肝癌患者血清中lncRNA HOTAIR表达与临床病理特征的相关性及诊断价值

郭冬萌 吴玉卓

肝癌为临床常见恶性肿瘤,其发病率与致死率较高,尽早确诊,并采取手术治疗,可有效阻止肿瘤持续增殖或侵袭,延长患者生存时间[1-2]。然而肝癌发病早期缺乏典型症状,明确诊断较为困难,待出现肝区疼痛、乏力、持续发热等症状时病情多已处于中晚期,错失最佳手术治疗时机,不利于预后[3-4]。因此,选择一快速有效的检测手段于早期及时诊断肝癌,指导临床制定个体化的治疗,对于改善患者预后具有重要意义。长链非编码RNA(IncRNA)在多种肿瘤组织和体液内均呈异常表达,在肿瘤的诊断、预后评估中具有一定临床意义,而HOX转录反义RNA(HOTAIR)为临床近些年发现的具有反式调控作用的IncRNA[5-6]。基于此,本研究以100例肝癌患者为研究对象,分析血清IncRNA HOTAIR在肝癌患者中的表达与临床诊断意义。信息示下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

将2019年11月至2021年11月本院收治的100例肝癌患者纳入肝癌组,同期收治的80例肝硬化患者纳入肝硬化组,同期于本院行健康体检的75例健康体检者纳入对照组,研究经医院医学伦理委员会批准。纳入标准:①肝癌患者经组织病理检查证实病情;②肝硬化患者经肝脏活检证实病情;③对照组均身体健康,无重大疾病;④所有研究对象均对本次研究知悉,且其纳入遵循自愿原则,并签署知情同意书;⑤均具有较为优良的依从性。排除标准:①存在精神疾患、认知障碍或语言沟通障碍,难以正常配合进行研究者;②合并免疫系统病症者;③存有全身性感染者;④存在凝血功能异常者;⑤合并血液系统疾病者;⑥合并心、肝、肾等重要脏器功能不全者;⑦存在严重的脑器质性疾病变者;⑧存有酒精、药物依赖史者。对照组男性45例,女性30例;年龄43～75岁,平均年龄(60.69±6.34)岁;体重指数(BMI)18.6～27.7 kg/m2,平均BMI(23.25±1.91)kg/m2。肝硬化组男性41例,女性39例;年龄43～78岁,平均年龄(60.75±6.14)岁;BMI 18.7～27.5 kg/m2,平均BMI(23.30±1.93)kg/m2。肝癌组男性59例,女性41例;年龄42～76岁,平均年龄(60.92±6.48)岁;BMI 18.8～27.5 kg/m2,平均BMI(23.36±1.88)kg/m2。比较3组一般资料,差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2 方法

标本采集:在全部研究对象入选之后的第2天早晨,采集其空腹5 ml外周静脉血液于无菌试管内,严格按照无菌操作原则行采集,之后以3000 r/min的速率行10 min的离心处理,获取上层清液后,于-80 ℃环境下留存待检。检测方法:首先运用Trizol法提取血清样品内总RNA,对每个样本的每个基因开展3次重复试验。以1 μg总RNA为模板合成cDNA,以RNA 18S作为内源性参照,以20 μlqRT-PCR反应体系;取cDNA放于PCR扩增仪内行扩增,反应条件为95 ℃预变性1 min,95 ℃15 s,60 ℃40 s,共进行40个循环,完毕后以2-ΔΔCt法计算血清IncRNA HOTAIR相对表达量。

1.3 观察指标

(1)3组血清IncRNA HOTAIR相对表达量对比:统计对比3组血清IncRNA HOTAIR相对表达量。(2)血清IncRNA HOTAIR表达与肝癌患者临床病理特征的关系:收集所有肝癌患者的性别(男、女)、年龄(≥60岁、<60岁)、肿瘤数目(1个、≥2个)、TNM分期(Ⅰ～Ⅱ期、Ⅲ～Ⅳ期)、血管侵犯(有、无)、肝外转移(有、无)等资料,分析血清IncRNA HOTAIR表达与上述临床病理特征的关系。(3)血清IncRNA HOTAIR在肝癌中的诊断效能:绘制受试者工作曲线(ROC),分析血清IncRNA HOTAIR在肝癌中的诊断效能。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 3组血清IncRNA HOTAIR相对表达量对比

