癸氧喹酯和托曲珠利治疗性预防犊牛球虫病的动态效果评价

黎玉琼，于有利*，从志鹏，焦晓军，梁小军

（1.宁夏农林科学院动物科学研究所 银川 750002；2.西北农林科技大学动物医学院 陕西杨凌 712000；3.华南农业大学兽医学院 广州 510000）

牛球虫病是由牛源艾美尔球虫引起的一种全球性疾病，是导致牛腹泻的常见病原[1]。牛球虫病临床症状主要为腹泻、痢疾、里急后重、体重减少、虚弱和精神萎靡[2]，几乎所有的牛均易感球虫，1 岁以内的犊牛球虫病的发病率和死亡率较高[3]，成年牛发病率较低[4]。在我国，犊牛球虫病多发生于3月龄，因为通常2月龄的犊牛面临混群、断奶等应激导致机体免疫力低下，易感球虫病。牛感染球虫后，只有少数的牛表现出临床症状，大多数牛呈亚临床型表现[5]。牛感染球虫后，肠黏膜的功能被破坏，对肠道造成不可逆的损伤，影响牛的消化能力、降低饲料报酬、增加养殖成本，青年牛则表现为繁殖障碍等[6-7]。

牛球虫病主要通过粪-口途径在动物间传播，该病主要由于短时间内摄入大量卵囊引起的。粪便中的卵囊、污染的饲料和水源以及初乳缺乏、放养密度高、营养不良等因素均认为是重要的诱发因素[8]。通过环境卫生消毒手段对球虫病控制无明显效果，临床上经药物治疗虽可以达到杀灭体内球虫的，但是其治疗效果有限，因为球虫几乎可在肠道内完成整个生命周期，对肠道造成严重损害。治疗性预防可阻断球虫的繁殖和保护肠黏膜损伤是防治球虫病的首选方法[9]。

本研究选取具有发病史牛场的3月龄犊牛进行球虫检测，并选用托曲珠利和癸氧喹酯药物分别对犊牛球虫病进行治疗性预防,并对其疗效进行动态监测，进而评价两种药物的疗效、药物持效期，为进一步制定“定期监测、按需适时驱虫、综合评估、适时穿梭轮换用药再驱虫”高效驱虫技术提供科学依据。

1 材料

1.1 试验动物及养殖环境

选取宁夏某奶牛场72 头未使用抗球虫药物治疗且体重无差异的3月龄体重130 kg 左右的荷斯坦母犊牛。该奶牛场饲养管理、环境管理良好（运动场地大、干燥，饲养密度小，粪便清理及时），但有从同一集团球虫高污染牧场调牛史，曾有两批犊牛转入后发生临床球虫病。

1.2 主要仪器和试剂

多功能电子天平（型号为JD500-2），购自沈阳龙腾电子有限公司产品；重铬酸钾（483044），购自Sigma-Aldrich 公司产品；生理盐水（ST341），购自上海碧云天有限公司产品；6 %癸氧喹酯预混剂和5 %托曲珠利混悬液，购自浙江汇能动物药品有限公司。

2 方法

2.1 分组和给药方案

将未使用抗球虫药物治疗过的3月龄体重无差异的72 头犊牛分成3 组，每组24 头，分别为癸氧喹酯组、托曲珠利组和对照组，每组的犊牛单独饲养。初次粪检后分组，分组情况、每组阳性牛数及给药方案见表1。

表1 分组方案及给药方法

2.2 粪便采集及卵囊计数

通过刺激肛门采集新鲜粪便。各试验组所有犊牛均分别在第0、7、14、21、28、35、42、49、56、84、112 和196 天逐头采集新鲜犊牛粪便，4 ℃保存，送至实验室进行检验。根据麦克马斯特法计算每克粪便中的卵囊数（oocysts per gram of feces，OPG）：称取2 g 粪样置于干净的100 mL 烧杯内，加入8 mL 饱和食盐溶液，用玻璃棒捣碎混匀。再加入50 mL 饱和食盐溶液，混匀后立即用60 目筛网过滤。然后吸取滤液充满2 个计数室，在显微镜载物台上静置3～5 min，在10 倍物镜下镜检计数。每个计数室内有100 个方格，其体积为1 cm×1 cm×0.15 cm=0.15 cm3。待分别查完2 个计数室100 个方格内的卵囊数量n1 和n2，按照如下公式计算OPG[10]。

OPG=[( n1+ n2)/(2×0.15)]×60÷2

2.3 体重变化监测

不同分组的犊牛分别在第0、7、14、21、28、35、42、49、56、84、112 和196 天进行称重，计算各组犊牛的平均增重变化。

2.4 数据的统计分析

利用SPSS 23.0 软件对试验数据进行统计分析，试验数据以“平均值±标准误”表示。采用卡方检验对结果进行差异显著性分析，p＜0.05 表示差异显著，p＜0.01 表示差异极显著，p＞0.05 表示差异不显著。

