直肠癌患者PANDAR mRNA表达与临床病理特征及预后的关系

吕敏 刘卓 李德川 郑林峰 韩哲 朱玉萍

结直肠癌是临床上常见恶性肿瘤之一，其中直肠癌发病率高于结肠癌，且以中低位直肠癌较为常见[1]。近年来，随着RNA测序和生物信息学技术的不断发展，长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）受到越来越多学者的关注。lncRNA是一类长度＞200 nt的非编码RNA，参与肿瘤增殖、转移以及化疗耐药等过程，同时发挥转录后调控和其他表观遗传学的修饰作用[2-3]。lncRNA PANDAR位于6p21.2，前期研究已证实其能促进结直肠癌增殖和转移[4-5]，但其与直肠癌MRI、组织病理分化及预后等关系的研究不多。因此，本研究对直肠癌患者PANDAR mRNA表达与临床病理特征及预后的关系作一探讨，以期为临床诊治提供参考。

1 对象和方法

1.1 对象 选取2015年1月—2016年12月在中国科学院大学附属肿瘤医院接受直肠癌根治术（包括前切除术、经腹会阴联合切除术、经腹直肠癌切除+近端造口+远端闭合术）的120例患者为研究对象，收集患者术中切除的直肠癌组织及癌旁正常组织标本。其中男 77例，女43例；年龄30～80（58.03±17.46）岁；肿瘤直径＜5 cm 74例，≥5 cm 46例；肿瘤组织高分化32例，中分化47例，低分化41例；远处转移36例，未转移84例；淋巴结转移63例，未转移57例；肿瘤浸润深度为T1～277例，T3～443例；MRI-T分期：T142例，T239例，T327例，T412例；MRI-N分期：N041例，N164例，N215例；MRI-环周切缘阳性32例，阴性88例。本研究经本院医学伦理委员会审查通过，所有患者均签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 资料收集 收集患者性别、年龄、肿瘤直径、肿瘤组织分化、远处转移、淋巴结转移、肿瘤浸润深度、MRI-T分期、MRI-N分期、MRI-环周切缘状态、4年总体生存率等临床资料，其中MRI-T分期、MRI-N分期、MRI-环周切缘状态根据患者MRI影像学资料分析获得。MRI-T分期标准：无原发肿瘤为T0；肿瘤侵犯黏膜下层，未侵及肌层为T1；肿瘤侵及肌层，未突破浆膜层为T2；肿瘤突破浆膜层且侵及系膜脂肪为T3；肿瘤侵犯周围器官为T4。MRI-N分期标准：无淋巴结转移为N0；1～3个可疑淋巴结为N1；≥4个可疑淋巴结为N2。MRI-环周切缘阳性标准：肿瘤浸润最深处与直肠系膜切除边界间的最短距离＜1 mm。

1.2.2 PANDAR mRNA表达水平检测 采用RT-PCR法。使用液氮碾碎直肠癌组织及癌旁正常组织，采用Trizol法提取RNA；使用RNA逆转录试剂盒合成cDNA，使用SYBR荧光定量试剂盒在PCR仪器上进行定量检测。所有引物购自杭州维辰生物科技有限公司，PANDAR引物序列：正义5′-CTGTTAAGGTGGTGGCATTG-3′，反义 5′-GGAGGCTCATACTGGCTGAT-3′；GAPDH 引物序列：正义 5′-CGCTCTCTGCTCCTCCTGTTC-3′，反义5′-ATCCGTTGACTCCGACCTTCAC-3′。以甘油醛-3-磷酸脱氢酶为内参，采用2-ΔΔCt法计算PANDAR mRNA表达水平。

1.3 统计学处理 采用SPSS 17.0统计软件，计量资料以表示，组间比较采用两独立样本t检验；计数资料组间比较采用χ2检验。采用ROC曲线分析计算PANDAR mRNA表达水平的截断值。绘制Kaplan-Meier生存曲线，采用log-rank法比较直肠癌组织PANDAR mRNA高、低表达患者4年总体生存率。采用多因素logistic回归分析直肠癌患者PANDAR mRNA表达的影响因素。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 直肠癌组织与癌旁正常组织中PANDAR mRNA表达水平比较 直肠癌组织中PANDAR mRNA表达水平为9.21±3.03，明显高于癌旁正常组织的3.17±1.82，差异有统计学意义（P＜0.05），见图1。

