市售天麻胶囊的质量评价*

王发英，吴查青，毛菊华，余秋花，王伟影

(丽水市质量检验检测研究院，浙江 丽水 323000)

天麻胶囊是由天麻、羌活、独活、杜仲(盐炒)、牛膝、粉萆薢、附子(制)、当归、地黄、玄参等10味药材组成，具有祛风除湿、疏经通络、活血止痛等功效，临床用于肢体拘挛、手足麻木、腰腿酸痛[1]。天麻和羌活为处方中主要药物，天麻具有息风止痉，平抑肝阳，祛风通络之功效，其主要有效成分为天麻素[2-4]。羌活具有解表散寒，祛风除湿，止痛之功效。现代药理研究表明，羌活具有抑制癌细胞增殖、抗氧化、抗炎、抗心律失常、免疫抑制等作用[5]。香豆素、烯炔、酚酸和酚酸酯类化合物是羌活中的主要成分类型，香豆素类异欧前胡素和羌活醇是《中国药典》中的指标性成分，具有较强的抗炎活性；紫花前胡苷为镇痛抗炎的有效单体化合物[6]。酚酸酯类的阿魏酸苯乙醇酯是羌活中抗氧化和抗血栓的主要活性成分[7]。通过国家局网站批准文号查询，全国范围内天麻胶囊的生产企业共130家，批准文号133个。现行标准为国家食品药品监督管理局国家药品标准WS3-B-0500-91-2004。本文拟通过法定标准与含量测定(天麻素、羌活醇、异欧前胡素、紫花前胡苷和阿魏酸苯乙醇酯)对市售天麻胶囊进行质量调研，为天麻胶囊的质量评价与临床应用提供参考数据。

1 仪器与试药

1.1 仪 器

Agilent 1260高效液相色谱仪，美国安捷伦公司；XS105DU、XS104电子天平，瑞士梅特勒公司；DL-360D智能超声波清洗器，上海精宏实验设备有限公司；Milli-Q Advantage A10超纯水仪，默克。

1.2 试 剂

天麻素对照品(批号：110807-202010，质量分数95.5%)、羌活醇对照品(批号：111820-201705，质量分数99.9%)、异欧前胡素对照品(批号：110827-201812，质量分数99.2%)、紫花前胡苷对照品(批号：11821-201604，质量分数99.6%)，均购自中国食品药品检定研究院；阿魏酸苯乙醇酯对照品(批号：010037-202009，质量分数≥98%)购自上海鸿永生物科技有限公司；甲醇、乙腈(色谱纯，默克)，磷酸(色谱纯，麦克林)，其余试剂均为分析纯，水为自制超纯水。

天麻胶囊，市场随机购入40批次，涉及18家生产企业。样品信息见表1。

表1 天麻胶囊基本信息

2 方法与结果

2.1 法定标准检验

现行法定标准国家食品药品监督管理局国家药品标准WS3-B-0500-91-2004，检验项目包括性状、薄层鉴别、高效液相鉴别、装量差异、水分、微生物限度。按照法定标准检验，40批样品均符合所执行的标准规定，合格率为100%。

2.2 含量测定 天麻素

2.2.1 色谱条件[8-9]

色谱柱：Inertsil ODS-3 C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)(日本岛津公司)；柱温：30 ℃；流速：1.0 mL/min；检测波长：220 nm；流动相：乙腈-0.2%磷酸溶液(3∶97)；进样量：10 μL。

2.2.2 对照品溶液的制备

取天麻素对照品适量，精密称定，加50%甲醇制成每1 mL含1.020 mg的溶液，作为对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液的制备

取天麻胶囊装量差异项下的内容物，混匀，研细，取1.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇20 mL，浸泡过夜，超声处理40 min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

2.2.4 阴性对照溶液的制备

以相同的处方比例制得不含天麻的样品。按“2.2.3”项下的制备方法制成阴性对照溶液。

2.2.5 系统适用性试验

分别精密吸取对照品、供试品、阴性对照溶液各10 μL，按“2.2.1”项下色谱条件进样，记录色谱图，见图1。由图1可见，在该色谱条件下，天麻素与相邻杂质峰均达到良好分离，分离度大于1.5，阴性无干扰，理论塔板数按天麻素计算均在10 000以上。

图1 HPLC图谱

2.2.6 线性关系考察

精密量取“2.2.2”项下的对照品溶液1 mL，分别置于5 mL、10 mL、20 mL、50 mL、100 mL的量瓶中，加50%的甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，制成系列浓度标准溶液，分别进样测定，以峰面积(Y)对浓度(X，μg/mL)进行线性回归，得回归方程Y=175 53X+6.362 4，r=1.000 0。结果表明天麻素在10.20～204.0 μg/mL浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.2.7 精密度试验

