犬细小病毒病的流行特点及实验室诊断概述

王鹤澎

犬细小病毒病是犬病中一种具有高度接触性传染的烈性传染病，是由犬细小病毒(CPV)引起的。1982年，犬细小病毒病出现在我国的东北、华东和西南等地区，主要发生在警犬和良种犬中。随着中国养犬数量的增加，犬细小病毒病的发病率也呈现上升趋势，给我国养犬业与宠物行业的发展造成了极大的危害。感染CPV 的犬会在3～7 天内发病，表现为严重的肠胃炎、精神萎靡、嗜睡、呕吐和发烧。CPV 也会影响心肌细胞，导致急性心力衰竭，通常犬会在出生后8 周内猝死。该病毒具有高度传染性，可通过粪口途径和无生命物体传播。据了解，即使在接种过疫苗的犬舍中也会出现CPV 感染。目前已开发出几种疗法来治疗这种疾病，但这些疗法在可用性和成本方面都有其自身的局限性，且在诊断以及预防领域仍需要进一步改进，以解决与犬细小病毒病相关的问题。

一、病原特性

CPV 属于细小病毒属，是自然界内已知最小的病毒之一，其病毒粒子直径为21～24nm，外观呈圆形或六边形。CPV 结构简单无囊膜，为线形、单股负链DNA病毒，其基因组大小大约为5KB，包含两个开放阅读框（ORF）。一个ORF 编码两种非结构蛋白（NS1 和NS2），另一个编码两种囊膜蛋白（VP1 和VP2）。

最初的病毒株被命名为犬细小病毒 2 型（CPV-2），以区别于犬微小病毒（CPV-1），后者在基因上与CPV-2 无关。由于它的单链结构，细小病毒的突变率更接近RNA 病毒，所以CPV-2 出现几年后，在1979年病毒的原始类型就被一种新的基因和抗原变异体所取代，也就是CPV-2a，其主要保护性抗原蛋白（VP2）的5 ～6 个氨基酸位置与原型不同。1984年，也发现了CPV-2b 的存在，即VP2蛋白发生了进一步的突变，它们两者的区别是只有一个氨基酸的差异（在第426 个氨基酸残基上，天冬酰胺突变为天冬氨酸）。有报道称在2000年出现了第三种类型CPV-2c，其 VP2 蛋白的第426 个氨基酸残基的天冬酰胺/天冬氨酸变为谷氨酸。这3 种变种在全球范围内分布不一。

CPV 在环境中无处不在，并且可以在有利条件下存活1年以上。同时对不良环境的抵抗力非常强，即使在高温或者低温环境中也有一定的耐受力，比如在56℃能生存24 ～ 36 小时，在4℃能生存8 个月。并且CPV 对多种理化因素和常用消毒剂具有较强的抵抗力，如酒精、乙醚、醇类混合物以及氯仿，但福尔马林、氧化剂、次氯酸钠和强光照作用可将其灭活。

二、流行特点

CPV 具有极强的传染性，在收容所、宠物店和繁殖犬舍的发病率极高，潜伏期一般是3 ～7 天。本病的主要传染源为感染CPV 的犬，其粪便、尿、唾液和呕吐物均带病毒。感染通常是通过粪口途径，即通过接触受感染的犬的粪便或受污染的表面而获得感染。该病的特征是临床病程快，死亡通常发生在非受保护宿主出现体征后2～3 天。

自CPV-2 在中国被证实以来，该病呈地方流行趋势，发病率和死亡率各不相同。自20 世纪70年代发现CPV 以来，该病的总体发病率有所下降，抗体水平保持稳定。但CPV 毒性显著增强，对动物的破坏性更大，动物死亡率显著上升，这在很大程度上可能是由于新出现的CPV 抗原变异所致。根据季节变化，犬细小病毒病全年都会发生。在中国不同地区，发病率随季节而变化，其中春季、秋末和初冬感染更为严重，这可能与这些季节的昼夜温差大、气候多变以及犬和人的户外活动频率有关。

所有年龄段的犬都可能感染CPV，但CPV 的阳性率因犬的年龄而异。CPV 严重感染最常见于2 ～ 4 个月大的幼犬，1个月以下的犬发病率低很可能是由于获得了母源抗体，而4 个月以上的犬发病率低很可能是由于适应性免疫反应的发展。所有品种都易患该病，尽管混合品种被描述为比许多纯种品种更不易感。在CPV 确诊病例中，纯种犬的发病率最高，远高于杂交犬和土生犬，原因是越来越多的纯种犬被主人重视、及时送医。此外，杂交犬和本地犬对CPV 的抵抗力更强的原因可能是这些犬能更好地适应当地的气候和环境。公犬和母犬都可能感染CPV，但公犬的发病率更高，这与中国的犬类市场有关，大多数宠物店主要出售公犬，因为公犬的繁殖数量高于母犬，导致这些公犬的感染率较高。

