香菇多糖和七清败毒颗粒对母猪繁殖性能、血清生化指标及猪繁殖与呼吸障碍综合征防控影响的研究

张国华 吕思文 李亚南 邢思毅 张 备 王丽坤 薛沾枚 张 艳 李 烨 沈思思 张建胜 朱启涛 钟 鹏 史同瑞* 金振华*

(1. 黑龙江省农业科学院畜牧兽医分院,齐齐哈尔 161005;2.齐齐哈尔市龙沙区农业综合行政执法大队,齐齐哈尔 161005;3.山东信得科技股份有限公司,青岛 266101;4.内蒙古圣牧高科牧业有限公司,呼和浩特 010000)

猪繁殖与呼吸障碍综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS),又称蓝耳病,是由猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)引起的,是一种可导致母猪出现流产等症状并且会导致仔猪出现呼吸系统疾病的传染病,严重影响养猪业的发展,降低养殖户(场)的经济效益[1]。1987年,PRRS首先由美国学者进行报道,随后在世界多地均有猪类似疾病症状的报道,我国于1995年首次爆发这种疾病[2]。由于PRRS的传染性高、病猪长期带毒、持续感染等特点导致该病难以根除,目前对于PRRS的防控主要以猪群临床稳定和控制继发感染为主[3]。

在我国畜禽饲料全面禁抗的大环境下,毒副作用小、疗效显著、兼具药效和营养功能的中药添加剂越来越受到人们的重视,多糖作为中药的主要成分起到至关重要的作用[4]。香菇多糖其主要作用成分是从香菇子中提取的β-葡聚糖,生产应用中具有营养和药物的双重作用,其有效成分可增加动物的免疫力,降低应激反应,提高动物的抗疾病能力[5]。研究显示,香菇多糖在机体抗氧化、降低应激反应、抗菌、抗肿瘤等多个方面都表现出良好的效果,并且其作为一种免疫调节剂,可以有效地增加感染细胞的免疫能力,对于抑制病毒起到了一定的作用,尤其是对于流感病毒、腺病毒等具有很好的防控作用[6-8]。七清败毒颗粒由黄芩、虎杖、苦参、白头翁、板蓝根、大青叶、绵马贯众7味中药组成,其主要成分为黄芩苷,有研究显示黄芪苷具有调整动物机体代谢的功效,同时还可以起到控制病毒复制、杀灭病毒的作用,对PRRS具有很好的防控作用[9-10]。

集约化养殖环境下,为了追求生产效益,猪群高密度饲养且大量使用抗生素等药物,猪群肝肾损伤严重,亚健康问题普遍,仔猪带毒情况突出。按照中兽医辩证思维,正气受损导致免疫力下降,邪气转盛导致病原侵入,猪群带毒是猪群疾病高发的主要因素。扶正祛邪,增免排毒,是中兽医防控疾病的思路。因此,本研究将香菇多糖和七清败毒颗粒在某集团化猪场进行应用,监测应用后对母猪繁殖性能、血清生化指标、PRRSV抗体水平、仔猪脐带血中PRRSV载量的影响,以期可以更好地了解香菇多糖等中药添加剂对猪场母猪繁殖性能、血清生化指标及PRRS的防控效果。

1 材料与方法

1.1 试验材料

香菇多糖:含有2.50%香菇多糖,0.15%低聚葡聚糖、0.10%低聚木糖、0.03%低聚半乳糖等。

七清败毒颗粒:主要由黄芩、虎杖、苦参、白头翁、板蓝根、大青叶、绵马贯众组成,主要成分和含量为1.0%黄芩苷、0.1%大黄素、0.1%虎杖苷等。

主要试剂:HerdCheck PRRS X3抗体检测试剂盒、RealPCR NA PRRS Type 1 and Type 2 Multiplex RNA TestPRRS试剂盒购自爱德士生物科技有限公司。QIAamp®Viral RNA Mini Kit试剂盒购自德国凯杰试剂有限公司。谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(TBIL)、尿素(UN)等测定试剂盒购自深圳雷杜生命科学股份有限公司。

试验设备:全自动生化分析仪(BS220,深圳迈瑞医疗器械有限公司)、酶标仪(ST-360,科华仪器设备有限公司)、移液器(艾本德仪器设备有限公司)、荧光定量PCR仪(ABI7500,美国应用生物系统公司)、微量紫外分光光度计(Nanodrop 2000,赛默飞仪器有限公司)。

