羊水染色体核型分析在产前诊断中的应用

张庆娥 李敏(通信作者) 周月云 董晶晶

224007 盐城市妇幼保健院产前诊断中心，江苏盐城

染色体病在临床中较为常见，通常是先天性染色体数目或结构异常(包括染色体片段缺失、重复和异位等)，新生儿发病后常伴多发畸形、智力低下等表现。染色体病会给胎儿及其家庭带来较大影响，不利于胎儿健康和发育。通常染色体病可以通过产前检查进行筛查，避免新生儿出生后携带此病。研究发现，染色体病病情较轻时，胎儿没有明显表现，不易被发现，一旦病情发展严重，胎儿可能尚未娩出就会死亡，即使分娩成功，也会在数小时内死亡[1-2]。染色体病筛查是产前检查的重点内容，临床方法较多，如红细胞渗透、血红蛋白电泳等。染色体病的产前诊断是胎儿出生前，在子宫内对胚胎的发育状态进行检测诊断，分析染色体核型，辨别染色体病患儿[3-4]。羊膜穿刺术进行染色体核型分析是预防和治疗染色体疾病最经济可行的方法[5]。本研究探讨羊水染色体核型分析在产前诊断中的应用效果，报告如下。

资料与方法

选取2017年1月-2018年12月于盐城市妇幼保健医院产前诊断中心进行产前体检孕妇503例为研究对象。初产妇383 例，经产妇220 例；年龄20～46 岁，平均(31.46±1.87)岁；孕周18～24 周，平均(22.03±1.26)周；孕次1～4次，平均(1.38±0.31)次。本次研究通过医学伦理委员会批准。

纳入标准：①育龄期女性；②孕妇在接受检查诊断和随访调查期间，意识清晰、自主配合；③孕妇均有产前诊断指征[6]；④孕妇临床资料完整，无中途退出情况；⑤孕妇对本研究知情同意。

排除指标：①合并恶性肿瘤者；②合并严重器质性病变者；③依从性差者；④有羊膜腔穿刺禁忌证的高龄孕妇，如先兆流产、有感染征象、术前2次测量体温(腋温)＞37.2°C、有出血倾向(血小板≤70×109/L，凝血功能异常)、中央性前置胎盘、前置或低置胎盘有出血现象；⑤有妊娠合并症及产科并发症的孕妇[7]。

方法：①羊膜穿刺术前，完善孕妇基本情况，包括血常规、血型、凝血四项(凝血酶原时间、纤维蛋白原时间、活化部分凝血活酶时间和凝血酶时间)、肝肾功能、乙肝两对半检查(乙型肝炎病毒表面抗原、乙型肝炎病毒表面抗体、乙型肝炎病毒e 抗原、乙型肝炎病毒e抗体、乙型肝炎病毒核心抗体)、丙型肝炎抗体、艾滋病抗体、快速血清反应素试验、梅毒螺旋体颗粒凝集试验等多项检查，结合产科超声准确了解孕龄、胎儿数量、羊水量、胎盘位置等，确保羊水穿刺成功。②对孕妇进行羊水穿刺指导，指导孕妇排空膀胱，平躺于穿刺床上，双手置于头部两侧。彩色多普勒超声常规检查胎儿，确定穿刺部位、穿刺深度。确定针的角度和深度后，穿刺针以最快速度准确穿过腹壁和子宫肌层进入羊膜腔，拔出针芯。取羊水，控制量约2 mL，然后丢弃，另一注射器取羊水20 mL，并及时检查。取针后，超声再次观察胎心率。抽取的羊水进行离心，羊水中细胞进行接种，按3∶1 的比例接种于Mc Coy's 5A 培养基和胎牛血清混合培养基中。③细胞原位培养，包括收集细胞、切片和G显带显微镜下核型分析。

