2018—2020年新疆地区哺乳仔猪主要病毒性传染病的抗体检测与分析

常军帅，段付霜，刘若彤，屈勇刚，梁 晏，李 娜，王紫阳，赵 玉，邱国斌

（1.石河子大学动物科技学院，新疆 石河子 832003；2.动物疾病防控兵团重点实验室，新疆 石河子 832003；3.第四师畜牧兽医站，新疆 可克达拉 831304）

哺乳仔猪指出生至断奶前以母乳为主要营养来源的仔猪，在我国仔猪断奶日龄通常为21～28日龄[1]。该阶段的猪群具有怕冷、缺乏先天免疫力、消化功能不全等缺点，在饲养管理过程中，死亡率可高达20%，哺乳仔猪的存活率及生长速度，直接影响着猪场的经济效益[2]。疫病是导致哺乳仔猪死亡的主要原因。经调查得出，由疾病导致的死亡数占哺乳仔猪死亡数的25%，严重阻碍了我国养猪业的发展[2]。病毒性传染病对哺乳仔猪群健康存在巨大威胁：猪瘟是由猪瘟病毒（classical swine fever virus, CSFV）引起的一种既可水平传播、又可垂直传播的高度接触性和致死性病毒传染病，剖检可见实质性器官有出血点，回盲瓣处淋巴结呈“纽扣状”坏死，哺乳仔猪患病后死亡率达50%，未死亡的猪生长缓慢，变为僵猪，在以后的生长过程中不定期向外排毒[3]；伪狂犬病是由疱疹病毒科、疱疹病毒属的伪狂犬病病毒（PRV）引起的，患病猪出现明显的神经症状，伴随腹泻发生，该病可导致15日龄以内的仔猪出现100%的死亡率，剖检可见脑出血、心肌炎等典型症状[4]；猪圆环病毒病是由圆环病毒2型（PCV2）引起的免疫抑制性疾病，该病会导致猪群免疫力低下、疫苗免疫效果下降，严重威胁着哺乳仔猪的健康；猪蓝耳病在我国被列为二类动物疫病，哺乳仔猪患病后呼吸困难、腹泻、体温升高，死亡率达25%[5]。针对这些病毒性传染病，生产中主要采用母猪产前加强免疫，通过提高母源抗体及超前免疫两种方法来增强哺乳仔猪的抗体水平，但对于抗体水平的高低，需及时评价，以便更好地指导生产。

本试验采用ELISA抗体检测方法，对采集到的哺乳仔猪血清进行了CSFV、PRRSV、PRV-gB、PRV-gE、PCV2的抗体检测，以期为新疆地区哺乳仔猪的健康养殖提供帮助。

1 材料

1.1 样品

2018年1月至2020年12月期间从新疆石河子市、巴音郭楞蒙古自治州、伊犁、塔城地区、奎屯市、阿克苏市，随机采集270份血清样品，送至石河子大学动物科技学院传染病实验室进行检测。

1.2 材料和仪器

猪瘟病毒（CSFV）ELISA抗体检测试剂盒、猪伪狂犬病病毒gB（PRV-gB）ELISA抗体检测试剂盒、蓝耳病病毒（PRRSV）ELISA抗体检测试剂盒、猪伪狂犬病病毒gE（PRV-gE）ELISA检测试剂盒均购自北京爱德士元亨生物科技有限公司；猪圆环病毒2型（PCV2）ELISA抗体酶联免疫检测试剂盒，购自哈尔滨元亨生物药业有限公司；兽用一次性采血器5 mL为美康实业有限公司产品；自动酶标仪、微量移液器购自赛默飞世尔科技公司。

2 方法

2.1 样品处理

将哺乳仔猪固定好后，使用酒精棉球对前腔静脉窝消毒，用无菌采血器45°进针，采集5 mL血液，室温下斜置30 min，收集血清，放于4 ℃保存（8 d以内）。

2.2 ELISA检测方法

根据不同检测项目的说明书，进行CSFV、PRV-gB、PRV-gE、PRRSV、PCV2的抗体检测。注意各个检测过程中的温度及避光要求。

2.3 结果判定

CSFV：试验判定成立后，计算阻断率。阻断率（%）=（阴性OD450平均值-样品OD450平均值）/阴性OD450均值。当阻断率≤30%时，为阴性；当30%＜阻断率＜40%时，为可疑；当阻断率≥40%时，为阳性。

PRV-gB、PRV-gE：当阴性OD650平均值-阳性OD650平均值≥0.3时，试验成立。通过计算S/N=样品OD650/阴性OD650，进行结果判定。当S/N＞0.70时，为阴性；当0.60＜S/N≤0.70时，为可疑；当S/N≤0.60时，为阳性。

PCV2：试验成立的条件是阴性对照的OD450均值≤0.15，阳性对照OD450均值≥0.60。若不符合，需再次进行试验。临界值=阳性对照OD450均值×1/4。被检样品OD450值＜临界值，判定为抗体阴性；被检样品OD450值≥临界值，则判定为抗体阳性。

