脓毒症相关急性肾损伤患者外周血核因子-κB通路相关蛋白表达的意义

石志祥，李 敏，马才林

脓毒症是一种对严重感染反应失调的疾病，通常伴有循环与代谢异常、合并多系统脏器功能衰竭，其中急性肾损伤(acute kidney injury， AKI)为其临床常见并发症之一，具有较高病死率[1-3]。目前，脓毒症相关AKI发病机制尚未完全明确，临床治疗多以控制感染为主，必要时采用肾脏替代治疗，不仅加重患者经济负担，且预后情况不容乐观[4-5]。因此，早期诊断和预测脓毒症相关AKI预后，对高风险患者提供针对性治疗尤为关键。有研究发现，脓毒症相关AKI与炎症反应相关[6]。核因子-κB(NF-κB)作为一种真核细胞转录因子，其信号通路已被证实为各种促炎介质基因表达的“开关”，参与多种炎症反应相关疾病发生和发展[7]。已有研究证实，脓毒症相关AKI患者NF-κB表达明显增加[8]，推测NF-κB活化可能参与脓毒症相关AKI发生和发展，但其具体作用机制有待进一步研究。基于此，本研究探讨脓毒症相关AKI患者外周血NF-κB通路相关蛋白表达的意义，现报告如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2019年5月—2022年4月我院收治的脓毒症160例。纳入标准：①符合脓毒症诊断标准[9]；②年龄>18岁；③临床资料及外周血NF-κB通路相关蛋白资料详细完整；④患者和(或)其家属签署相关知情同意书。排除标准：①合并严重器官功能衰竭危及生命者；②入院24 h内死亡者；③既往接受肾移植或慢性肾功能衰竭者；④间质性肾炎和肾小球肾炎等原因引起的AKI者；⑤妊娠期或哺乳期女性。参考AKI相关诊断标准[10]，根据是否发生AKI将脓毒症160例分为AKI组(75例，46.88%)与非AKI组(85例,53.12%)2组。

1.2检测方法 所有入选者均于入院次日空腹状态下抽取肘静脉血3 ml，以密度梯度离心法分离出单个核细胞，置入-80 ℃冰箱内冻存，备用。采用上海生工提供的RIPA裂解液提取细胞总蛋白，以Western blot测定外周血单个核细胞NF-κB通路相关蛋白IKKβ、IκBα、ρ50及ρ65表达。

1.3观察指标 比较2组一般资料及NF-κB通路相关蛋白IKKβ、IκBα、ρ50、ρ65表达，采用多因素Logistic回归分析探讨NF-κB通路相关蛋白IKKβ、IκBα、ρ50及ρ65表达与脓毒症相关AKI的关系，绘制受试者工作特征(ROC)曲线评价NF-κB通路相关蛋白IKKβ、IκBα、ρ50及ρ65对脓毒症相关AKI的诊断价值，采用Kaplan-Meier曲线比较不同NF-κB通路相关蛋白表达脓毒症相关AKI患者生存情况，采用RR分析不同NF-κB通路相关蛋白表达对脓毒症相关AKI患者预后的影响。

2 结果

2.1一般资料比较 AKI组急性生理与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分高于非AKI组(P<0.01)，见表1。

表1 2组脓毒症一般资料比较

2.2NF-κB通路相关蛋白表达比较 AKI组NF-κB通路相关蛋白IKKβ、IκBα、ρ50及ρ65表达均高于非AKI组(P<0.01)，见表2。

表2 2组脓毒症NF-κB通路相关蛋白表达比较

2.3NF-κB通路相关蛋白表达与脓毒症相关AKI关系 以脓毒症患者是否发生AKI为因变量(否=0，是=1)，调整APACHEⅡ评分等混杂因素后，多因素Logistic回归分析发现NF-κB通路相关蛋白IKKβ、IκBα、ρ50及ρ65表达仍与脓毒症相关AKI显著相关(P<0.01)，见表3。

表3 NF-κB通路相关蛋白表达与脓毒症相关AKI的关系

2.4NF-κB通路相关蛋白表达对脓毒症相关AKI诊断价值 绘制ROC曲线评价NF-κB通路相关蛋白表达对脓毒症相关AKI的诊断价值，发现NF-κB通路相关蛋白IKKβ、IκBα、ρ50及ρ65联合诊断脓毒症相关AKI的曲线下面积为0.903，明显高于单一指标诊断(P<0.05)，见图1和表4。

表4 NF-κB通路相关蛋白表达对脓毒症相关AKI诊断价值的ROC曲线分析结果

图1 NF-κB通路相关蛋白表达对脓毒症相关AKI诊断价值的ROC曲线NF-κB为核因子-κB，AKI为急性肾损伤，ROC为受试者工作特征

2.5不同NF-κB通路相关蛋白表达脓毒症相关AKI患者生存情况比较 以NF-κB通路相关蛋白IKKβ、IκBα、ρ50及ρ65表达平均值为界，<平均值为低表达，≥平均值为高表达，Kaplan-Meier曲线分析发现NF-κB通路相关蛋白IKKβ、IκBα、ρ50及ρ65高表达脓毒症相关AKI患者住院28 d生存率明显低于低表达脓毒症相关AKI患者(P<0.05)，见图2。