三、致病机制

CPV 一旦进入体内，几天后即可被释放到血液中，再通过血液复制到局部淋巴组织，最后感染含有快速分裂细胞的其他器官，如骨髓、肠上皮隐窝细胞、口腔和心肌细胞。CPV 被健康犬摄入两天后，就在咽部淋巴组织和肠系膜淋巴结内复制。在感染后3～5 天内，病毒的数量达到峰值，并优先影响肠上皮组织和淋巴组织，并引发病毒血症。在宿主生命的前2 周中，心肌细胞的活跃分裂使病毒复制，导致心肌坏死和心肌炎。在年龄稍大的幼犬中，病毒在肠腺的生殖上皮进行复制，损坏小肠绒毛隐窝。肠隐窝细胞的丧失导致绒毛萎缩，形成嗜酸性核内包涵体，进一步导致吸收和消化能力降低，导致呕吐和腹泻等临床症状，严重感染的幼犬肠腔内可能发生大量出血。CPV也可导致淋巴细胞死亡，进而使淋巴细胞减少，甚至导致泛白细胞减少症。缺乏免疫力，再加上肠道细菌易位导致的菌血症，如果不及时治疗，患病犬极有可能出现脓毒性休克、全身炎症反应综合征、多器官衰竭和死亡。

四、实验室诊断

在犬舍和收容所中，快速诊断CPV 感染尤为重要，以便隔离受感染的犬，防止易感动物继发感染。临床诊断并不明确，其他几种病毒病原体也可能导致犬腹泻，如冠状病毒、腺病毒、轮状病毒。因此，临床疑似病例应始终通过实验室检测来确认。目前已开发出几种CPV 感染的实验室诊断方法，包括传统方法、基于免疫学的检测方法和基于分子的检测方法。

（一）传统方法

通过细胞培养技术分离病毒是诊断的金标准方法，虽然具有高度特异性，但费时、费力且昂贵，而且需要熟练的专业人员，因此应用范围窄。

电子显微镜鉴别CPV 形态的灵敏度很低，不过可以通过免疫电子显微镜技术中的特异性抗体浓缩病毒颗粒，提高灵敏度。使用电子显微镜的缺点是需要高病毒载量才能进行检测，且需要技术熟练的人员。

（二）免疫学检测

目前已开发出多种免疫学方法用于直接鉴定CPV，包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、乳胶凝集试验（LAT）、玻片抑制试验-玻片凝集试验（SIT-SAT）、血凝试验（HA）、荧光抗体试验（FAT）等。这些实验室方法大多用于检测 CPV 特异性抗原或抗体。

ELISA 是临床医生和从业人员最常用的检测方法，用于从感染犬的粪便和血液中发现CPV。ELISA 用于检测和定量抗原和目标特异性抗体，可以一次性检测大量样本，国内外已研制出多种试剂盒用于临床，但易出现假阴性及假阳性结果。

LAT 是一种从体液中检测抗原或抗体的临床方法，在玻片上进行，可以在短时间内完成，判定结果容易，适用于现场检测。

SIT 用于抗体分型，SAT 用于抗原检测。这种检测方法成本低、操作简便，不需要熟练的专业人员。虽然LAT 和SITSAT 方法具有成本效益，但无法在市场上买到。

血凝试验（HA）是一种滴定病毒的免疫学方法，依据的是病毒与红细胞表面受体结合并导致病毒凝集的能力。此方法操作简单、快速，适合大量样本的快速检测，但是由于HA检测需要新鲜红细胞，若红细胞的存放和管理不善，可导致结果敏感性较差，还容易出现假阳性结果。

FAT 检测分为两种，一种是直接荧光抗体检测，另一种是间接荧光抗体检测，敏感性与ELISA 相当，但被检病料的来源具有一定的局限性，用于死后检测CPV。

免疫胶体金技术具有成本较低、稳定性好、反应速度快等优势，是宠物临床上使用最广泛的一种检测手段。但是，这种方法的灵敏度较低，特异性不高。

（三）分子检测

早在 20 世纪 90年代初就有了核酸杂交检测法。随后，又开发出几种PCR 检测方法，与传统方法相比，灵敏度和特异性都有所提高。针对CPV 开发的分子检测方法包括聚合酶链式反应（PCR）、实时荧光定量PCR （RT-PCR）、多重 PCR（mPCR）、多肽核酸检测法（PNA）、绝缘等温 PCR 法（II-PCR）、环介导等温扩增法（LAMP）、聚合酶螺旋反应（PSR）、重组酶聚合酶扩增检测法（RPA）等。这些检测方法大多能够检测粪便和血液样本中的CPV，并具有高灵敏度及特异性。目前临床最常用的分子方法为PCR 及RT-PCR。

PCR 是一种广泛使用的革命性体外平台，用于检测和定量来自不同来源的各种病原体。PCR 技术还可用于扩增无法培养的病原体。PCR 一般应用于怀疑CPV 感染但通过免疫胶体金检测板无法检测时。由于PCR 检测基于特定的引物对，因此具有高度特异性，使其能区分野毒感染和疫苗接种。

基于TaqMan 技术开发了RT-PCR 检测方法，用于快速、特异、灵敏地检测CPV DNA。与传统PCR 相比，可在1 小时或更短时间内检测目标基因，比传统PCR 快得多。不过，这种检测方法比较昂贵，需要专业实验室才能进行检测。

五、 结语

本文总结了犬细小病毒病的病原特性、流行特点、发病机理和实验室诊断，为犬细小病毒病的诊断及控制提供了理论依据。未来的研究应更多地关注CPV 的结构生物学及分子致病机理，并基于此开发快速、低成本检测系统，实现对犬细小病毒病临床快速诊断。开发出经济实惠的新型疫苗和治疗方法，提高犬细小病毒病应对能力，从而降低该病的发生率及死亡率。