花黄合剂制备工艺及质量控制研究

谢嘉驰 杨 宁 罗纯清 罗黎霞

（湘潭市中医医院药学部，湖南 湘潭 411100）

痤疮，中医称之为“粉刺”“酒刺”，临床多见为粉刺、丘疹和脓疱，严重时可伴有结节、囊肿等皮损，是一种常见的慢性炎症皮肤病，多好发于青春期男女颜面部，严重影响了患者身心健康和生活质量[1-3]。花黄合剂为湘潭市中医院临床经验方，由山银花、连翘、黄芩、黄连等8 味药组成，具有凉血解毒、散结消肿功效，用于痤疮具有很好的疗效。原方汤剂内服临床疗效较好，但有服用量大、携带不便、不宜大量生产，且汤剂味苦等缺点。另丸剂、片剂、胶囊剂等固体制剂溶散、释放药物缓慢，与用药目的不相符合，故将本方剂制成合剂，具有疗效快、剂量较小、口感好、便于服用、制备方法简单等优点，同时还保持了原有汤剂原疗效[4，5]。

本课题以浸膏得率为主要考察指标，采用单因素方法优选提取工艺；以辅料的选择、抑菌剂、灭菌工艺进行成型工艺考察[6-11]。为有效控制花黄合剂的质量，根据药品质量标准的要求，参照相关文献[12-14]摸索方法。建立可行的鉴别方法，为中药制剂质量控制提供可靠的参考依据，对下一步临床前实验研究奠定基础。

1 仪器与材料

仪器：DZF-6090AB型电热真空干燥箱（天津工兴实验室仪器有限公司）；STX1202ZH 电子天平[奥豪斯仪器（常州）有限公司]；Good see-Ⅱ型暗箱式薄层色谱摄影仪（上海科哲生化科技有限公司）；CX23 OLYMPUS显微镜[奥林巴斯（广州）工业有限公司]。

试剂：正丁醇、甲醇、98%甲酸、乙酸乙酯、乙酸、无水乙醇、95%乙醇均由国药集团化学试剂有限公司购买；硫酸、三氯甲烷均由湖南汇虹试剂有限公司购买；盐酸由株洲市星空化玻有限责任公司购买；试剂均为分析纯。

试药：连翘对照药材（批号：120908-201817）、黄芩对照药材（批号：120955-201810）、黄连对照药材（批号：120913-201611）均由中国食品药品检定研究院提供。连翘、黄芩、黄连等8 种中药均由岳阳天香中药饮片有限公司购买，经湘潭市中医医院药学部钟喜光副教授鉴定，均符合2015 版《中华人民共和国药典》（简称《中国药典》）规定。

2 方法与结果

2.1 水提取工艺研究

2.1.1 单因素考察 将浸膏得率作为考察指标，采用单因素法考察煎煮次数、加水量、煎煮时间对浸膏提取的影响。

2.1.1.1 煎煮次数考查 按处方配比称取牡丹皮、赤芍、知母、连翘等8 味（共70 g）中药饮片，加水煎煮3 次，第1 次加10 倍量水、煎煮2 h，第2 次加8 倍量水、煎煮2 h，第3 次加6 倍量水、煎煮2 h。将每次提取液滤过，分别减压浓缩至相对密度1.10（60 ℃），测定3 次煎煮的浸膏重量。浸膏得率=（W/W1）× 100%。其中，W指浸膏重量（g），W1 指饮片总量（g）。结果表明，以浸膏得率为考查指标，第3 次煎煮浸膏得率占总浸膏得率的比例为7.26%，说明煎煮2次已基本提取完全，故采用煎煮2 次的工艺。见表1。

表1 花黄合剂煎煮次数的考查 (%)

2.1.1.2 加水量考查 按照处方配比法称取牡丹皮、赤芍、知母、连翘等8 味（共70 g）的饮片，各3 份，分别加水煎煮2 次，第1 次加水煎煮2 h，第2 次加水煎煮2 h。煎煮液滤过，滤液减压后经过浓缩后达到相对密度1.10（60 ℃），测不同加水量实验的浸膏得率。结果表明，以浸膏得率为考查指标，加水量为10、8倍的浸膏得率与加水量为8、6 倍的浸膏得率相差不大，从省时节能考虑选择加水煎煮2 次，第1 次加8倍量水，第2 次加6 倍量水。见表2。

表2 花黄合剂加水量的考查

2.1.1.3 煎煮时间考查 按处方配比称取牡丹皮、赤芍、知母、连翘等8 味（共70 g）中药饮片，各3 份，加水煎煮2 次，第1 次加8 倍量水，第2 次加6 倍量水，提取液滤过，减压浓缩，至相对密度1.10（60 ℃），测不同煎煮时间的浸膏得率。结果表明，以浸膏得率为考查指标，煎煮时间为2.5 h、1.5 h 的浸膏得率与煎煮时间为2 h、1 h 的浸膏得率的相差较大，为了节约成本，故本品加水煎煮时间确定为加水煎煮2 次，第1 次加8 倍量水，煎煮2 h；第2 次加6倍量水，煎煮1 h。见表3。

表3 花黄合剂煎煮时间的考查

2.2 成型工艺

2.2.1 辅料的选择 该制剂为合剂，水煎煮提取浓缩至相对密度为1.10（60 ℃）的清膏。由于处方中含有大黄、黄连、黄芩等几味药，药液味苦，故选择《中国药典》规定辅料蔗糖、甜菊糖苷作为矫味剂改善口感，增加患者口服适应性。现取一定的清膏和矫味剂设计了3 个不同的清膏和矫味剂配方，将清膏和矫味剂混匀，以口感为考查指标，结果表明，配方2 口感最佳，故选配方2 作为本品成型工艺的辅料配方。见表4。