图2 不同NF-κB通路相关蛋白表达脓毒症相关AKI患者Kaplan-Meier曲线NF-κB为核因子-κB，AKI为急性肾损伤

2.6不同NF-κB通路相关蛋白表达对脓毒症相关AKI患者预后影响 NF-κB通路相关蛋白IKKβ、IκBα、ρ50及ρ65高表达脓毒症相关AKI患者住院28 d病死率均高于低表达脓毒症相关AKI患者(P<0.01)，见表5，且住院28 d病死风险是低表达脓毒症相关AKI患者的4.857(95%CI:1.804，13.075)、3.750(95%CI:1.641，8.569)、4.073(95%CI:1.665，9.965)和6.500(95%CI:2.089，20.227)倍。

表5 不同NF-κB通路相关蛋白表达对脓毒症相关AKI患者预后影响(例)

3 讨论

脓毒症是人体对感染反应失调所致的器官功能障碍综合征，可致器官功能不全及循环障碍，常累及肾脏，是AKI发生的独立危险因素[11-12]。2015年，一项关于我国脓毒症患者AKI发生情况的回顾性研究发现，约47%的脓毒症患者并发AKI[13]。本研究选取脓毒症160例，其中75例发生AKI，发生率为46.88%，与上述研究结果基本相符，说明我国脓毒症患者AKI发生率仍处于较高水平，临床需高度关注。有研究指出，相较于单纯AKI患者，脓毒症相关AKI患者病情更严重，病死率更高[14]。尽管近年来针对脓毒症相关AKI的研究已取得极大进展，但此类患者病死率仍居高不下，故及时诊断脓毒症和其相关AKI，准确预测患者预后，针对性制订治疗方案尤为关键。

多项研究证实，NF-κB通路是脓毒症发病机制的核心通路之一[15-16]。静息状态下，细胞核外NF-κB结合抑制性蛋白IκB形成三聚体，当细胞受到应激反应和细胞因子等外源性刺激，激活体内免疫及炎症反应机制，磷酸化蛋白酶，使IKK活化，进而降解IκB磷酸化泛素化，致使NF-κB通路被激活，启动基因转录。随着临床研究的深入，有学者指出，脓毒症患者体内大量释放炎性因子，炎性因子可激活NF-κB通路，进一步促进细胞内炎性因子分泌，加重肾损伤[17]，故认为激活NF-κB通路是诱导脓毒症患者发生AKI的重要途径。IKKβ、IκBα、ρ50及ρ65的磷酸化水平是证实NF-κB通路活化的重要指标。本研究观察脓毒症相关AKI患者NF-κB通路相关蛋白表达，发现AKI组NF-κB通路相关蛋白IKKβ、IκBα、ρ50及ρ65表达均高于非AKI组，且调整APACHEⅡ评分等混杂因素后，发现NF-κB通路相关蛋白IKKβ、IκBα、ρ50及ρ65表达仍与脓毒症相关AKI显著相关，充分说明NF-κB通路参与脓毒症相关AKI发生。肾缺血再灌注损伤是AKI主要发病机制之一，而炎症反应是肾缺血再灌注损伤发生和发展的重要病理机制之一[18]。有研究证实，脓毒症患者血清肿瘤坏死因子-α、单核细胞趋化蛋白-1和白细胞介素-6等水平明显升高[19-20]。此外，上述因子还可诱导上小管上皮细胞转分化为炎性细胞并参与AKI进展[21]。目前，肿瘤坏死因子-α、单核细胞趋化蛋白-1和白细胞介素-6均已被证实含有NF-κB位点，且肾小管坏死、系膜细胞增生及细胞凋亡也与含NF-κB位点的多个基因过表达有关，故认为NF-κB通路的激活是诱发脓毒症相关AKI的重要途径。因此，推测脓毒症患者肿瘤坏死因子-α、单核细胞趋化蛋白-1和白细胞介素-6等炎性因子过度表达，使得体内NF-κB通路被激活，炎性信号再次正反馈作用于靶细胞，形成炎症持续放大的环形回路，诱发肾脏固有细胞中NF-κB，故认为脓毒症患者通过NF-κB通路的激活诱发AKI，据此推测临床通过干预NF-κB通路，有助于控制脓毒症进展。然而，本研究样本量有限，有待进一步研究证实。

本研究绘制NF-κB通路相关蛋白对脓毒症相关AKI诊断价值的ROC曲线，发现NF-κB通路相关蛋白IKKβ、IκBα、ρ50及ρ65联合诊断脓毒症相关AKI的曲线下面积最大，具有良好诊断价值。分析其原因为NF-κB通路相关蛋白IKKβ、IκBα、ρ50及ρ65参与NF-κB通路的多个活化环节，较为全面，诊断确切。此外，本研究还对不同NF-κB通路相关蛋白表达对脓毒症相关AKI患者预后的影响进行分析，发现NF-κB通路相关蛋白IKKβ、IκBα、ρ50及ρ65高表达脓毒症相关AKI患者住院28 d病死风险是低表达脓毒症相关AKI患者的4.857、3.750、4.073和6.500倍，说明NF-κB通路相关蛋白IKKβ、IκBα、ρ50及ρ65为脓毒症相关AKI预后预测的潜在生物学指标。

综上所述，NF-κB通路相关蛋白参与脓毒症相关AKI的发生和发展，检测其水平可为该病诊断及预后预测提供依据，具有重要临床意义。