上海地区犬钩端螺旋体病流行病学调查

孙 毅 叶俊华

为了调查上海地区犬钩端螺旋体病流行情况，采用显微镜凝集试验(MAT)判断犬血清抗体对应的钩端螺旋体血清型的方法，对上海地区采集到的276 份犬血清样品进行钩端螺旋体流行病学调查与分析。血清学试验结果显示，阳性率为11.96%（33/276），上海地区主要流行的钩端螺旋体血清型是黄疸出血赖型、犬型、拜伦型、秋季型、澳洲型和巴叶赞型。

钩端螺旋体病是由钩端螺旋体属的不同血清型致病性钩体引起的一种常见的人兽共患传染病。钩端螺旋体病存在于世界各地诸多国家，钩端螺旋体病对我国的侵害也很严重。人类和动物在感染了致病性钩端螺旋体后会表现出不同的临床症状，例如，易被忽视的流感症状，较为严重的黄疸、肺出血，甚至是多器官衰竭和死亡。钩端螺旋体病是一种全球性的人畜共患病，在过去的早些年间，钩端螺旋体病曾在户外运动和自然灾害面前暴发过。随着流行范围的不断扩大，钩端螺旋体病造成的危害也越来越多。自1915年分离出钩端螺旋体以来，已鉴定出64 个不同的种类，其中17 种致病性钩端螺旋体，超过260 种血清型，且不同血清型之间无交叉免疫。上海地区养宠物犬数量庞大，但缺乏对犬钩端螺旋体流行情况的相关调查。所以对钩端螺旋体病进行流行病学调查，明确不同地区钩端螺旋体血清型分布对预防人和动物的钩端螺旋体病具有公共卫生学意义。

一、材料与方法

（一）材料

1.样品来源

2021年3 月至2022年12 月在上海地区多家宠物医院收集犬血液样本，在样本收集过程中，采取无差别广泛性收样方式，不对品种、年龄、某种疾病做统一要求，仅记录犬的年龄、性别。收集的血液置于无菌EP 管中，冰箱4℃保存，离心后收集血清，冰箱-20℃保存。

2.实验菌株

15 株钩端螺旋体标准菌株：黄疸出血赖型（56601）、爪哇型（56602）、犬型（56603）、拜伦型（56604）、致热型（56605）、秋季型（56606）、澳洲型（56607）、波摩那型（56608）、临型（56609）、七日热型（56610）、巴叶赞型（56612）、塔拉索夫型（56613）、清水型（56615）、乌尔夫型（56635）、明尼型（56655），来自吉林大学动物医学院实验室长期传代保存。

3.实验仪器、试剂和耗材

实验仪器、试剂和耗材使用及购自吉林大学动物医学院实验室。

（二）方法

1.显微镜凝集试验（MAT）检测抗体

准备15 种不同型的钩端螺旋体菌株作为抗原，培养至2×108 钩体/mL 备用。将待检血清置于56℃水浴30 min，除去血清中的补体，用生理盐水将血清以1∶25稀释后使用；将50µl 生理盐水加到96 孔V 型板的第一行第一孔，再加50µl 生长良好的钩端螺旋体菌液，作阴性抗原对照。将50µl 阴性兔血清和50µl 钩端螺旋体菌液加到96 孔V 型板的第二行第一孔，作阴性血清对照。从第三行开始，每孔加入50µl 抗原+50µl待检血清。每列一种血清型钩体，每行一个待检血清。加完后置于37℃反应2h。孵育结束，取出96 孔V型板，轻轻摇晃，用移液枪吸5µl 反应液制片，逐孔在暗视野显微镜下观察结果，结果判定标准是：与对照组相比，有50%钩端螺旋体凝集，则为阳性；有时，钩端螺旋体与血清中的抗体发生凝集后，视野内观察不到钩端螺旋体，那么钩端螺旋体菌数低于50%的孔记为阳性。

