1.Department of Clinical Laboratory， Urumqi Hospital of Traditional Chinese Medicine， Xinjiang， Urumqi 830000， China;2.Department of Blood Transfusion， the Fourth Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University， Xinjiang， Urumqi 834000， China;3.Molecular Genetics Group of Clinical Laboratory Department， Xinjiang Purisaixin Medical Laboratory， Xinjiang， Urumqi 830000， China

[Abstract] Objective To observe and compare the effects of anticoagulated and non-anticoagulated blood specimens on the results of four infectious indicators detected by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）. Methods A total of 264 blood specimens were selected for the study， all of which were whole blood specimens collected from patients in Urumqi Hospital of Traditional Chinese Medicine from January 2020 to October 2021. Venous blood in each blood specimen was retained using non-anticoagulated tubes of 5 ml each and anticoagulated tubes （citrate-sodium citrate） of 2 ml each. All specimens were subjected to centrifugation and processed after the manual addition of specimens according to the operating procedures of the reagent instructions to obtain the final test results. Results The preliminary detection by ELISA showed that there were some differences between anticoagulated and non-anticoagulated blood specimens in terms of the test results of hepatitis B virus （HBV）， human immunodeficiency virus （HIV） and treponema pallidum （TP）， with statistically significant differences （P <0.05）. Among the 264 specimens， there were 5 specimens with inconsistent initial test results， while the repeated test results of the above 5 specimens tended to be consistent. A total of 22 anticoagulated specimens with an initial test result of 0.8≤ S/CO ≤1 were double-well retested with one well each for anticoagulated and non-anticoagulated blood. The cumulative retest results revealed that after retesting 22 specimens， one specimen had the result distributed in the gray area， and the remaining 21 specimens had non-reactive results， with a final concordance rate of 95.45%. Conclusion Compared with non-anticoagulated blood specimens， the citrate-sodium citrate anticoagulated blood specimens can produce some influence on theresults of ELISA detected four infectious indicators， leading to the appearance of certain false positives， but after retesting， the interference can be effectively excluded.

[Key words] Blood specimens; Infectious indicators; Enzyme-linked immunosorbent assay; Anticoagulated specimens; Non-anticoagulated specimens

目前，在医疗机构的日常工作中，为确保临床诊断准确，需要对患者的血液标本进行一定的检测，检测相关的传染性指标，如梅毒等[1]。在检测过程中，酶联免疫吸附试验是应用较多的方法[2-3]。检测结果的准确性容易受到多种因素的影响，其中，标本的抗凝血处理是一个十分重要的因素。根据上述情况，本研究选择纳入264例血液标本进行分组比较研究，对收集到的血液标本分别实施非抗凝管留取血样以及抗凝管（枸橼酸-枸橼酸钠）留取血样，并进行酶联免疫吸附试验。通过对相关传染性指标检测结果的比较，分析抗凝血处理血液标本对最终检测结果的影响情况，以期为临床血液标本检测方案的制订提供一定的参考依据。

1材料与方法

1.1材料

选择2020年1月至2021年10月乌鲁木齐市中医医院采血的患者264例血液标本进行研究，均为全血标本。非抗凝管留取血样容量为每支5 ml，并使用抗凝管（枸橼酸-枸橼酸钠）留取血样，每支2 ml。 1.2试剂与仪器

本研究所使用试剂与仪器类型、所提供的厂家以及试剂和仪器的具体情况见表1。

1.3方法

非抗凝管血液标本保持静置，对枸橼酸-枸橼酸钠抗凝管中的血液标本来回颠倒，混匀5～8次[4]。一个酶标板88个样本，三板共264个样本。应用离心机对全部血液标本进行处理，离心时间均为5 min。离心处理完毕后，手工进行加样，应用酶标分析仪进行后处理，经处理获得最终的检测结果[5-6]。对系统处理后的数据结果进行完整的收集和整理，得出检测所得不同血液标本 A 值结果，均为初次检测的数据结果。按照初次检测结果进行筛选，得出初次检测结果不一致的血液标本。对筛选得出的血液标本进行复试，方法与上述步骤保持一致。对复试后的数据结果进行统计，计算出一致率。

1.4观察指标

统计不同血液标本初次检测传染性指标 A 值数据，统计初次检测结果不一致的标本数量，对其进行复试。统计初次检测0.8≤ S/CO ≤1的抗凝标本进行复试，并计算一致率。

1.5统计学处理

使用 SPSS 19.00统计学软件对数据结果进行处理，不同标本的初次检测传染性指标 A 值平均数据结果以均数±标准差（ x ±s）表示，组间差异检验采用 t 检验，P <0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1不同血液标本初次检测传染性指标A值数据结果比较