图1 直肠癌组织与癌旁正常组织中PANDAR mRNA表达水平比较

2.2 直肠癌组织PANDAR mRNA高、低表达患者临床病理特征比较 根据ROC曲线分析获得PANDAR mRNA表达水平的截断值为5.25，本研究以＞5.25为高表达，有65例；≤5.25为低表达，有55例。直肠癌组织PANDAR mRNA高、低表达患者在远处转移、淋巴结转移、肿瘤浸润深度、MRI-T分期、MRI-N分期等方面比较，差异均有统计学意义（均P＜0.05）；在性别、年龄、肿瘤直径、肿瘤组织分化、MRI-环周切缘状态等方面比较，差异均无统计学意义（均P＞0.05），见表1。

表1 直肠癌组织PANDAR mRNA高、低表达患者临床病理特征比较[例（%）]

2.3 直肠癌患者PANDAR mRNA表达的影响因素分析 以上述P＜0.05的5个因素（远处转移、淋巴结转移、肿瘤浸润深度、MRI-T分期、MRI-N分期）为自变量，PANDAR mRNA高、低表达为因变量进行多因素logistic回归分析，结果显示MRI-T分期、MRI-N分期是直肠癌患者PANDAR mRNA表达的独立影响因素（均P＜0.05），见表2。

表2 直肠癌患者PANDAR mRNA表达的影响因素分析

2.4 直肠癌组织PANDAR mRNA高、低表达患者预后比较 术后随访48个月，PANDAR mRNA高、低表达患者的中位生存期分别为31、38个月；PANDAR mRNA低表达患者4年总体生存率为39.2%，明显高于PANDAR mRNA高表达者的19.8%，差异有统计学意义（P＜0.05），见图2。

图2 直肠癌组织PANDAR mRNA高、低表达患者的Kaplan-Meier生存曲线

3 讨论

从调控肿瘤增殖、侵袭、转移以及化疗耐药等方面入手，目前临床上已证实许多LncRNA具有促癌作用[6-7]，LncRNA PANDAR就是其中之一。研究表明，PANDAR在结直肠癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织，且高表达患者的预后较差[5]。另有研究表明，PANDAR在肝癌及胃癌组织中呈高表达，且与患者不良预后密切相关[8-9]。此外，PANDAR又能通过抑制p16（INK4A）来调控乳腺癌细胞的生长周期，进而促进分化[10]。然而，目前关于PANDAR与直肠癌MRI、组织病理分化及预后等关系仍处于探索阶段。因此，本研究对直肠癌患者PANDAR mRNA表达与临床病理特征及预后的关系作一探讨。

本研究首先证实PANDAR在直肠癌组织中呈高表达，然后以120例患者直肠癌组织中PANDAR表达水平的截断值为界值划分PANDAR高、低表达组，进而比较直肠癌组织PANDAR mRNA高、低表达患者临床病理特征及预后。本研究结果显示，直肠癌组织PANDAR mRNA高、低表达患者在远处转移、淋巴结转移、肿瘤浸润深度、MRI-T分期、MRI-N分期等方面比较，差异均有统计学意义；在性别、年龄、肿瘤直径、肿瘤组织分化、MRI-环周切缘状态等方面比较，差异均无统计学意义。前期已有不少研究从临床差异表达入手来探索PANDAR的促癌功能[11-12]，与本研究结果一致。值得一提的是，本研究探索了PANDAR mRNA表达水平与影像组学的关系，进一步对直肠癌患者PANDAR mRNA表达的影响因素进行分析，结果显示MRI-T分期、MRI-N分期是直肠癌患者PANDAR mRNA表达的独立影响因素。目前尚无相关研究报道，这为今后深入研究LncRNA PANDAR与影像组学的相关性提供了参考。所有患者术后随访48个月，笔者发现PANDAR mRNA低表达患者4年总体生存率明显高于PANDAR mRNA高表达者，差异有统计学意义。

综上所述，PANDAR在直肠癌组织中呈高表达，与MRI-T分期、MRI-N分期等临床病理特征及预后相关。