2.数据分析

运用SPSS 软件对实验结果进行统计分析，以p＜0.05 为差异具有统计学意义的判断标准来检测年龄和性别与犬钩端螺旋体感染率之间是否有差异。

二、结果

（一）血清样本采集

在上海地区多家动物医院共采集、分离到血清样本276 份，犬的年龄和性别统计见表1。

表1 犬年龄、性别统计

（二）显微镜凝集试验（MAT）对阳性血清的检测与分析

1.MAT 检测结果

在276 份犬血清样本中，共检测出阳性样本33个，总阳性率为11.96%。阳性血清样本为黄疸出血赖型（3/33）、犬型（2/33）、拜伦型（13/33）、澳洲型（10/33）、巴叶赞型（2/33），见表2。

表2 各血清型阳性样本统计

2.个体因素对阳性率的影响

犬年龄和性别与犬钩端螺旋体血清阳性率情况如表3 所示。在犬年龄方面，成年犬（1～7 岁）钩端螺旋体阳性率最高，与小于1岁的幼犬相差8.5%，与大于7 岁的老年犬相差9.05%，差异无统计学意义（P＞0.05）。雄、雌犬患钩端螺旋体阳性率相差1.83%，差异无统计学意义（P＞0.05）。

表3 上海市犬钩端螺旋体感染情况

三、讨论

通过血清学的方法对上海地区犬的钩端螺旋体病进行流行病学调查，MAT 结果显示上海地区主要流行的钩端螺旋体血清型是黄疸出血赖型、犬型、拜伦型、秋季型、澳洲型和巴叶赞型。拜伦型和澳洲型阳性率最高，说明上海地区存在拜伦型和澳洲型钩端螺旋体。上海地区犬钩端螺旋体感染率较高，不同性别和年龄之间不存在统计学意义（P＞0.05），这表明无论犬的雌雄和老幼均有感染钩端螺旋体病的风险，发病概率几乎无差异。

其他相关犬钩端螺旋体流行病学表明，2010年，美国伊利诺斯对犬钩端螺旋体病进行流行病学调查，感染率1.80%。2006～2009年江西省宜春市对犬钩端螺旋体病进行流行病学调查，感染率为4.95%。2017～2019年北京地区对犬钩端螺旋体病进行流行病学调查，感染率3.01%，2019年遵义市对犬钩端螺旋体病进行流行病学调查，感染率5%。2017～2019年江西对犬钩端螺旋体病进行流行病学调查，感染率5.95%。综上发现，上海地区犬钩端螺旋体感染率11.96%，相对较高，因此，犬钩端螺旋体病具有较大的感染风险，要引起足够重视。

目前市面上针对犬钩端螺旋体病的疫苗主要是黄疸出血赖型和犬型，犬在注射疫苗后，血清应检测到黄疸出血赖型和犬型两种抗体。但通过此次流行病学调查发现，这两种血清型在阳性样品中占比仅有15.15%（5/33），当然这不排除是因打疫苗导致血清中有黄疸出血赖型和犬型的抗体的原因。如果使用包含黄疸出血赖型、犬型、拜伦型和澳洲型的四联疫苗，可提供大于80%的保护率。本次流行病学调查为犬钩端螺旋体疫苗的搭配设计提供了一个参考，在上海地区，犬接种包含黄疸出血赖型、犬型、拜伦型和澳洲型的四联疫苗可提供极大的保护率。

本次调查表明上海地区存在犬钩端螺旋体病的流行，并且阳性率较高，犬主对人畜共患的钩端螺旋体病的防疫意识不足。犬钩端螺旋体病的预防疫苗也不应局限在黄疸出血赖型和犬型，应该添加当地流行的其他钩端螺旋体的血清型。为加强公共卫生安全，保障人类和宠物犬的健康，预防人畜共患病的发生，政府及社区需加强对钩端螺旋体病的危害科普力度，对犬类接种疫苗的工作加大宣传，让广大犬主知悉控制钩端螺旋体病重要的一环仍然是接种疫苗，增强人们预防疾病的意识，从而降低钩端螺旋体病带来的风险。