1.2 试验设计

试验动物选自某集团猪场的美系二元杂交母猪(猪场存在PRRS感染)。选取3～4胎次、体重为(268.00±33.59) kg的母猪100头,随机分为2组(每组5个重复,每个重复10头母猪),分别为对照组和试验组。对照组饲喂基础饲粮,试验组在基础饲粮中添加2.5 g/(头·d)香菇多糖+5.0 g/(头·d)七清败毒颗粒,试验期间每使用15 d,间隔15 d,试验期为90 d。基础饲粮组成及营养水平见表1。

1.3 母猪繁殖性能测定

试验期间记录母猪繁殖数据,包括窝均产仔数、窝均活仔数、窝均死胎数、仔猪出生窝均重、仔猪断奶窝均重,计算断奶窝均增重、平均日增重,计算公式如下:

断奶窝增重=仔猪断奶窝重-仔猪初始窝重;平均日增重=(仔猪断奶窝重-仔猪初始窝重)/30。

1.4 母猪血清生化指标测定

在试验第0(试验开始当天)、30和90天06:30,每组空腹采集每头母猪静脉血5 mL,4 000 r/min离心10 min得到血清。应用全自动生化分析仪(BS220)进行血清生化指标检测,所有操作严格按照试剂盒说明书进行操作,检测项目包括血清ALT、AST活性及TBIL、UN含量。

1.5 母猪PRRSV抗体检测

在试验第0、30、90天06:30,每组空腹采集每头母猪静脉血5 mL,4 000 r/min离心10 min得到血清。应用ST360酶标仪检测PRRS抗体,所有操作严格按照HerdCheck PRRS X3抗体检测试剂盒说明书进行。结果判读标准如下:当S/P值<0.4判定为阴性结果,S/P值>0.4判定为阳性结果。离散度根据检测到的S/P值,用Excel 2019计算。

1.6 仔猪脐带血PRRSV抗原检测

试验母猪产仔后,随机抽取试验组仔猪脐带血10份,对照组仔猪脐带血10份,试剂盒提取RNA后Nanodrop 2000紫外分光光度计测定浓度,将RNA样本稀释至2 ng/mL,进行反转录后应用荧光定量PCR仪(ABI7500)检测仔猪脐带血PRRSV抗原载体情况,所有操作程序严格按照PRRS抗原检测试剂盒说明书进行。结果判读标准如下:当FAM通道Ct值<38且阴性对照无信号,VIC通路有信号时判定为感染欧洲型PRRS;当Cy5通道Ct值<38且阴性对照无信号,VIC通路有信号时判定为感染美洲型PRRS;当FAM通道、Cy5通道、VIC通路均无信号时判定为无效结果,需要重新进行检测。

1.7 数据统计分析

试验数据应用Excel 2019进行记录,采用SPSS 26.0统计软件进行统计分析,组间差异差异性采用t检验进行分析,数据用平均值±标准差表示。P<0.05视为差异显著,P<0.01视为差异极显著,P>0.05则视为不具有统计学意义。

2 结 果

2.1 香菇多糖和七清败毒颗粒对母猪繁殖性能的影响

如表2所示,与对照组相比,试验组窝均产仔数极显著提高了4.77%(P<0.01),窝均活仔数无显著差异(P>0.05),窝均死胎数极显著降低了34.51%(P<0.01);试验组仔猪出生窝均重无显著差异(P>0.05),仔猪断奶窝均重极显著提高了6.56%(P<0.01),断奶窝均增重极显著提高了6.35%(P<0.01),平均日增重极显著提高了6.41%(P<0.01)。

表2 香菇多糖和七清败毒颗粒对母猪繁殖性能的影响

2.2 香菇多糖和七清败毒颗粒对母猪血清生化指标的影响

如表3所示,第0天,与对照组相比,试验组血清ALT、AST活性及TBIL、UN含量无显著差异(P>0.05)。第30天,与对照组相比,试验组血清AST活性显著降低了13.22%(P<0.05),血清ALT活性及TBIL、UN含量无显著差异(P>0.05)。第90天,与对照组相比,试验组血清ALT活性显著降低了17.51%(P<0.05),血清AST活性显著降低了17.08%(P<0.05),血清TBIL含量显著降低了22.22%(P<0.05),血清UN含量极显著降低了42.09%(P<0.01)。