对不同标本的初次检测传染性指标 A 值平均数据结果进行比较，乙型肝炎病毒（HBV）、人类免疫缺陷病毒（HIV）、梅毒螺旋体（TP）检测结果方面，抗凝全血标本均高于非抗凝全血标本（P <0.05），在丙型肝炎病毒（HCV）检测数据结果方面，非抗凝全血标本低于抗凝全血标本，但差异无统计学意义（ P >0.05），见表2。

2.2初次检测结果不一致标本情况分析

264个样本标本中，有5例初次检测结果出现不一致，均表现为抗凝标本初次检测出现反应性或灰区值。针对这5例标本，再次用抗凝与非抗凝标本各做一孔复试，上述5例标本的复试结果趋于一致。

2.3初次检测0.8≤S/CO≤1的抗凝标本复试结果分析

初次检测0.8≤ S/CO ≤1的抗凝标本共有22份，對其进行抗凝与非抗凝血各一孔的双孔复试，22份标本经复试后，1份标本的结果为灰区，其余21份标本的结果为非反应性。最终的复试结果一致率为95.45%。

3讨论

在对血液标本进行检测的过程中，酶联免疫吸附试验的应用十分广泛。这一方法操作简单，灵敏度很高，便于进行结果分析判定[7-8]。但是，这一检测方法的最终结果也容易受到一些因素的影响，如各种抗凝剂的使用等[9-10]。本研究结果显示，经酶联免疫吸附试验初步检测，抗凝标本与非抗凝标本在 HBV、HIV、TP 检测结果方面差异有统计学意义（ P <0.05）。提示在最终获得的初次检测结果方面，抗凝与非抗凝血液标本之间存在一定的差异。对这一结果进行分析，在血液标本的检测中，对血液标本应用一定的抗凝剂后进行酶联免疫吸附试验，最终获得的数据结果会出现一定的偏差，造成一些检测干扰。研究中经检测发现，有5例初次检测结果出现不一致，进行一孔复试后结果显示，上述5例标本的复试结果趋于一致。在一定程度上表明，抗凝剂对于酶联免疫吸附试验确实存在干扰，但关于其具体机制，尚不十分清楚。另外，通过研究也发现，初次检测0.8≤ S/CO ≤1的抗凝标本共有22份标本，对其进行复试并对复试结果进行统计和分析发现，22份标本经复试后，1份标本的结果为灰区，其余21份标本的结果为非反应性。最终的复试结果一致率为95.45%。由此可知，如果对相关的假阳性反应实施复试，则基本上可以解决这一问题。对这一过程中一过性假阳性出现的原因进行分析，可能与以下一些操作不规范等因素相关，如在检测过程中，洗板不够彻底，则可能会影响到最终的检测结果准确性;如在进行加样操作的时候对血清进行吹吸时产生一定的气泡，或者扣干不完全，导致孔内出现液体过量残留等问题，均可能影响到最终的检测结果准确性，导致一过性假阳性问题的出现[11-12]。另外，血液来源情况也可能会导致最终检测结果出现不够精确的情况。如果相应血液标本对应患者的血清中非特异性 IgG 浓度过高，则极易导致检测结果出现假阳性。检测时，在制作酶联免疫吸附试验板时，如果在包被操作中蛋白质未能对聚苯乙烯表面予以完全覆盖，那么便会导致添加到血清标本中的免疫球蛋白被部分吸附在包被抗原表面，或者出现酶结合物中的蛋白质部分吸附于包被抗原表面的情况[13-14]。上述情况的出现会导致本底增加，进而导致假阳性结果的出现。另外，检测过程中需要使用各种试剂，从试验中所使用的试剂角度进行分析，目前国内所普遍应用的试剂标本存在不够统一的问题，试剂质量控制情况不同，从而极易对最终的试验结果准确性产生一定的影响[15-16]。对上述研究结果进行综合分析也可以得到一定的启示，在医疗机构的日常血液标本检测工作中，需要综合考虑不同因素可能会对检测结果产生的影响。在检测时，针对抗凝血液标本初次检测结果为阳性的标本，需要及时进行复试，得出相应结果，并进行科学分析和判定后，方可得出最终的检测结果，以保证血液标准检测质量。

综上所述，在血液标本的检测中，与非抗凝血液标本检测结果进行比较，应用抗凝血液标本进行检测时，经酶联免疫吸附试验检测所得传染性指标结果会出现假阳性，但通过复试可有效排除干扰。

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（收稿日期：2021-11-29）