湖羊链球菌与球虫混合感染的诊治

黄宇翔

（黑龙江省农业科学院畜牧兽医分院 黑龙江齐齐哈尔 161005）

近年来，随着畜牧业的发展，在市场经济的作用下，湖羊的养殖取得了良好的经济效益，也成为一些地区农民脱贫致富的首选，饲养规模也在不断地扩大，由于养殖过程中，没有做到科学化管理；有的羊群密度大，且没有良好的环境条件，会导致很多病原体蔓延，造成羊只病原混合感染现象，给临床诊断和治疗带来困难，从而降低养殖户的经济效益[1]。球虫病为养羊生产中常见的原虫病，羊只一旦感染球虫，可破坏肠道黏膜的完整性，造成机体营养吸收障碍，引起贫血、消瘦、发育不良等症状[2]，导致机体免疫力下降，会引起患羊感染其他疾病，造成混感，促使症状加重。链球菌在自然界中广泛存在，有多种血清型能威胁禽类、猪、牛、羊等多种牲畜。羊链球菌病是由致病性链球菌感染引起，不同日龄的羊均可感染，典型特征是下颌淋巴结出现炎性水肿，肺脏出现炎症病变，全身呈现出血性败血症，发病急，病程短，不同季节均有发生，在冬春季节高发，主要通过消化道和呼吸道传播[3]。具有较强的传染性，在羊群中可快速扩散。多呈地方性流行或散发。羔羊一旦感染多呈急性死亡。对养羊产业的发展非常利，为了确保养殖户的经济不受到损失，需要采取有效的防治方法。

现将临床羔羊链球菌与球虫混合感染的实验室诊断和药敏试验报告如下，供临床诊断参考。

1 发病情况

1.1 临床症状

黑龙江省齐齐哈尔市区某县镇，养殖户饲养200 多只种湖羊，2021 年12 月份起，有3 只30 日龄羔羊陆续发生死亡。羔羊临床表现精神萎靡，弓背垂头，呆立不动；食欲不振或废绝，反刍停止；羔羊呼吸困难，鼻腔有浆液性分泌物流出；排出混杂黏液或者血液的粪便，因体质衰竭倒地不起，抽搐，口吐泡沫，1～2d 死亡。

1.2 剖检症状

喉头有散在的出血点，内有黏液，气管环出血，一侧肺叶大面积於血，瘤胃、网胃有少量食物，瓣胃成团的毛球，十二指肠有卡他性炎症，并有点状或带状出血，盲肠肿胀，伴有卡他性炎症。尸体干瘪、消瘦，皮肤无弹性、皮下脂肪消失。

2 材料与方法

2.1 材料

1）病料。无菌采集病死羊肝脏，心脏，肺，喉头等病变器官和组织作病料。

2）主要试剂。血清营养琼脂平板（本试验室自制）；革兰氏染液（本试验室自制）；微量生化反应管、药敏片（购自杭州滨和微生物试剂有限公司）。

2.2 方法

1）病原细菌的分离培养。用无菌环挑取肝、心血，肺及喉头黏液，分别于含7%绵羊脱纤血液营养琼脂培养基划线培养，置37℃培养18～24h，观察细菌生长情况。

2）分离菌的纯化。挑取上述血琼脂上培养出的单个菌落在血琼脂上划线接种，37℃培养18～24h。

3）分离菌形态观察。挑取血琼脂上培养出的单个菌落制作抺片、革兰氏染色油镜下观察。

4）生化试验。对分离菌分别进行糖类分解试验、MR 试验、VP 试验、山梨醇试验、硝酸盐还原试验、甘露醇试验。

5）药敏试验。刮取适量纯化的分离菌，用涂布棒均匀地涂抺在血琼脂平板上，再贴上药敏片，倒置于培养箱中37℃培养24h。

6）虫卵检验。刮取盲肠内屑触片，滴加生理盐水进行稀释，盖上盖玻片，置于显微镜下观察，依虫卵的形态特征，进行判断。

3 结果

3.1 细菌培养及镜检鉴定结果

37℃培养20h，在含7%绵羊脱纤血液营养琼脂培养基上可见生长出圆形突起米粒大小、灰白色半透明的菌落。将分离菌涂片，染色，镜检可见革兰氏阳性短链排列或链状球菌[4]（见图1）。

图1 显微镜10×100 观察细菌形态

3.2 生化鉴定结果

在糖发酵的试验中可见分离的细菌能够分解麦芽糖、葡萄糖、乳糖、蔗糖、果糖，在MR 试验、山梨醇试验和硝酸盐还原试验呈现阳性，VP 试验和甘露醇试验呈现阴性[5]，这些生化鉴定结果证明该分离菌为链球菌。

3.3 药敏试验结果

用药敏纸片法对分离的链球菌进行药敏试验，抑菌圈直径大于15mm 表示高度敏感（++），直径小于10mm 表示为耐药不敏感（-），介于两者之间表示为中度敏感（+）。

结果显示，分离菌株对青霉素、头孢他啶、恩诺沙星、磺胺间甲氧嘧啶高度敏感，对庆大霉素、林可霉素、环丙沙星、链霉素中度敏感，对新生霉素、阿莫西林不敏感。见表1。

表1 药敏试验结果

3.4 盲肠触片镜检结果

镜下可见卵圆形或椭圆形的卵囊，卵囊壁光滑，有极帽，卵囊壁2 层，无外残体，有内残体（见图2）。与艾美耳球虫卵特征相符。

图2 显微镜观察卵囊形态

4 讨论

通过对病死羊进行细菌学检查初步诊断为链球菌，进一步对分离菌株进行生化试验鉴定，结果显示该病原与链球菌的生物学特性基本相符；通过对盲肠内虫卵形态特征检查，结果与艾美耳球虫卵特征相符，结合发病羊临床症状、病剖检变化，最终判定为链球菌和球虫混合感染。

通过药敏试验研究，结果显示链球菌对青霉素、头孢他定、恩诺沙星高度敏感，为临床治疗用药提供了参考依据。对球虫的治疗使用抗球虫药如氨丙啉，磺胺氯吡嗪，磺胺间甲氧嘧啶等。磺胺类药物代谢产物在尿中的溶解度较低，容易形成结晶，所以连续用药不宜超过1 周，并给予大量饮水或应同时应用碳酸氢钠。忌与酸性药物如VC、氯化钙、青霉素等配伍。

该养殖场发生羊链球菌与球虫混合感染是因地处北方，为了保障圈舍温度，门窗外又用塑料罩住，造成圈舍潮湿、通风不良、粪便清理不及时、青饲料缺乏，养殖环境恶劣等因素造成的，尤其是羊只抵抗力下降时极易诱发本病，且病死率较高，为此在本病多发的冬春季节要改善羊群养殖环境，圈舍通风干燥，供给营养丰富的饲料，定期消毒并做好免疫接种工作，春、秋两季实施羊败血性链球菌病灭活疫苗免疫接种。每年要对羊群定期进行2～3 次预防性驱虫。此外，合理的养殖密度，保证舍内通风良好，也可有效防控此病发生。

临床诊疗中常常存在多病原混合感染的现象。因此，在开展药物治疗前，一定要确定致病源，筛选出敏感的药物，然后采取对症措施进行治疗，使病情得到有效控制，从而减少经济损失。在用药治疗中也需要严格遵守抗菌类药物的使用量和使用时间，以减少或延缓耐药菌株的产生。