精密吸取同一对照品溶液10 μL，按“2.2.1”项下的色谱条件，连续进样6次，记录峰面积，计算峰面积RSD为0.86%，结果显示仪器精密度良好。

2.2.8 重复性试验

取同一厂家同一批号的天麻胶囊6份，按“2.2.3”项下供试品溶液制备方法制备并依法测定，结果供试品中天麻素含量为0.24 mg/粒，RSD为1.65%。

2.2.9 稳定性试验

取同一天麻胶囊供试品溶液，分别于0、8、16、24、36、48 h进样，进样6次，记录峰面积，计算峰面积RSD为1.06%，表明供试品溶液48 h内稳定性良好。

2.2.10 回收率试验

取已知含量的天麻胶囊(编号1)，共6份，各取0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，均精密加入“2.2.2”项下的对照品溶液1 mL，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件测定，计算天麻素的含量，计算回收率，结果其回收率平均值98.92%，RSD=1.07%(n=6)。

2.2.11 样品含量测定

取表1中的40批样品，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件测定，计算天麻素的含量，结果见表2。

表2 天麻胶囊中天麻素、紫花前胡苷、阿魏酸苯乙醇酯、羌活醇、异欧前胡素的测定结果(n=2)

2.3 含量测定(羌活醇、异欧前胡素、紫花前胡苷、阿魏酸苯乙醇酯)

2.3.1 色谱条件[10-12]

色谱柱：Inertsil ODS-3 C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)(日本岛津公司)；柱温：30 ℃；流速：1.0 mL·min-1；检测波长：210 nm；流动相为乙腈-0.2%磷酸溶液，梯度洗脱：0～25 min，15% A；25～45 min，38%～50% A；45～55 min，50%～75% A；55～70 min，75%～85% A；70～80 min，85% A；进样量：10 μL。

2.3.2 混合对照品贮备液的配制

精密称取紫花前胡苷、阿魏酸苯乙醇酯、羌活醇、异欧前胡素对照品适量，分别加70%甲醇制成每1 mL含1 690.0 μg，1 562.0 μg，1 360.0 μg，1 305.0 μg溶液，作为对照品贮备液，分别精密量取各对照品储备液适量，置同一10 mL量瓶中，加70%甲醇制成每1 mL含紫花前胡苷、阿魏酸苯乙醇酯、羌活醇、异欧前胡素分别为422.5 μg，312.4 μg，272.0 μg，261.0 μg的溶液，作为混合对照品溶液。

2.3.3 供试品溶液的配制

取天麻胶囊装量差异项下的内容物，混匀，研细，取1.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇20 mL，浸泡过夜，超声处理40 min，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

2.3.4 阴性对照溶液的制备

以相同的处方比例制得不含羌活的样品。按“2.3.3”项下的制备方法制成阴性对照溶液。

2.3.5 系统适用性试验

分别精密吸取对照品、供试品、阴性对照溶液各10 μL，按“2.3.1”项下色谱条件进样，记录色谱图，见图2。由图2可见，在该色谱条件下，紫花前胡苷、阿魏酸苯乙醇酯、羌活醇、异欧前胡素与其他成分可达到基线分离，分离度大于1.5，阴性无干扰，理论塔板数均在30 000以上，具有良好的分离效果。

图2 HPLC色谱图 A-对照品B-供试品C-阴性对照

2.3.6 线性关系考察

精密量取混合对照品溶液1.0 mL，分别置于5 mL、10 mL、50 mL、100 mL的量瓶中，加70%的甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，制成系列浓度标准溶液，分别进样测定，以峰面积(Y)对浓度(X，μg/mL)进行线性回归，得紫花前胡苷回归方程为Y=42.257 8X+2.546 2，r=0.999 9，阿魏酸苯乙醇酯回归方程为Y=27.115 3X+1.224 8，r=0.999 6，羌活醇回归方程为Y=25.852 9X-2.435 9，r=0.999 9，异欧前胡素回归方程为Y=30.919 5X-1.886 6，r=0.999 9。结果表明：紫花前胡苷、阿魏酸苯乙醇酯、羌活醇、异欧前胡素分别在4.225～422.5 μg/mL、3.124～312.4 μg/mL、2.720～272.0 μg/mL、2.610～261.0 μg/mL范围内呈良好的线性关系。

2.3.7 精密度试验

精密吸取同一混合对照品溶液10 μL，按“2.3.1”项下的色谱条件，连续进样6次，记录峰面积，计算紫花前胡苷、阿魏酸苯乙醇酯、羌活醇、异欧前胡素峰面积RSD分别为1.22%，0.65%，1.52%，0.87%，结果显示仪器精密度良好。

2.3.8 重复性试验

取同一厂家同一批号的天麻胶囊6份，按“2.3.3”项下供试品溶液制备方法制备并依法测定，结果供试品中紫花前胡苷、阿魏酸苯乙醇酯、羌活醇、异欧前胡素含量为0.321 8 mg/粒、0.877 5 mg/粒、0.131 0 mg/粒、0.555 3 mg/粒，RSD分别为1.33%、0.98%、1.56%、1.84%。

2.3.9 稳定性试验

取同一天麻胶囊供试品溶液，分别于0、8、16、24、36、48 h进样，进样6次，记录峰面积，计算紫花前胡苷、阿魏酸苯乙醇酯、羌活醇、异欧前胡素峰面积RSD分别为1.36%，1.44%，1.56%，1.81%，表明供试品溶液48 h内稳定性良好。

