基层动物疫病监测样品采集技术

黄玉燕 安溪县参内镇社会事务服务中心 福建安溪 362400

动物疫病监测是通过采集相应的动物样品，经过实验室检测得出试验数据， 从而掌握当前动物疫病流行状况，是基层动物防疫机构重要的工作内容。而影响实验室检测结果的重要因素在于采集合适的试验样品，采集过程中动物样品的保存、运输等都会影响到样品质量，因此，样品采集更需规范化、科学化的流程。

1 基层常见的动物疾病监测样品种类

根据每年流行病学调查、 动物免疫效果评估等工作任务要求不同， 大体可将监测样品分为组织样品、血液样品、棉拭子样品等三大类。 其中组织样品根据病种的不同而采集的部位不同， 常采集的部位有淋巴结、脾、肝、脑、流产死胎等实质性器官；血液样品根据试验项目分为全血和血清； 棉拭子样品因采集的部位或区域不同， 分为泄殖腔拭子、 咽喉拭子、环境拭子等。

2 采样前准备

采样前需准备好相应的采样工具和防护工具，其中包括但不限于一次性医用手套（乳胶手套）、护目镜、一次性口罩（N95 口罩）、防护服、胶靴等；采血器、抗凝采血管、真空采血管、一次性头皮针；棉拭子，PBS 液（病毒保存液）；75%酒精棉球、剪刀、试管架、剃毛器，采样单、签字笔、记号笔，保温箱或采样箱，自封袋、冰袋等。

3 常规样品的采集技术

3.1 组织样品采集及保存 应对死亡动物及时解剖，避免组织腐败。 采样前要对解剖刀、剪刀等进行灭菌消毒，确保采样过程中无菌操作。摘取适合大小的组织器官并将采集到的样品存放到自封袋或组织样品采集容器中密封保存。 采样单上填写好动物种类、组织名称、采样日期、编号等内容，采样单随样品一同存放。组织样品采集完成后需要长时间保存时，要及时进行冷冻保存。

3.2 血液样品采集及保存

3.2.1 全血样品 将动物保定后， 找到相应的静脉（禽类可以选择翼下静脉， 牛羊可以选择颈静脉、尾静脉，猪可以选择前腔静脉），对采血部位用75%酒精棉球进行局部消毒， 消毒的同时也可以充分暴露血管方便抽取血液，将血抽到抗凝采血管内，然后缓慢上下摇晃，让血液与抗凝剂充分混合。在采血管上做好标记，短期储存时可低温保存，若需长期储存可以放置在-4 ℃以下冰箱冰冻保存。

3.2.2 血清样品 采集血清样品可以直接使用一次性采血器进行采集。 抽取2～5 mL 血液后，将采血器的针头除去，要将活塞向后缓慢抽拉一段距离，让针管中间留有一段空气，这样有利于血清析出。将针管竖直放置试管架上，20～30 ℃环境下存放至少半小时，待血液完全凝固后析出上层血清，或将针管放入离心机中离心出血清。将血清倒入离心管，若需保存较长时间，可将血清冷冻保存。作为动物抗体水平检测用途时， 采样单上要备注好动物曾注射过的疫苗种类和名称， 以便实验室人员选择适合的检测试剂和方法。

3.3 棉拭子样品采集及保存

3.3.1 泄殖腔拭子、 咽喉拭子 开展高致病性禽流感病原学监测时，常用棉拭子对禽类的咽喉、泄殖腔部位进行采样，将棉拭子分别在两个部位擦拭、旋转后取出，放置在有病毒保存液的管内，每根管放同一羽禽类的棉拭子。若需要短途运输，可以放置在保温箱内低温储存；若需要长时间保存，可放置在-20 ℃冰箱内冷冻保存。

3.3.2 环境样品 常规采样方法是用生理盐水浸湿无菌棉拭子后，在环境（物品）表面按“Z”字形轨迹画线，边画边旋转棉拭子接触面，连续数次，画线区域尽可能覆盖环境（物品）界面[1]。 采样位置按照采样要求常在办公、生活区，养殖场区内的圈舍过道、饲槽、圈舍壁、排粪污口（沟）、饲料推车等区域。采样后将棉拭子放入保存管内，做好标记后冷冻保存。

4 采样的注意事项

采集病死动物组织样品时， 一是要在动物死亡6 h 内尽快取样； 二是取样要选取具有代表性的病变组织，同时取材应包括病灶和周边正常组织，以便作为对照；三是在运输过程中要低温保存，避免样品腐坏。

采集血液样品时， 首先若样品作为动物抗体水平检测用途时， 采样单上要备注好动物曾注射的疫苗种类和名称， 以便实验室人员选择适合的检测试剂和方法；其次血液采集的量要足够，采样量太少，血清析出少，不够检测用量，且样品反复冻融会影响检测结果，因此，血液采样量应不少于2 mL；最后对于死亡动物出现血液凝固不良、天然孔出血的情况，在排除炭疽情况之后可以采用耳尖处采血。

采样时人员要做好个人防护， 采样前应戴好医用口罩。 如遇人畜共患病时应佩戴好N95 防护口罩，穿戴好防护手套、防护服、护目镜等。人员在进出场舍时要进行消毒， 避免将其它病原微生物带入养殖栏舍内。

5 采样中存在的常见问题及应对方法

5.1 血液样品溶血 血液样品溶血是采样工作中常见的问题，血液因受剧烈振荡影响，损伤血细胞的完整性，引起溶血[2]，溶血的样品对实验室检测结果有一定的影响。 产生溶血的原因通常为采血管被污染、抽排血时速度过快、在运输过程中样品被剧烈晃动。 因此， 在血液样品采样时抽血动作速度不宜过快，采集到的样品竖直放置在试管架或者罐内。

5.2 样品保存运输不当 采样完成后，为避免样品失效，样品需妥善保存和运输。一般情况下一个容器内只放置一种样品并做好密封，防止样品漏出。采样和运输过程中，如气温较高，冷藏设备也要备好。 应该根据运输距离的远近及室外温度， 选择适当的保存措施，避免样品腐败或冻坏。

5.3 样品采集工作中细节处理不到位 采集到不符合的样品，不仅浪费人力、物力，而且无法从试验结果中了解所需要的真实、准确信息。基层采样过程中常见的细节问题有：选择了不免疫备案的养殖场；选择了刚免疫不久、抗体尚未完全产生的动物；采样单与编号不对应， 采样单上信息填写不完全等细节问题。 因此， 在采样工作开展过程中要做好工作规划，如挑选具有代表性的养殖场（户），并根据养殖场的免疫程序选择已免疫并产生了免疫应答的动物。认真填写好采样单， 采样单上信息与样品的标签要一一对应。

6 小 结

动物疫病监测是动物防疫工作中重要的一个环节。如果样品采集过程中操作不当，采集的样品被污染或者腐坏，导致试验结果不具有代表性，不利于后期工作计划的制定和开展。因此，在样品采集过程要做好合理规划，注意采样要求和个人防护。要不断钻研学习监测采样技术，完成好上级布置的任务，才能更好地促进当地畜牧业的健康发展。