表3 香菇多糖和七清败毒颗粒对母猪血清生化指标的影响

2.3 香菇多糖和七清败毒颗粒对母猪PRRS抗体检测结果的影响

如表4所示,第0天,与对照组相比,试验组的S/P均值无显著差异(P>0.05);对照组离散度为35.90%,试验组离散度为37.60%。第30天,与对照组相比,试验组的S/P均值极显著降低了23.11%(P<0.01);对照组离散度为40.94%,试验组离散度为28.64%。第90天,与对照组相比,试验组的S/P均值极显著降低了23.57%(P<0.01);对照组离散度为55.90%,试验组离散度为32.90%。

表4 香菇多糖和七清败毒颗粒对母猪PRRS抗体检测结果的影响

续表4时间 Time项目Items对照组Control group 试验组Test groupP值P-value离散度 Dispersion/%40.9428.64S/P≥2.5204第90天0.4≤S/P<2.58096Day 90S/P<0.400S/P均值 Mean value of S/P1.57±0.72a1.20±0.46b0.017 7离散度 Dispersion/%55.9032.90

2.4 香菇多糖和七清败毒颗粒对仔猪脐带血PRRS抗原检测的影响

如图1、表5所示,对照组仔猪脐带血PRRS抗原检测结果1号样本Cy5通道的Ct值为27.45,3号样本Cy5通道的Ct值为32.19,其余样本未检测到Ct值,仔猪脐带血PRRS抗原阳性率为10%。试验组仔猪脐带血PRRS抗原检测未检测到Ct值,抗原阳性率为0。

ΔRn为PCR产物量;Cycle为反应循环数。

3 讨 论

3.1 香菇多糖和七清败毒颗粒对母猪繁殖性能的影响

母猪繁殖性能受到饲养管理、营养、疾病、环境等因素的影响。其中营养水平和疾病对母猪的繁殖性能起到了十分重要的影响。仔猪在断奶前的生长状态与母猪分泌乳汁的情况、环境以及自身免疫力有着很大的影响。毛湘冰等[11]报道,在饲粮中添加香菇多糖可以有效提高断奶大鼠的生产性能、抗氧化能力以及改善肠道形态结构以及菌群结构。胡海燕[12]报道,饲粮中添加香菇多糖对攻毒轮状病毒的仔猪具有提高生长性能、增加免疫力等作用。Mao等[13]报道,在饲粮中添加香菇多糖可以改善仔猪的肠道菌群结构,增加短链脂肪酸的合成,减少感染轮状病毒仔猪腹泻。香菇多糖应用于仔猪可以有效地提升血清葡萄糖含量,降低血清尿素的含量,说明营养状况和蛋白质的代谢产物情况良好,可提高仔猪的生长性能[14]。本研究结果显示,将香菇多糖和七清败毒颗粒添加至饲粮中可以提高窝均产子数、窝均活子数,降低窝均死胎数,并且可以提高仔猪的平均日增重,与之前的报道结果相符,说明在饲粮中添加香菇多糖和七清败毒颗粒可以有效地提高母猪的繁殖性能。

3.2 香菇多糖和七清败毒颗粒对母猪血清生化指标的影响

血清生化指标可以对动物的营养代谢情况以及身体健康状况起到指示的作用,其中ALT、AST活性及TBIL、UN含量可以在一定程度上反映动物的肝肾功能。当动物肝肾功能受到损伤的时候,这几项指标可能会出现快速上升。李建房等[15]研究显示,应用甘草多糖16 d后仔猪的血清碱性磷酸酶(ALP)活性、肌酐(CRE)含量显著降低。单舒萱等[16]将蒲公英多糖饲喂肉鸡,观察到血清ALP活性及UN、CRE含量极显著降低。盘道兴等[17]将三七渣饲喂文山牛,观察到试验组的血清生化指标如AST、ALP、乳酸脱氢酶(LDH)活性显著低于对照组。这说明中药类物质可以影响动物的部分血清生化指标,与本研究的结果相一致。本研究中,第30天,试验组血清AST活性显著低于对照组,第90天,试验组血清ALT、AST活性及TBIL、UN含量均显著低于对照组,说明试验组在应用香菇多糖和七清败毒颗粒一段时间后可以对母猪的部分血清生化指标起到调节的作用。