2.3.10 回收率试验

取已知含量的天麻胶囊(编号20)，共6份，各取0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，均精密加入紫花前胡苷对照品储备液(1 690.0 μg/mL)0.2 mL、阿魏酸苯乙醇酯对照品储备液(1 562.0 μg/mL)0.5 mL、羌活醇对照品储备液(1 360.0 μg/mL)0.1 mL、异欧前胡素对照品储备液(1 305.0 μg/mL)0.5 mL，按“2.3.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.3.1”项下色谱条件测定，计算紫花前胡苷、阿魏酸苯乙醇酯、羌活醇、异欧前胡素的含量，计算回收率，结果其回收率平均值依次为紫花前胡苷100.12%(RSD=1.38%，n=6)、阿魏酸苯乙醇酯99.02%(RSD=1.16%，n=6)、羌活醇98.89%(RSD=1.64%，n=6)、异欧前胡素99.45%(RSD=1.05%，n=6)。

2.3.11 样品含量测定

取表1中的40批样品，按“2.3.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.3.1”项下色谱条件测定，计算紫花前胡苷、阿魏酸苯乙醇酯、羌活醇、异欧前胡素的含量，结果见表2。

3 讨 论

3.1 按法定标准检验结果

按照现行法定标准检验，40批样品均符合所执行的标准规定。

在检验过程中，性状描述内容物为棕色颗粒，结果有个别样品颜色过深，颜色较深的样品用棕色描述欠妥。发现薄层色谱鉴别独活和当归的专属性不足，易被羌活的斑点干扰，不能鉴别出是否含有独活和当归，因此该方法需要改进。

在检验完成后发现，原来粉状的胶囊内容物开始出现结块现象，不过铝塑袋没有开封的样品，状态完好，说明包装可靠，打开包装后，要及时服用。

3.2 天麻素的含量测定

40批样品中每粒含天麻素为0.019～0.323 mg，平均值为0.167 mg，最大值与最小值相差17倍。《中国药典》2020年版一部，天麻项下含量测定项下规定，天麻素和对羟基苯甲醇总量应不得少于0.25%；按照处方，每粒胶囊或片中含有天麻细粉约0.06 g，则规定天麻素含量应不得低于0.10 mg，参考其他制法类似和天麻处方用量类似的制剂，确定每粒含天麻素应不得低于0.10 mg，结果有4批样品低于天麻素含量限度要求。

3.3 紫花前胡苷、阿魏酸苯乙醇酯、羌活醇和异欧前胡素的含量测定

羌活为伞形科植物羌活NotopterygiumincisumTingexH.T.Chang或宽叶羌活NotopterygiumfranchetiiH.deBoiss.的干燥根及根茎，羌活油润，有棕色油点，气味更为浓烈，宽叶羌活颜色较浅，气味较淡。查阅相关文献[13-15]，均指明羌活中羌活醇与异欧前胡素的比值大于1，在宽叶羌活中比值小于1。根据含量测定结果表，18个厂家40批样品中只有3个厂家计8批样品使用了质量更好的羌活。

《中国药典》2020版一部羌活含量测定项下规定，羌活醇和异欧前胡素的总量应不得少于0.40%；按照处方，每粒胶囊中含有羌活细粉0.05 g，按照转移率实验的结果，天麻胶囊中羌活醇和异欧前胡素应不得少于0.2 mg/粒，则有20批样品不合格，不合格率为50%。

40批样品中每粒含紫花前胡苷为0.003～0.408 mg，平均值为0.183 mg，最大值与最小值相差136倍，表明不同生产企业的产品中紫花前胡苷含量差别极大；未检出羌活醇的有11批，其中4批未检出异欧前胡素，2批未检出阿魏酸苯乙醇酯；另外有1批未检出阿魏酸苯乙醇酯；其中羌活醇、异欧前胡素、阿魏酸苯乙醇酯均为检出的样品有2批。众多厂家的样品中没有羌活醇或许并非都是提取未完全的影响，本研究收集到的羌活饮片中，产于甘肃兰州和甘肃天水的宽叶羌活饮片羌活醇几乎未检出，因此有理由相信11批发现羌活醇含量为零的天麻胶囊中，或许使用了不合格的原料。

4 结 论

按照所执行的标准检验，40批天麻胶囊的合格率为100%，显示市售天麻胶囊的质量情况较好。但是，项目组通过对40批样品的天麻素、紫花前胡苷、阿魏酸苯乙醇酯、羌活醇和异欧前胡素含量的测定，发现不同生产企业的天麻胶囊质量差异甚大，产品稳定性、均一性较差。为了更好控制天麻胶囊的质量，建议尽快提升该品种的法定标准。本研究建立的天麻素、羌活醇、异欧前胡素、紫花前胡苷和阿魏酸苯乙醇酯指标成分含量测定的HPLC法简便、准确、重复性好，可为该制剂的质量标准升级提供参考依据。