肝癌组IncRNA HOTAIR相对表达量高于肝硬化组与对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 3组血清IncRNA HOTAIR相对表达量对比

2.2 血清IncRNA HOTAIR表达与肝癌患者临床病理特征的关系

IncRNA HOTAIR表达与肝癌患者的TNM分期、血管侵犯、肝外转移有关,差异有统计学意义(P<0.05); IncRNA HOTAIR表达与患者的年龄、性别、肿瘤数目无关,差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 血清IncRNA HOTAIR表达与肝癌患者临床病理特征的关系

2.3 血清IncRNA HOTAIR在肝癌中的诊断效能

ROC结果显示:血清IncRNA HOTAIR诊断肝癌的AUC为0.901,标准误为0.025,P值为0.000,95%CI:0.852～0.949,诊断价值较高。见图1。

图1 血清IncRNA HOTAIR诊断肝癌的ROC图

3 讨论

肝癌是一种发生于肝脏的恶性肿瘤,在临床具有较高的患病率,近年发病率呈明显升高趋势,发病年龄趋于年轻化[7-8]。肝癌的发病机制较为复杂,与饮酒、病毒性肝炎、遗传等相关,死亡率较高[9-10]。对于早期肝癌,及时采取以手术为主的综合治疗方案,可有效控制患者病情,延长生存期,部分患者甚至存在治愈可能,而中晚期肝癌治疗难度较大,整体预后较差[11-12]。因此,临床尽早明确肝癌患者病情,并根据临床病理特征制定针对性的治疗方案,对于改善患者的预后尤为重要。

超声造影、增强CT、磁共振成像等影像学检查手段为肝癌临床检查、诊断的常用手段,但存在费用高、患者依从性低等不足,故临床应用较为受限,难以作为常规检查手段。因此,临床还应寻找能够为肝癌早期诊断提供可靠参考的肿瘤生物标志物。临床多项研究表明,在肿瘤发生、转移等多种细胞生物学的过程中,IncRNA均为重要的表现遗传学调控因子[13-14]。IncRNA具有类型多、数量多、作用机制多等特点,IncRNA广泛参与细胞增殖、分化与凋亡等过程,在多种疾病病理过程中发挥重要作用,与肿瘤的发生、发展与转移联系密切。而HOTAIR是具有反式转录调控作用的IncRNA,主要是通过5′结构域与3′结构域募集复杂蛋白复合体来调节靶基因的表达。HOTAIR是一种在多种肿瘤中起致癌作用的IncRNA,HOTAIR沉默会促使肝癌细胞的凋亡,抑制癌细胞增殖。本研究结果显示,肝癌组的IncRNA HOTAIR相对表达量(2.53±0.58)高于肝硬化组(0.81±0.25)与对照组(0.20±0.05),且IncRNA HOTAIR表达与肝癌患者的TNM分期、血管侵犯、肝外转移有关,表明肝癌恶性程度越高,IncRNA HOTAIR表达水平越高,IncRNA HOTAIR可能参与肝癌的恶性转化及增殖扩散的过程。TNM分期、血管侵犯、肝外转移均可反映肿瘤恶性程度及负荷情况,当TNM分期越高,且出现血管侵犯、肝外转移,则病灶侵袭范围越大,所合成、释放的IncRNA HOTAIR越多。楼衷晗等[15]研究结果显示,原发性肝癌患者的血清IncRNA HOTAIR相对表达量高于肝硬化组与健康对照组,与本研究结果类似。本研究ROC结果显示:血清IncRNA HOTAIR诊断肝癌的AUC为0.901(95%CI:0.852～0.949),提示血清IncRNA HOTAIR在肝癌中具有较高的诊断价值,可为早期肝癌的诊断提供可靠的参考信息。然而需注意的是,本次研究尚存在纳入样本量较少等不足,可能会对本次试验结果的可信度构成一定的干扰。因此,后续临床还需不断的完善试验设计,增加样本量的不断纳入,以进行更深层次的研究,进一步了解血清IncRNA HOTAIR在肝癌患者中的临床意义,从而为临床制定个体化治疗方案提供更为可靠的指导,使患者获得更为良好的预后。

综上所述,血清IncRNA HOTAIR在肝癌患者血清内呈高表达,且其表达水平与患者TNM分期、血管侵犯程度、肝外转移情况等密切相关,可为肝癌早期诊断提供可靠的参考信息,值得大力的推广。