观察指标：①观察分析羊水细胞正常和异常核型，对异常核型进行分类，主要包括染色体数目异常和染色体结构异常。异常核型占比=异常核型例数/染色体结构异常例数×100%。②观察不同适应证羊膜穿刺术染色体检查结果，记录唐氏筛查高风险、无创胎儿DNA 高风险、高龄(预期年龄35岁)、B 超显示多发畸形数目，阳性检出率=不同适应证羊膜穿刺术染色体异常例数/不同适应证例数×100%。

统计学处理：数据应用SPSS 20.0 统计学软件予以处理；计数资料以[n(%)]表示，比较采用χ2检验；P＜0.05为差异有统计学意义。

结 果

羊水细胞异常染色体核型：对503 例孕妇进行羊水穿刺，取足量羊水进行羊水培养，检出异常核型66例，染色体数目异常55 例，染色体结构异常11 例。两种异常类型比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

表1 羊水细胞异常染色体核型[n(%)]

不同适应证羊膜穿刺术染色体检查结果：唐氏筛查高风险70 例，异常4 例，阳性检出率为5.71%；无创胎儿DNA 高风险85 例，异常例数38 例，阳性检出率为44.71%；高龄171 例，异常例数12 例，阳性检出率为7.02%；B 超异常45 例，异常例数4 例，阳性检出率为8.89%；其他132 例，异常例数8 例，阳性检出率为6.06%。见表2。

表2 不同适应证羊膜穿刺术染色体检查结果分析[n(%)]

讨 论

新生儿缺陷是指新生儿出生时存在的缺陷，包括身体结构和功能的异常。新生儿缺陷种类较多，如先天畸形、先天性代谢病、先天性智力低下等，诱发因素主要包括遗传因素和环境因素，最常见的遗传因素是染色体异常，积极采取有效措施预防和治疗，才能实现优生优育[8-9]。关于胎儿染色体病的检查诊断是临床研究中的重点内容，针对孕妇进行产前检查，联合应用血红蛋白电泳法、羊水穿刺等可以得到较为准确的检测结果。有学者提出，联合应用核型分析检查诊断，可有效分析胎儿染色体情况，检测胎儿染色体是否存在异常，还可联合影像学成像结果进一步观察，判断胎儿是否存在染色体疾病[10-11]。

羊水穿刺术提取羊水细胞进行染色体核型分析是产科中常见的优生检查方法，利用率相对较高，可以起到产前诊断的作用。羊水穿刺提取羊水细胞进行染色体核型分析操作相对简单，准确率高，并发症少[12]。在超声穿刺的有效引导下，穿刺效果良好，无流产、感染、胎儿丢失等并发症，充分保障了安全性。本研究结果显示，共有66例胎儿属于异常核型，异常率为13.12%，远高于相关文献数据，可能与样本选取数量、地区差异等因素有关，亦与无创产前DNA检测筛查后羊膜穿刺术提高阳性率有关[13]。无创产前DNA检测高风险、B超异常、高龄等产前诊断指征的孕妇更易出现羊水细胞染色体核型异常，应加强上述产前诊断指征孕妇检查，以便指导新生儿染色体病的防治工作。但无创产前DNA 检测目前仅是接近于诊断的筛查，具有假阳性和假阴性。建议具有产前诊断指征的孕妇，需慎重考虑，行羊水穿刺胎儿染色体核型分析，避免胎儿异常漏诊[14]。

核型分析是细胞遗传学的金标准，在产前诊断中占有一定地位，但也有其不足之处。常规核型分析能检查出＞10 Mb 的异常，目前的高分辨核型，可检出＞5 Mb 的异常，需要培养、分析，报告周期长，有培养失败的风险。产前诊断技术近年来发展迅猛，更新快，已从传统的核型分析到染色体微阵列技术及全外显子技术。染色体微阵列技术可在全基因组内检测100 Kb 的微重复和微缺失，不需要培养，出报告周期短，在产前诊断中应用越来越重要，特别是B超提示胎儿异常等染色体微阵列技术尤为重要[15]。

综上所述，羊水染色体核型分析在产前诊断中应用，可有效降低缺陷儿的出生率，提高生育质量，应用价值较高。