高效液相法同时测定牙膏中阿魏酸与异阿魏酸的含量

梁雪松 刘文佳 黄 静 黄光伟

(柳州两面针股份有限公司，广西 柳州 545001)

前言

阿魏酸(ferulicacid)和异阿魏酸(isoferulicacid)是一种植物来源的酚酸，是以桂皮酸为母核的酚酸类成分的代表[1,2]。它们结构相似，是一对同分异构体[3]，且广泛存在于升麻、藁本、川芎等中药中，是这些中药的有效成分之一[4-6]。它们具有广泛的药理学作用，如抗肿瘤、抗氧化、解毒、保肝等作用，是一种多靶点的抗肿瘤天然药物，且性质稳定、毒性低[7]。

阿魏酸与异阿魏酸是两面针中药牙膏去渍中药处方的功效成分，为了保证产品的功效，需对牙膏中的功效成分进行定量测定。已有文献报道牙膏中异阿魏酸含量的测定[8]，但对同时检测牙膏中阿魏酸与异阿魏酸含量却未见报道。本研究采用高效液相法，建立牙膏中阿魏酸与异阿魏酸含量检测方法，优化检测步骤，提高检测效率。由于牙膏是一种由十几种原料组成的混合物，其中包含有表面活性剂和香精等多种成分，对分析干扰很大。为了达到理想的分离效果，作者采用甲醇-0.05%磷酸作为流动相，并以梯度洗脱的方法进行处理，并经过一系列的方法学试验，以及相关结果表明：本方法稳定、准确，重现性好，是测定同时测定牙膏中阿魏酸与异阿魏酸含量的可靠方法，为牙膏建立相应的质量控制方法提供依据；经过优化后，该方法简便、快速，提高了检测效率，减少了人力与物力成本。

1 仪器和试药

Agilent 1260高效液相色谱仪(G1311C Quat Pump VL，G1316A 1260TCC，G1315B DAD)；电子分析天平(ML204型，精度为0.0001g，梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)；高速离心机；磁力加热搅拌器(RCT B S25型，德国IKA公司)；阿魏酸对照品，中国食品药品检定研究所(含量以99.0%计)；异阿魏酸对照品，中国食品药品检定研究所(含量以99.2%计)；牙膏(规格: 120克 /支,柳州两面针股份有限公司生产)；甲醇为色谱纯；磷酸为分析纯；超纯去离子水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：迪马 DIKMA Diamonsil C18 (250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇(B)-0.05%磷酸水溶液(A)为流动相；梯度洗脱：0～15min，30%～60%B；流速为1.0mL/min，柱温40℃，检测波长为320 nm；进样体积为20 μL。按此色谱条件下测定，牙膏样品色谱图见图1。

图1 牙膏样品阿魏酸与异阿魏酸色谱图

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备

分别精密称取阿魏酸与异阿魏酸对照品10.5mg置100mL容量瓶中，加入适量甲醇，振荡溶解，再加甲醇至刻度，摇匀。制成浓度为105.00 μg/mL的阿魏酸与异阿魏酸混合标液。

2.2.2 供试品溶液制备

精密称定5g牙膏样品，加入50mL甲醇，磁力搅拌20min，转速800 rpm，使样品充分分散，离心沉淀，取上清液，用0.45 μm滤膜过滤，滤液为供试品溶液。

2.3 线性关系考察

分别精密吸取2.2.1对照品溶液1.00、3.00、5.00、7.00、10.00mL于10mL容量瓶中，以甲醇定容至10mL。依次注入液相色谱仪，测定峰面积，以对照品浓度为横坐标(X)，以峰高为纵坐标(Y)，进行线性回归，得阿魏酸的回归方程为：

Y=6375899.82 X-0.1012202

r=0.99980

异阿魏酸的回归方程为：

Y=7376794.69 X+1.9564695

r=0.99984

结果表明，阿魏酸与异阿魏酸的质量浓度在10.50～105.00 μg/mL范围内与峰高呈良好的线性关系。

2.4 精密度试验

取牙膏样品制备的供试品溶液，依前述色谱条件连续进样6次，测定阿魏酸与异阿魏酸的含量, 其结果见表1。其中阿魏酸平均值别为8.08 ppm，RSD为1.44%，异阿魏酸平均值为57.71 ppm，RSD为1.03%，结果表明, 该方法精密度良好。

2.5 重现性试验

取同一支牙膏平行称取样品6份，每份精密称定5g，分别按2.2.2制备供试品溶液，进样测定，结果见表2。测定阿魏酸与异阿魏酸的含量, 其中阿魏酸平均值别为8.02 ppm，RSD为1.89%，异阿魏酸平均值为57.20 ppm，RSD为1.44%，表明分析方法重现性良好。

表1 精密度试验结果

表2 重现性试验结果

2.6 回收率试验

精密称取已知含量的牙膏6份行样，分别精密加入一定量阿魏酸与异阿魏酸对照品溶液，搅匀样品，依照2.2.2制备供试品溶液，按上述2.1色谱条件进样测定，并计算样品加标回收率，结果见表3、表4。阿魏酸平均回收率为99.03%，RSD为1.06%，异阿魏酸平均回收率为99.46%，RSD为0.81%。实验数据表明本方法准确可靠。

表3 阿魏酸回收率试验结果

表4 异阿魏酸回收率试验结果

2.7 牙膏稳定性试验

把牙膏分别置于室温与45℃烘箱中，在 0、1、2、3、6、9、12个月时，取牙膏样品5g，精密称定，按2.2.2制备供试品溶液,在前述2.1的色谱条件下，分别进样，测定阿魏酸与异阿魏酸含量。结果见表5、表6、图2、图3。结果显示, 牙膏中功效成分阿魏酸在常温与45℃下其含量略有下降，12个月期考察期内，常温样品下降了17%，45%烘箱样品下降26%；异阿魏酸在12个月的考察期内，常温和烘箱样品含量基本保持稳定，常温样品下降了1%，45%烘箱样品下降4%；综上所述，阿魏酸与异阿魏酸在牙膏中稳定性表现良好，能在牙膏有效期内保持良好的功效作用。

表5 阿魏酸稳定性试验结果

表6 异阿魏酸稳定性试验结果

图2 阿魏酸含量稳定性

图3 异阿魏酸含量稳定性

3 结论

建立了用高效液相色谱法同时测定牙膏中阿魏酸与异阿魏酸含量的方法，实验证明该方法的分离效果好，阿魏酸与异阿魏酸的质量浓度在10.50～105.00 μg/mL范围内与峰高呈良好的线性关系，r阿魏酸=0.99980，r异阿魏酸=0.99984。阿魏酸平均回收率为99.03%，RSD为1.06%，异阿魏酸平均回收率为99.46%，RSD为0.81%。采用该方法测定牙膏中阿魏酸与异阿魏酸的含量，该方法稳定，数据准确，重现性好，样品处理方法简便，结果可靠，是测定牙膏中阿魏酸与异阿魏酸质量分数的可靠方法；较单独检测牙膏中阿魏酸与异阿魏酸的方法，该方法提高了检测效率，减少了人力与物力成本。