表5 仔猪脐带血PRRSV抗原检测结果(Ct值)

3.3 香菇多糖和七清败毒颗粒对母猪PRRSV抗体检测结果的影响

母猪PRRSV抗体检测结果可以通过抗体阳性率S/P均值、离散度进行评估。当S/P大于2.5时为抗体强阳性,提示可能已经感染PRRSV,S/P均值小于2.0,抗体水平相对整齐,离散度较低时说明猪群的整体健康状况较好。中药制剂在营养和药物作用下对PRRS的预防和治疗起到了重要的作用[18]。缪世东[19]研究表明,七清败毒颗粒的应用可以有效提高存在PRRS感染的养殖场PRRS抗体均匀度,并且可以有效地降低PRRS的发生,体外试验表明,七清败毒颗粒主要以直接灭活病毒和阻断病毒吸附、穿入细胞的方式起到抗PRRSV的作用。陈晓兰等[20]研究表明,中药多糖饲喂蛋鸡联合PRRS疫苗进行免疫,使体内B细胞通过对抗原的识别、活化、增殖,最后分化成浆细胞并分泌抗体,抗体进入血液循环从输卵管上皮层分泌滤泡至卵黄内,从而获得的卵黄抗体效价更好。陈天泽[21]研究表明,将板蓝根应用于抗体强阳性的后备母猪可通过免疫调节提高免疫细胞数量与活性等功能,有效地降低S/P均值,减少阳性比值。本研究将香菇多糖和七清败毒颗粒和母猪PRRSV抗体检测结果相关联,在第90天后,试验组S/P均值大于2.5的占比由20%降至4%,S/P均值由1.77降至1.20,离散度由37.6%降至32.9%,抗体的波峰呈正态分布,说明应用香菇多糖和七清败毒颗粒后猪群PRRSV抗体的整体稳定性有所提高。PRRSV抗体检测强阳性的猪下降明显,说明应用香菇多糖和七清败毒颗粒可以有效地改善猪的健康状况,提高母猪利用率,减少母猪的淘汰。

3.4 香菇多糖和七清败毒颗粒对仔猪脐带血PRRS抗原检测的影响

采集脐带血具有操作方便、不易产生应激、经济损失小的优点。患病动物的脐带血中含有母体的病原体,可以对相关的疾病进行预测和监控,PRRSV作为一种重要的垂直传播病毒,检测仔猪脐带血可以在一定程度上反映出母猪PRRSV感染情况,也为仔猪PRRS的防控和净化提供了更多的科学依据[22]。实时荧光定量PCR可检测多种猪传染病病原,如猪瘟病毒、猪伪狂犬病毒、猪圆环病毒、PRRSV等,通过应用实时荧光定量PCR法检测仔猪脐带血中的PRRSV可以更准确地对仔猪是否载有PRRSV进行检测,其准确度和灵敏度都高于普通PCR[23-24]。李晨[10]研究表明,七清败毒颗粒可以降低肺组织PRRSV载量,通过抑制PRRSV在体内的复制减轻肺脏损伤。袁小陵等[25]研究表明,七清败毒颗粒免疫增效剂和功能性保肝剂,所含的黄芩、虎杖、白头翁等具有燥湿止痢、抗菌杀毒、健脾开胃的功能,鸡饲喂0.23 g/(只·d)七清败毒颗粒可以对新城疫F48E9株具有很好的防控作用。本次检测使用的PRRSV实时荧光定量PCR试剂盒可对美洲型以及欧洲型进行区分,我们可以针对检测结果对该集团化猪场PRRS进行更好的免疫,提高猪群的PRRS免疫力。本研究中,试验仔猪脐带血试验组PRRSV实时荧光定量PCR抗原检出率为0,对照组检出率为10%,且对照组检出的阳性样本均为美洲型,说明该集团化猪场存在PRRSV美洲型的感染,需要进行有效的防控,通过应用香菇多糖和七清败毒颗粒可以有效地降低仔猪脐带血PRRSV阳性率,降低经济损失。

4 结 论

妊娠母猪饲粮中添加香菇多糖和七清败毒颗粒可以有效提高母猪的繁殖性能,显著降低血清ALT、AST活性及TBIL、UN含量,降低猪群PRRSV抗体S/P均值,降低仔猪PRRSV携带率,在提高猪群生产成绩、防控PRRS方面有着重要意义。