PRRSV：试验成立后，计算S/P值。其中S=样品OD650平均值-阴性对照OD650平均值，P=阳性对照OD650平均值-阴性对照OD650平均值。S/P≥0.40为阳性，S/P＜0.40判为阴性。

当出现可疑时，需再次进行检测。再次检测时不符合阳性标准，统一安排阴性处理（PRV-gE相反）。

2.4 数据分析

使用SPSS 20.0对数据进行统计分析，计算总体平均数。

3 结果

3.1 CSFV抗体检测结果

在2018—2020年中，新疆地区哺乳仔猪整体CSFV抗体阳性率为77.35%（140/181），其中2018年、2019年、2020年的CSFV抗体阳性率分别是92.00%（23/25）、75.31%（61/81）、74.67%（56/75）。结果见表1。

表1 不同年份的哺乳仔猪CSFV抗体检测结果

3.2 PRV-gB抗体检测结果

在2018—2020年中，新疆地区哺乳仔猪整体PRV-gB抗体阳性率为90.29%（158/175），其中2018年、2019年、2020年的PRV-gB抗体阳性率分别是97.50%（39/40）、87.50%（70/80）、89.09%（49/55）。结果见表2。

表2 不同年份的哺乳仔猪PRV-gB抗体检测结果

3.3 PRV-gE抗体检测结果

在2018—2020年中，新疆地区哺乳仔猪整体PRV-gE抗体阳性率为26.26%（52/198），其中2018年、2019年、2020年的PRV-gE抗体阳性率分别是30.00%（12/40）、31.25%（25/80）、19.23%（15/78）。结果见表3。

表3 不同年份的哺乳仔猪PRV-gE抗体检测结果

3.4 PCV2抗体检测结果

由表4可知，在2018—2020年中，新疆地区哺乳仔猪整体PCV2抗体阳性率为57.30%（106/185），其中2018年、2019年、2020年的PCV2抗体阳性率分别是54.55%（30/55）、44.00%（22/50）、67.50%（54/80）。在平均OD450值中，2019年的最低，为0.46；2020年最高，为0.91。

表4 不同年份的哺乳仔猪PCV2抗体检测结果

3.5 PRRSV抗体检测结果

由表5可知，在2018—2020年中，新疆地区哺乳仔猪整体PRRSV抗体阳性率为76.30%（206/270），其中2018年、2019年、2020年的PRRSV抗体阳性率分别是86.67%（26/30）、80.00%（60/75）、72.73%（120/165）。在平均S/P值中，2020年的最低，为1.01；2019年最高，为1.73。

表5 不同年份的哺乳仔猪PRRSV抗体检测结果

4 讨论与分析

断奶仔猪的健康状况直接影响着后续保育阶段和肥育阶段的饲养管理，而多数情况下由于不知道仔猪体内母源抗体的水平，哺乳仔猪免疫过程中就会出现母源抗体干扰疫苗免疫效果或疫苗免疫不及时造成的抗体水平太低不足以保护哺乳仔猪，所以采用ELISA方法对哺乳仔猪进行了主要病毒性传染病的抗体检测。2018—2020年，新疆地区哺乳仔猪整体CSFV和PRRSV抗体阳性率分别为77.35%（140/181）和76.30%（206/270），高于国家规定的70%，说明该地区哺乳仔猪CSFV和PRRSV免疫工作合格[6]。范庆红[6]曾对山东省莱州市6个规模猪场的119份哺乳仔猪血清样品通过ELISA方法进行CSFV和PRRSV免疫抗体水平检测，阳性率分别为86.55%（103/119）和89.92%（107/119）；史洪岩等[7]得出北京密云地区规模化猪场的哺乳仔猪CSFV和PRRSV抗体水平阳性率分别为88.57%（31/35）和91.43%（32/35），新疆地区哺乳仔猪的CSFV和PRRSV抗体水平明显低于这两地，导致这种现象的原因可能是由猪群的饲养环境、免疫情况及疫苗有效性等因素引起的，可对妊娠母猪做好疫病的免疫工作，保证新生仔猪有较高的母源抗体水平。

2018—2020年，新疆地区哺乳仔猪整体PRV-gB和PRV-gE抗体阳性率分别为90.29%（158/175）和26.26%（52/198）。PRV-gB抗体阳性率超过了90%，在生产中常采用仔猪出生后3日龄滴鼻免疫伪狂犬病疫苗，由于滴鼻免疫不受母源抗体干扰，能刺激机体的黏膜免疫系统产生保护力[8]。PRV-gE抗体阳性率的出现，说明该地区存在PRV野毒感染情况。PRV可通过妊娠母猪垂直侵入胎儿体内，推测这是导致哺乳仔猪群出现PRV-gE抗体阳性率的主要原因[9]。

2018—2020年，新疆地区哺乳仔猪整体PCV2抗体阳性率为57.30%（106/185），低于国家规定的70%，可针对产前母猪加强免疫，提高哺乳仔猪整体的免疫效果。总之，针对哺乳仔猪，不仅要做好免疫接种工作，还要从饲养管理方面入手，减少去势等应激，才能使仔猪更快更健康的成长。