表4 花黄合剂辅料用量的选择

2.2.2 抑菌剂选择 按照《中国药典》2020 版四部制剂通则0181 合剂中的有关规定，合剂可选择添加抑菌剂，一般使用苯甲酸或山梨酸的用量比例应当不得超过0.3%（其钾盐、钠盐的用量分别按酸计），其中山梨酸抑菌效果强于苯甲酸，故本制剂选择山梨酸钾作为抑菌剂，加入量为0.2%。

2.2.3 灭菌工艺 为保证符合卫生标准，故选择药液用煮沸灭菌方法进行灭菌。本品拟定灭菌方法为配料混合后煮沸灭菌（100 ℃，30 min）。经考察，样品采用煮沸灭菌后的卫生学检查，均符合规定。

2.3 质量控制

2.3.1 显微鉴别 取药液适量，放于载玻片上，滴加1～2 滴水合氯醛试液，搅拌均匀，加热透化后，盖上盖玻片，除去溢出的液体，放于显微镜载物台上在10倍镜和40 倍镜下观察。黄连可见鲜黄色的石细胞单个散在，呈长方形，木栓细胞中有成群草酸钙方晶；大黄草酸钙簇晶直径130 μ m，网纹导管非木化；山银花的腺毛较少，头部大多呈圆盘形，直径188 μ m，非腺毛单细胞，长210 μ m，花粉粒，直径82 μ m；知母的草酸钙针晶成束或散在，长26～110 μ m，偏光下针晶呈亮黄间青色[15-19]。

2.3.2 薄层鉴别

2.3.2.1 连翘薄层鉴别 取50 mL内容物，用20 mL正丁醇振摇萃取3 次，合并正丁醇液，再用20 mL 氨试液洗涤2 次，除去氨试液，蒸干正丁醇液，加1 mL甲醇使残渣溶解，作为供试品溶液。另取连翘对照药材1 g，加水40 mL，置水浴中加热1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加20 mL 乙醇，加热回流30 min，滤过，滤液蒸干，加1 mL乙醇使残渣溶解，作为对照药材溶液。同供试品溶液制备方法制备缺连翘的阴性样品溶液。参照2015 版《中国药典》[20]，分别吸取上述3 种溶液各10 μ L，点于同一硅胶板上，以三氯甲烷-甲醇（8∶1）展开，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃下加热至斑点显色清晰，在日光下检视[21]。见图1。

图1 连翘TLC

2.3.2.2 黄芩薄层鉴别 取10 mL 内容物，蒸干，加40 mL甲醇，加热回流30 min，过滤，蒸干，加水15 mL将残渣溶解，滤过，滤液用稀盐酸调节pH至3.0～3.5，每次20 mL，用乙酸乙酯振摇萃取2 次，将萃取液合并蒸干，加1 mL无水乙醇使残渣溶解，作为供试品溶液。另取黄芩对照药材0.5 g 加水50 mL，煎煮，滤过，滤液用稀盐酸调节pH值至3.0～3.5，同法制成对照药材溶液。同供试品溶液制备方法制备缺黄芩的阴性样品溶液。参照2015 版《中国药典》[20]，分别吸取上述3 种溶液各10 μ L，点于同一硅胶板上，以乙酸乙酯-丁酮-冰醋酸-水（5∶2∶1∶1）展开，晾干，喷以1%三氯化铁乙醇溶液在日光下检视[22]。见图2。

图2 黄芩TLC

2.3.2.3 黄连薄层鉴别 取12 mL 内容物，蒸干，加60 mL甲醇，超声20 min，过滤，蒸干，加1 mL甲醇将残渣溶解，作为供试品溶液。另取黄连对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液。同供试品溶液制备方法制备缺黄连的阴性样品溶液。参照2015 版《中国药典》[20]，分别吸取上述3 种溶液各3 μ L，点于同一硅胶板上，以正丁醇-冰乙酸-水（7∶1∶2）展开，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视[23]。见图3。

图3 黄连TLC

3 讨论

花黄合剂方系湘潭市中医院内科医师李琳教授10多年的临床经验总结，治疗效果明显，未见不良反应。但是由于汤剂存在携带、贮存不便，服用剂量无法准确掌握等问题。因此，需改变服用剂型[24]。而合剂正好具有携带、贮存方便、服用量准确等优势，最后选择合剂进行研究。

本实验选择提取浸膏所得率作为评价指标，通过单因素方法考查提取浸膏的煎煮次数、加水量、煎煮时间，选择最优提取工艺。最后确定煎煮2 次，第1次添加8 倍量水，煎煮2 h；第2 次添加6 倍量水，煎煮1 h。合并2 次滤液，浓缩至清膏。考虑药液味苦，故选择蔗糖、甜菊糖苷作为矫味剂改善口感，增加患者口服适应性。以口感为考查指标，选择合适的矫味剂，确定最佳口感。

本实验建立的显微鉴别方法显微特征明显，可控性强。进行显微评价时，必须注意制作细节，否则很容易影响到显微观察。建立了花黄合剂中连翘、黄连、黄芩的薄层色谱鉴别方法，该方法简单、准确度高、斑点明显、再现性好、阴性对照无干扰，所以此方法可以作为该制剂的质量管控标准。通过实验，更好地控制其产品质量，促进医院制剂质量标准的提高。

本实验针对花黄合剂的制备工艺和质量控制进行了系统性的研究，为医院制剂开发工作提供了基础性的实验证明依据，对于拓展我国中药方剂在医学领域的临床运用范围有着重要的指导意义。