3 结果与分析

3.1 球虫卵囊数量变化检测

通过对用药前后球虫卵囊检测并分析，结果如表2所示，用药后第7 天，癸氧喹酯组和托曲珠利组阳性犊牛数量均减少为1 头，卵囊排出率均为4.17 %，癸氧喹酯组平均OPG 为400，托曲珠利组平均OPG 为100，阴性对照组阳性犊牛数量为6 头，卵囊排出率为25 %，平均OPG 为217。用药后第14 天，癸氧喹酯组犊牛球虫阳性数为0 头，卵囊排出率为0.00 %，平均OPG 为0，托曲珠利组犊牛球虫阳性数为1 头，卵囊排出率为4.17 %，平均OPG 为100。从第14—49 天，癸氧喹酯组阳性犊牛数一直为0 头，卵囊排出率为0.00 %，平均OPG 为0；托曲珠利组阳性犊牛第7—28 天，阳性犊牛数为1 头，卵囊排出率均为4.17 %，平均OPG 为100，从35—49 天托曲珠利组阳性犊牛数为2 头，卵囊排出率均为8.33 %，平均OPG 从150 增加到300。从56—196 天，各组阳性犊牛数、卵囊排出率和OPG 均呈现增加的趋势，癸氧喹酯组阳性犊牛数5～7 头，卵囊排出率为20.83 %～29.17 %，平均OPG 560～807；托曲珠利组阳性犊牛数4～8 头，卵囊排出率为16.67 %～33.33 %，平均OPG 425～1,394。对照组从0—196 天，阳性犊牛数量从6 头增加到11 头，卵囊排出率从25 %增加到45.83 %，平均OPG 从167 增加到1,123。

表2 不同组犊牛球虫检测结果

在整个试验周期内，对照组阳性犊牛头数呈现增长趋势，2 组药物治疗组阳性犊牛头数先减少后增加，但是均显著低于对照组（图1）。不同组卵囊排出总量与阳性犊牛头数变化趋势一致，呈线性相关（图2）。

图1 不同组阳性犊牛头数及卵囊排出率统计

图2 不同组阳性牛卵囊排出量及变化趋势

3.2 体重变化

通过对不同组犊牛体重变化分析，结果见表3所示，试验开始后0—35 天，各组犊牛体重均无差异（p＞0.05）；试验第49 天，癸氧喹酯组与对照组犊牛体重相比差异显著（p＜0.05），托曲珠利组和对照组犊牛体重相比差异不显著（p＞0.05）；试验第56 天，托曲珠利组与对照组犊牛体重相比差异显著（p＜0.05），癸氧喹酯组与对照组犊牛体重相比差异显著（p＜0.05）；试验第84、112 和196 天癸氧喹酯组和托曲珠利组犊牛体重均与对照组相比差异极显著（p＜0.01）；整个试验周期内癸氧喹酯组和托曲珠利组犊牛体重相比均无差异（p＞0.05）。

表3 不同时间点不同组犊牛体重变化

4 讨论

随着规模化奶（肉）牛养殖业迅猛发展，由艾美尔球虫等寄生虫感染引起的奶（肉）牛腹泻和呼吸道疾病发病率和死亡率急剧攀升，严重威胁着奶（肉）牛产业和地区经济的发展。球虫感染前期使用药物抑制卵囊排出是控制球虫病的最有效途径，因此预防牛球虫病，牛群应该进行早期的药物预防而非发病后治疗。当出现临床症状或排出虫卵时，球虫已经损伤肠道并完成繁殖过程[6]。为了阻止球虫的大量繁殖及随后的黏膜损伤，选用的预防药物必须可以破坏寄生虫的早期阶段如裂殖生殖阶段。癸氧喹酯属喹啉类抗球虫药，主要作用是阻碍球虫子孢子发育，具有广谱抗球虫活性，可用于防治各类球虫病，用药时间一般需要覆盖球虫的整个生命周期[6,10]。托曲珠利对球虫的作用时期较广泛，对球虫的两个无性周期均有作用，如抑制裂殖体、小配子体的核分裂和小配子体的壁形成体过程。口服托曲珠利口服一次，不仅可以治疗球虫病而且可促进动物获得球虫终生免疫力。因此从临床实践中验证药物的作用效果可为预防球虫病的暴发和制定有效的用药程序提供科学依据。

本研究利用癸氧喹酯和托曲珠利分别治疗犊牛7 d 后发现癸氧喹酯组和托曲珠利组的犊牛球虫感染率显著低于对照组，表明两种药物对球虫均有有效的抑制和杀灭作用。在用药后30 天到第49 天时，癸氧喹酯组犊牛一直无球虫卵囊排出，OPG 值和感染率均为0；同时期仅给药一次的托曲珠利组，犊牛球虫感染头数增加，OPG 值和球虫感染率也呈上升趋势，表明持续给药的癸氧喹酯组在治疗性预防方面效果优于托曲珠利组；用药后第56 天至196 天，三组犊牛的球虫阳性头数、卵囊排出率、卵囊排出总量及平均OPG 值均呈现上升趋势，但癸氧喹酯组和托曲珠利组的各指标均明显低于阴性对照组，两个给药组之间差异不显著。根据给药疗程和试验结果，可推算出癸氧喹酯药物治疗性预防的周期约为19 d，托曲珠利药物治疗性预防的周期约为49 d。本研究同时证明了托曲珠利在用药1 次后能在一定程度上而不是完全抑制球虫卵囊的排出，后期仍会发生球虫病，因此托曲珠利不能达到一次用药，终生免疫的效果。另外，托曲珠利仅能通过灌服方式进行给药，不适用于体型较大的犊牛，而癸氧喹酯可通过拌料的方式饲喂，更便于给药。

通过统计分析不同组犊牛体重变化发现试验第49 天到196天，癸氧喹酯组和托曲珠利组均与阴性对照组犊牛体重相比差异显著，药物治疗性预防后的犊牛体重增加量明显高于对照组，尤其在治疗后期更明显，而整个治疗周期中癸氧喹酯组和托曲珠利组犊牛体重相比均无差异。究其原因可能是由于对照组犊牛一直处于球虫感染状态，严重影响犊牛的消化能力，降低饲料报酬。连续使用同种抗球虫药物则会产生耐药性，因此在治疗犊牛球虫病时应选取多种药物轮换或穿梭使用，不可长期使用同类药物[5]。预防球虫病不能仅依赖药物治疗，准确的诊断和流行病学调查也是科学合理控制球虫病的前提[11,12]。■